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山奈酚抑制人胆囊癌细胞增殖及其对mTORC1通路的影响 被引量:11
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作者 侯敬申 梁颖涛 +1 位作者 王伟雄 赵莉 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期419-425,共7页
目的:探讨山奈酚对人胆囊癌细胞(SGC-996细胞)增殖的影响及其机制.方法:采用浓度为0、25、50、75、100、125、150、175μmol/L的山奈酚干预SGC-996细胞24、48、72h后,CCK-8法检测SGC-996细胞的体外增殖能力;干预48h后,流式细胞仪检测细... 目的:探讨山奈酚对人胆囊癌细胞(SGC-996细胞)增殖的影响及其机制.方法:采用浓度为0、25、50、75、100、125、150、175μmol/L的山奈酚干预SGC-996细胞24、48、72h后,CCK-8法检测SGC-996细胞的体外增殖能力;干预48h后,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测P-S6K1及P-S6等哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)途径相关蛋白的表达.结果:干预24h时,浓度为0~175μmol/L的山奈酚对SGC-996细胞增殖的抑制作用不明显;干预48h时,浓度为75μmol/L及以上的山奈酚可明显抑制SGC-996细胞的增殖(P<0.05);干预72h时,浓度为50μmol/L的山奈酚也可显著抑制SGC-996细胞的增殖(P<0.05).浓度为100μmol/L山奈酚干预48h,可显著诱导细胞凋亡(P<0.05),显著降低P-S6K1和P-S6蛋白的表达水平(P<0.05).结论:在一定浓度范围内,山奈酚随浓度的增加和时间的延长而明显抑制SGC-996细胞的增殖,并诱导其凋亡,而对细胞增殖的抑制作用可能是通过影响mTORC1信号通路实现的. 展开更多
关键词 山奈酚 人胆囊癌细胞 细胞凋亡 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
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p70/p85核糖体蛋白S6激酶1重组真核表达载体的构建及其在人乳腺癌MCF-7细胞内功能的初步鉴定
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作者 赵莉 侯敬申 +1 位作者 白晓春 贾春宏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期459-463,共5页
目的:构建p70核糖体蛋白S6激酶1(p70 ribosomal protein S6 kinase 1,p70 S6K1)及p85 S6K1基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,并鉴定其在人乳腺癌MCF-7细胞内的表达及功能。方法:以pRK7-HA-S6K1... 目的:构建p70核糖体蛋白S6激酶1(p70 ribosomal protein S6 kinase 1,p70 S6K1)及p85 S6K1基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,并鉴定其在人乳腺癌MCF-7细胞内的表达及功能。方法:以pRK7-HA-S6K1为模板,采用PCR扩增出目的基因片段p70 S6K1、p85 S6K1,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,采用PCR、双酶切和DNA测序鉴定。将重组载体转染MCF-7细胞,24 h后采用Western blotting方法检测细胞内p70 S6K1、p85 S6K1蛋白的表达;同时向转染细胞内加入1 mmol/L H2O2处理36 h,观察p70 S6K1、p85 S6K1蛋白对H2O2诱导的细胞死亡的影响。结果:成功扩增得到p70 S6K1、p85 S6K1基因片段并构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,重组载体经PCR、双酶切鉴定均出现p70 S6K1和p85S6K1预期条带,DNA测序结果显示其全长基因阅读框完整、正确。重组载体在MCF-7细胞中高效表达flag-p70 S6K1和flag-p85S6K1,且p85 S6K1能增强H2O2诱导的细胞死亡。结论:成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,均能在MCF-7细胞中高效表达,且p85 S6K1能够增强H2O2诱导的细胞死亡。 展开更多
关键词 核糖体蛋白S6激酶1 基因重组 载体构建 真核表达 细胞死亡 乳腺癌 MCF-7细胞
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沉默PPARγ对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及相关机制 被引量:2
