目的:诱导表达凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)过敏原蛋白Lit v 1.2,并利用6-His标签获得纯化蛋白。方法:用NdeⅠ和PstⅠ双酶切实验室前期构建保存的p GEM-T-Lit v 1.2质粒,将目的基因与表达载体p ET44a连接,转入表达菌株Rosetta,通...目的:诱导表达凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)过敏原蛋白Lit v 1.2,并利用6-His标签获得纯化蛋白。方法:用NdeⅠ和PstⅠ双酶切实验室前期构建保存的p GEM-T-Lit v 1.2质粒,将目的基因与表达载体p ET44a连接,转入表达菌株Rosetta,通过氨苄青霉素(Amp)抗性基因筛选,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得Lit v 1.2蛋白。通过亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化效果。结果:成功构建了重组质粒p ET44a-Lit v 1.2,SDS-PAGE结果显示Lit v1.2基因在大肠杆菌Rosetta中获得高效的可溶性表达,蛋白质分子量与理论值相符,且获得的目标蛋白纯度高。结论:本研究通过原核表达及亲和层析获得高产量、高纯度的凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2,为进一步研究Lit v 1.2的免疫学特性奠定基础。展开更多
文摘目的:诱导表达凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)过敏原蛋白Lit v 1.2,并利用6-His标签获得纯化蛋白。方法:用NdeⅠ和PstⅠ双酶切实验室前期构建保存的p GEM-T-Lit v 1.2质粒,将目的基因与表达载体p ET44a连接,转入表达菌株Rosetta,通过氨苄青霉素(Amp)抗性基因筛选,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得Lit v 1.2蛋白。通过亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化效果。结果:成功构建了重组质粒p ET44a-Lit v 1.2,SDS-PAGE结果显示Lit v1.2基因在大肠杆菌Rosetta中获得高效的可溶性表达,蛋白质分子量与理论值相符,且获得的目标蛋白纯度高。结论:本研究通过原核表达及亲和层析获得高产量、高纯度的凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2,为进一步研究Lit v 1.2的免疫学特性奠定基础。
