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蓝光诱导的人视网膜色素上皮细胞的氧化损伤及其线粒体机制 被引量：10
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作者 邹秀兰 俞永珍 +3 位作者 徐哲 张楚 王观峰 邹玉平 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期129-134,共6页
背景 研究表明,线粒体及氧化应激反应在蓝光导致的视网膜光化学损伤机制中具有重要作用,但蓝光对人视网膜色素上皮（RPE）细胞的损伤与照射时间的关系研究较少. 目的 从供体眼球中分离和培养人RPE细胞,研究蓝光诱导的人RPE细胞氧化损伤... 背景 研究表明,线粒体及氧化应激反应在蓝光导致的视网膜光化学损伤机制中具有重要作用,但蓝光对人视网膜色素上皮（RPE）细胞的损伤与照射时间的关系研究较少. 目的 从供体眼球中分离和培养人RPE细胞,研究蓝光诱导的人RPE细胞氧化损伤的可能机制. 方法 从供体眼球中分离和培养RPE细胞,将培养的细胞分为正常对照组（0h组）、光照0.5、1、2、3、4、5、6、12和24 h组.正常对照组细胞培养在暗环境中且不给予蓝光照射,光照组细胞给予辐射强度为（4.0±0.5） mW/cm2的蓝光照射,按分组分别照射相应时间.采用MTT法检测各组RPE细胞的活性,透射电子显微镜下观察各组细胞超微结构的变化;采用流式细胞术检测RPE细胞中活性氧簇（ROS）的生成量以评价各组细胞的氧化应激反应情况;采用实时荧光定量PCR技术检测RPE细胞线粒体中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）及环氧合酶1（COX1） mRNA的相对表达量,评价RPE细胞中线粒体的功能.结果 正常对照组的细胞存活率为（100.00±20.00）％,光照1、2、3、4、5、6、12、24 h组人PRE细胞存活率分别为（95.73±0.89）％、（94.67±2.56）％、（84.23±0.16）％、（78.57±3.09）％、（75.43±2.18）％、（66.13±1.42）％、（53.43±1.91）％和（47.97±1.36）％,各组细胞存活率的总体比较差异有统计学意义（F=172.270,P=0.000）,其中光照3、4、5、6、12、24 h组细胞存活率与正常对照组比较均显著下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.透射电子显微镜下可见光照6、12、24 h组RPE细胞空泡样变、线粒体肿胀、微绒毛减少甚至消失等改变.流式细胞术检测发现,正常对照组、光照0.5、1、2、3、4、5、6h组人RPE细胞中ROS的相对量分别为（14.75±2.49）％、（19.04±1.02）％、（22.81±3.20）％、（28.75±2.15）％、（33.06±0.96）％、（40.64±2.11）％、（48.25±2.50）％和（60.44±2.68％）,其中光照1、2、3、4、5、6h组与正常对照组比较,RPE细胞中ROS的相对量均明显增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.光照后3h,随着光照时间的延长,人RPE细胞中NAPDH mRNA的相对表达量较正常对照组逐渐增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,COX1 mRNA在光照2、3、4和5h组相对表达量均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,随后逐渐下降并接近正常值. 结论 蓝光照射3h即可引起RPE细胞中线粒体的氧化损伤,光照5 ～6h细胞损伤更为明显. 展开更多
关键词 氧化应激 活性氧簇 人视网膜色素上皮细胞
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组织因子靶向肽对蓝光诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用 被引量：7
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作者 李丹丹 邹秀兰 +6 位作者 陈京霞 徐哲 俞永珍 周文杰 王观峰 饶本强 邹玉平 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期603-609,共7页
背景视网膜光损伤可造成视网膜色素上皮（RPE）细胞损伤，是影响年龄相关性黄斑变性（AMD）发生和发展的重要因素之一。研究表明，组织因子（TF）在氧化损伤的RPE细胞中和AMD患者的脉络膜新生血管（CNV）中呈高表达，推测抑制TF可预防RP... 背景视网膜光损伤可造成视网膜色素上皮（RPE）细胞损伤，是影响年龄相关性黄斑变性（AMD）发生和发展的重要因素之一。研究表明，组织因子（TF）在氧化损伤的RPE细胞中和AMD患者的脉络膜新生血管（CNV）中呈高表达，推测抑制TF可预防RPE细胞的损伤以及抑制CNV。目的观察TF靶向肽（TF-TP）对蓝光诱导的人RPE细胞损伤的保护作用。方法体外分离和培养人RPE细胞并分为空白对照组、蓝光照射组和TF-TP组。空白对照组细胞在常规条件下进行处理；蓝光照射组细胞用辐照强度为（4.0±0.5）mW/cm2的蓝光照射12 h建立蓝光损伤细胞模型；TF-TP组先分别用不同浓度（10、100、150、200、300 μmol/L）TF-TP培养细胞24 h，再用蓝光照射12 h。采用CCK-8法检测各组细胞的存活率；分别在普通倒置显微镜和透射电子显微镜下观察RPE细胞的形态和超微结构变化；采用Hoechst染色法检测各组细胞的凋亡情况；采用Western blot法检测各组细胞中TF蛋白和相关凋亡蛋白bax和bcl-2的表达。结果不同浓度TF-TP组间RPE细胞存活率比较，差异无统计学意义（F＝2.15，P＝0.11）。空白对照组、蓝光照射组和150 μmol/L TF-TP组细胞存活率分别为（100.0±0.00）%、（43.79±6.55）%和（63.45±3.57）%，150 μmol/L TF-TP组细胞存活率较蓝光照射组明显增加，差异有统计学意义（P＝0.00），以150 μmol/L TF-TP为后续实验的最适浓度。光学显微镜下和透射电子显微镜下显示，蓝光照射组有较多皱缩、变形、悬浮细胞，可见细胞微绒毛数量减少，部分线粒体嵴断裂和缺失以及细胞空泡样变性，而150 μmol/L TF-TP组异常形态的细胞较少，细胞绒毛结构较完整，细胞质中空泡样结构改变和线粒体损伤改变明显减轻。空白对照组、蓝光照射组和150 μmol/L TF-TP组细胞凋亡率分别为（0.98±0.19）%、（9.98±0.82）%和（5.73±0.88）%，组间总体比较差异有统计学差异（F＝206.18，P＝0.00），其中150 μmol/L TF-TP组细胞凋亡率明显低于蓝光照射组，差异有统计学意义（P〈0.05）。与空白对照组相比，蓝光照射组细胞中bax蛋白和TF蛋白的相对表达量明显增加，bcl-2蛋白的相对表达量显著下降，差异均有统计学意义（均P〈0.05）；与蓝光照射组相比，150 μmol/L TF-TP组细胞中bax蛋白和TF蛋白的相对表达量均明显下降，而bcl-2蛋白的相对表达量明显增加，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论TF-TP预处理后可减少蓝光损伤的人RPE细胞的凋亡及增加细胞的存活率，从而对蓝光诱导的人RPE细胞损伤发挥保护作用，其作用机制可能与TF-TP抑制TF介导的bax/bcl-2凋亡通路有关。 展开更多
关键词 组织因子 人 视网膜色素上皮/代谢 上皮细胞/辐射效应 光 细胞凋亡
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