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作者 阳曙东 谭文甫 +2 位作者 刘金华 王斌 王晋 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期55-60,共6页
目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因沉默对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其机制.方法:将PPARγshRNA(干扰质粒),scramble shRNA(阴性对照质粒)转染入骨肉瘤MG-63细胞中,Western blot检测PPARγshRNA对PPARγ蛋白的抑制作... 目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因沉默对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其机制.方法:将PPARγshRNA(干扰质粒),scramble shRNA(阴性对照质粒)转染入骨肉瘤MG-63细胞中,Western blot检测PPARγshRNA对PPARγ蛋白的抑制作用;MTT法观察PPARγ沉默对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响,克隆形成实验与检测PPARγ沉默对骨肉瘤MG-63细胞克隆形成能力的影响;Western Blot检测PPARγ沉默后对骨肉瘤MG-63细胞中细胞增殖相关蛋白p-AKT、p-GSK-3β、CyclinD1的蛋白表达水平的影响.结果:PPARγ在骨肉瘤MG-63细胞中沉默成功;MTT及克隆形成实验结果显示沉默PPARγ可促进骨肉瘤MG-63细胞的增殖;Western Blot检测结果显示PPARγ沉默上调骨肉瘤MG-63细胞p-AKT、p-GSK-3β、CyclinD1蛋白的表达.结论:沉默PPARγ可能通过调控Akt/GSK-3β/CyclinD1信号通路促进骨肉瘤MG-63细胞的增殖. 展开更多
关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ 骨肉瘤 细胞增殖 细胞周期素D1
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桦木酸在缺氧条件下对PC⁃3细胞干性、侵袭、迁移、黏附及HIF⁃1α表达的影响 被引量:2
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作者 谢尚延 黄帅 +3 位作者 王斌 林卓远 钟少文 梁宝霞 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第24期3119-3125,共7页
目的探讨桦木酸(betulinic acid,BA)在缺氧条件下对人前列腺癌骨转移PC⁃3细胞干性、侵袭、迁移、黏附及缺氧诱导因子⁃1α(hypoxia⁃inducible factor⁃1α,HIF⁃1α)表达的影响。方法采用CCK⁃8检测BA对前列腺癌骨转移细胞株PC⁃3细胞活力半... 目的探讨桦木酸(betulinic acid,BA)在缺氧条件下对人前列腺癌骨转移PC⁃3细胞干性、侵袭、迁移、黏附及缺氧诱导因子⁃1α(hypoxia⁃inducible factor⁃1α,HIF⁃1α)表达的影响。方法采用CCK⁃8检测BA对前列腺癌骨转移细胞株PC⁃3细胞活力半数抑制浓度(IC_(50)),再分为IC_(50)药物浓度BA组和对照组,检测BA对PC⁃3细胞增殖的影响;在常氧、缺氧及缺氧+IC_(50)(10μmol/L)BA条件下处理PC⁃3细胞,采用Transwell实验检测BA对细胞侵袭、迁移能力的影响;采用细胞黏附实验检测BA对细胞黏附能力的影响;采用肿瘤成球实验检测BA对细胞自我更新能力影响;采用PCR实验及Western blot实验检测BA对细胞表达HIF⁃1α、CD31、CD44的影响;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BA对细胞VEGF、IL⁃8、IL⁃1β、IL⁃6和TNF⁃α因子表达的影响。结果BA呈浓度和时间依赖性抑制PC⁃3细胞增殖,其IC_(50)为10μmol/L。PC⁃3细胞在缺氧环境中的干性、侵袭、迁移、黏附能力增加,而加入BA后PC⁃3细胞的干性、侵袭、迁移、黏附能力下降。Western blot实验结果显示,BA能抑制PC⁃3细胞中HIF⁃1α蛋白表达,同时抑制CD31、CD44蛋白表达(P<0.01);PCR实验结果显示,BA下调HIF⁃1α的mRNA表达,同时也下调CD31、CD44的mRNA表达(P<0.01)。ELISA试验结果显示BA可抑制VEGF、IL⁃8、IL⁃1β、IL⁃6和TNF⁃α因子的表达(P<0.01)。结论BA能抑制缺氧条件下PC⁃3细胞的干性、侵袭、迁移及黏附能力,其机制可能与BA下调HIF⁃1α、CD31、CD44表达,及抑制VEGF、IL⁃8、IL⁃1β、IL⁃6和TNF⁃α等因子表达有关。 展开更多
关键词 桦木酸 前列腺癌 缺氧 缺氧诱导因子⁃1α PC⁃3细胞 骨转移
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