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猪源抗菌肽PBD-1在毕赤酵母中的表达及鉴定
被引量：
7
1
作者
江学斌
陈嘉蔚
+8 位作者
杨军
刘顺枝
肖安吉
卢志鹏
楚品品
黄朝远
蔡海明
马苗鹏
张玲华
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第3期644-649,共6页
本试验旨在实现猪β防御素1(poricine-β-defensin 1,PBD-1)在毕赤酵母中的表达,获得有抗菌活性的抗菌肽PBD-1。根据PBD-1的氨基酸序列和酵母密码子偏好性,设计优化其核苷酸序列,利用SOE-PCR技术获得PBD-1基因序列,克隆到毕赤酵母表达载...
本试验旨在实现猪β防御素1(poricine-β-defensin 1,PBD-1)在毕赤酵母中的表达,获得有抗菌活性的抗菌肽PBD-1。根据PBD-1的氨基酸序列和酵母密码子偏好性,设计优化其核苷酸序列,利用SOE-PCR技术获得PBD-1基因序列,克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-PBD-1,经SacⅠ线性化后转入毕赤酵母SMD1168中。PCR筛选得到阳性酵母表达菌株,经甲醇诱导后得到分子质量约4.5ku的抗菌肽PBD-1。抗菌特性研究结果表明,表达产物抗菌肽PBD-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌均有较好的抑制效果。
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关键词
PBD-1基因
表达
毕赤酵母
PCR
在线阅读
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职称材料
猪PR39真核表达载体构建
被引量：
1
2
作者
江学斌
陈嘉蔚
+5 位作者
杨军
胡位荣
肖安吉
卢志鹏
楚品品
张玲华
《广东农业科学》
CAS
2016年第3期148-151,共4页
为构建猪源抗菌肽PR39的高效表达真核载体pVAX1-PR39,通过猪股骨骨髓组织基因组RNA合成c DNA,根据PR39基因全长序列,设计高效表达启动子,利用PCR扩增获得PR39全长基因,连接到真核载体pVAX1,构建重组载体pVAX1-PR39。转化大肠杆菌DH5α...
为构建猪源抗菌肽PR39的高效表达真核载体pVAX1-PR39,通过猪股骨骨髓组织基因组RNA合成c DNA,根据PR39基因全长序列,设计高效表达启动子,利用PCR扩增获得PR39全长基因,连接到真核载体pVAX1,构建重组载体pVAX1-PR39。转化大肠杆菌DH5α后进行菌落PCR鉴定和测序,测序结果与NCBI网站上猪源抗菌肽PR39基因序列完全一致,表明已成功构建了猪PR39的真核表达载体,理论上所构建的PR39表达载体能够提高猪的免疫能力。
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关键词
抗菌肽
PR39
真核表达
载体
PVAX1
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职称材料
猪SIRT1基因的克隆、表达及多克隆抗体制备
3
作者
江学斌
马苗鹏
+5 位作者
肖淑君
司徒嘉欣
杨军
施巨清
蔡海明
张玲华
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期80-84,共5页
根据GenBank中猪SIRT1mRNA序列设计引物,使用杜大长商品猪大脑RNA经RT-PCR扩增得到猪SIRT1基因全长表达序列,通过Ω-PCR将SIRT1蛋白末端抗原表位序列插入载体pET-28a(+),在大肠杆菌中表达并纯化得到45ku大小的蛋白,以其免疫新西兰大白...
