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幽门螺杆菌napA基因的克隆、表达及免疫反应性分析
1
作者
罗军
龙北国
+4 位作者
李妍
赖建平
胡平
张文炳
龙敏
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期395-398,共4页
目的构建高效表达幽门螺杆菌（Hp）中性粒细胞激活蛋白（NAP）的原核表达系统,为Hp候选疫苗研制打下基础。方法从Hp标准株NCTC11639染色体DNA中扩增napA基因片段,T-A克隆后测序,与GenBank公布的其他Hp菌株的napA基因序列进行比较。目的...
目的构建高效表达幽门螺杆菌（Hp）中性粒细胞激活蛋白（NAP）的原核表达系统,为Hp候选疫苗研制打下基础。方法从Hp标准株NCTC11639染色体DNA中扩增napA基因片段,T-A克隆后测序,与GenBank公布的其他Hp菌株的napA基因序列进行比较。目的基因片段酶切后,与表达载体连接,转化至宿主菌,构建napA基因原核表达系统pGEX-4T-1-napA-E.coli Top10。优化诱导表达条件,采用SDS-PAGE鉴定表达产物,GST亲和层析纯化收集重组NAP蛋白,Western blot法鉴定重组NAP的免疫性;采用ELASA法检测胃癌患者Hp阳性血清中抗NAP抗体效价,通过间接ELASA法从29株小鼠抗Hp全菌单克隆抗体（mAb）中筛选抗Hp-NAP mAb。结果所克隆的napA基因全长为435bp,在GenBank上登录（No.DQ341279）,与GenBank公布的其他Hp菌株的核苷酸同源性为94%～98%,与国际测序模式株Hp26695、HpJ99同源性达97%,表达的NAP融合蛋白的相对分子质量（Mr）为44000,1mmol/L浓度IPTG诱导4h表达产物量较高,表达产物可被Hp感染患者的血清及兔抗Hp全菌抗体特异性结合,胃癌患者血清中抗NAP抗体效价高于正常人群血清,29株小鼠抗Hp全菌mAb中有3株mAb能与NAP发生强免疫反应。结论成功构建napA基因高效可溶性原核表达系统,重组NAP具有良好的免疫反应性,NAP在胃癌患者血清中高表达可能与胃癌的发病有关,NAP是具有良好前景的抗原。
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关键词
幽门螺杆菌
NAP
克隆
基因表达
免疫反应
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题名
幽门螺杆菌napA基因的克隆、表达及免疫反应性分析
1
作者
罗军
龙北国
李妍
赖建平
胡平
张文炳
龙敏
机构
南方医科
大学
公共卫生与热带医学
学院
微生物学
系
南方医科
大学
生物技术
学院
热带病学研究室
广州大学化学化工学院食品科学系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期395-398,共4页
基金
广州市科技攻关基金资助项目(2007年)
文摘
目的构建高效表达幽门螺杆菌（Hp）中性粒细胞激活蛋白（NAP）的原核表达系统,为Hp候选疫苗研制打下基础。方法从Hp标准株NCTC11639染色体DNA中扩增napA基因片段,T-A克隆后测序,与GenBank公布的其他Hp菌株的napA基因序列进行比较。目的基因片段酶切后,与表达载体连接,转化至宿主菌,构建napA基因原核表达系统pGEX-4T-1-napA-E.coli Top10。优化诱导表达条件,采用SDS-PAGE鉴定表达产物,GST亲和层析纯化收集重组NAP蛋白,Western blot法鉴定重组NAP的免疫性;采用ELASA法检测胃癌患者Hp阳性血清中抗NAP抗体效价,通过间接ELASA法从29株小鼠抗Hp全菌单克隆抗体（mAb）中筛选抗Hp-NAP mAb。结果所克隆的napA基因全长为435bp,在GenBank上登录（No.DQ341279）,与GenBank公布的其他Hp菌株的核苷酸同源性为94%～98%,与国际测序模式株Hp26695、HpJ99同源性达97%,表达的NAP融合蛋白的相对分子质量（Mr）为44000,1mmol/L浓度IPTG诱导4h表达产物量较高,表达产物可被Hp感染患者的血清及兔抗Hp全菌抗体特异性结合,胃癌患者血清中抗NAP抗体效价高于正常人群血清,29株小鼠抗Hp全菌mAb中有3株mAb能与NAP发生强免疫反应。结论成功构建napA基因高效可溶性原核表达系统,重组NAP具有良好的免疫反应性,NAP在胃癌患者血清中高表达可能与胃癌的发病有关,NAP是具有良好前景的抗原。
关键词
幽门螺杆菌
NAP
克隆
基因表达
免疫反应
Keywords
Helicobacter pylori
neutrophil-activating protein
cloning
gene expression
immunoreaction
分类号
R378.99 [医药卫生—病原生物学]
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作者
出处
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1
幽门螺杆菌napA基因的克隆、表达及免疫反应性分析
罗军
龙北国
李妍
赖建平
胡平
张文炳
龙敏
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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