根据GenBank中猪SIRT1mRNA序列设计引物,使用杜大长商品猪大脑RNA经RT-PCR扩增得到猪SIRT1基因全长表达序列,通过Ω-PCR将SIRT1蛋白末端抗原表位序列插入载体pET-28a(+),在大肠杆菌中表达并纯化得到45ku大小的蛋白,以其免疫新西兰大白兔并制备出抗体滴度达212的多克隆抗体。结果表明,成功制备出可以特异性识别猪SIRT1蛋白的抗体。
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关键词
猪
SIRT1
PCR
多克隆抗体
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职称材料
题名
猪源抗菌肽PBD-1在毕赤酵母中的表达及鉴定
被引量：
7
1
作者
江学斌
陈嘉蔚
杨军
刘顺枝
肖安吉
卢志鹏
楚品品
黄朝远
蔡海明
马苗鹏
张玲华
机构
广州大学生物工程研究所
华南农业
大学
生命科学学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第3期644-649,共6页
基金
广州市属高校科技计划项目(1201420755)
文摘
本试验旨在实现猪β防御素1(poricine-β-defensin 1,PBD-1)在毕赤酵母中的表达,获得有抗菌活性的抗菌肽PBD-1。根据PBD-1的氨基酸序列和酵母密码子偏好性,设计优化其核苷酸序列,利用SOE-PCR技术获得PBD-1基因序列,克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-PBD-1,经SacⅠ线性化后转入毕赤酵母SMD1168中。PCR筛选得到阳性酵母表达菌株,经甲醇诱导后得到分子质量约4.5ku的抗菌肽PBD-1。抗菌特性研究结果表明,表达产物抗菌肽PBD-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌均有较好的抑制效果。
关键词
PBD-1基因
表达
毕赤酵母
PCR
Keywords
PBD-1gene
expression
Pichia pastoris
PCR
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
猪PR39真核表达载体构建
被引量：
1
2
作者
江学斌
陈嘉蔚
杨军
胡位荣
肖安吉
卢志鹏
楚品品
张玲华
机构
广州大学生物工程研究所
华南农业
大学
生命科学学院/广东省农业
生物
蛋白质功能与调控重点实验室
出处
《广东农业科学》
CAS
2016年第3期148-151,共4页
基金
广州市属高校科技计划项目(12014 20755)
文摘
为构建猪源抗菌肽PR39的高效表达真核载体pVAX1-PR39,通过猪股骨骨髓组织基因组RNA合成c DNA,根据PR39基因全长序列,设计高效表达启动子,利用PCR扩增获得PR39全长基因,连接到真核载体pVAX1,构建重组载体pVAX1-PR39。转化大肠杆菌DH5α后进行菌落PCR鉴定和测序,测序结果与NCBI网站上猪源抗菌肽PR39基因序列完全一致,表明已成功构建了猪PR39的真核表达载体,理论上所构建的PR39表达载体能够提高猪的免疫能力。
关键词
抗菌肽
PR39
真核表达
载体
PVAX1
Keywords
antimicrobial peptide
PR39
eukaryotic expression
vector
pVAX1
分类号
S813-3 [农业科学—畜牧学]
S828 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
猪SIRT1基因的克隆、表达及多克隆抗体制备
3
作者
江学斌
马苗鹏
肖淑君
司徒嘉欣
杨军
施巨清
蔡海明
张玲华
机构
广州大学生物工程研究所
华南农业
大学
生命科学学院/广东省农业
生物
蛋白质功能与调控重点实验室
出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期80-84,共5页
基金
广东省农业攻关项目(2012B020305007)
广东省教育部产学研结合项目(2011B090400471)
文摘
根据GenBank中猪SIRT1mRNA序列设计引物,使用杜大长商品猪大脑RNA经RT-PCR扩增得到猪SIRT1基因全长表达序列,通过Ω-PCR将SIRT1蛋白末端抗原表位序列插入载体pET-28a(+),在大肠杆菌中表达并纯化得到45ku大小的蛋白,以其免疫新西兰大白兔并制备出抗体滴度达212的多克隆抗体。结果表明,成功制备出可以特异性识别猪SIRT1蛋白的抗体。
关键词
猪
SIRT1
PCR
多克隆抗体
Keywords
porcine
SIRT1
PCR
polyclonal antibody
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S828 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪源抗菌肽PBD-1在毕赤酵母中的表达及鉴定
江学斌
陈嘉蔚
杨军
刘顺枝
肖安吉
卢志鹏
楚品品
黄朝远
蔡海明
马苗鹏
张玲华
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪PR39真核表达载体构建
江学斌
陈嘉蔚
杨军
胡位荣
肖安吉
卢志鹏
楚品品
张玲华
《广东农业科学》
CAS
2016
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
猪SIRT1基因的克隆、表达及多克隆抗体制备
江学斌
马苗鹏
肖淑君
司徒嘉欣
杨军
施巨清
蔡海明
张玲华
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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