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粉尘螨Hsp60基因的测序、克隆和原核表达 被引量:1
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作者 刘海娟 洪青 +4 位作者 罗晓东 李小敏 丁雪 沈浩贤 陈代雄 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期154-157,共4页
目的探索和发现粉尘螨新的变应原组分。方法以粉尘螨热休克蛋白60(Heat shock protein 60,Hsp60)为研究对象,用简并引物PCR方法扩增出其cDNA片段,并对该片段进行了序列测定和分析。同时,对该基因片段进行了克隆、原核表达。结果与结论... 目的探索和发现粉尘螨新的变应原组分。方法以粉尘螨热休克蛋白60(Heat shock protein 60,Hsp60)为研究对象,用简并引物PCR方法扩增出其cDNA片段,并对该片段进行了序列测定和分析。同时,对该基因片段进行了克隆、原核表达。结果与结论成功确定粉尘螨Hsp60基因片段cDNA序列;构建了pET-28a(+)-Hsp60重组质粒,并在E.coli BL21中得到高效表达。 展开更多
关键词 粉尘螨 HSP60 基因序列 原核表达
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骨髓间充质干细胞对Ⅰ型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖的调节作用
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作者 郑贵星 李翊泉 +2 位作者 魏小平 吴颉 黄俊 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期677-680,共4页
目的:探讨骨髓间充质干细胞抑制Ⅰ型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖的免疫调节相关机制。方法:分离、培养并鉴定大鼠的骨髓间充质干细胞,采用MTT法观察其对Ⅰ型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖能力的影响,采用流式细胞仪分析骨髓间充质干细胞对Ⅰ型糖... 目的:探讨骨髓间充质干细胞抑制Ⅰ型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖的免疫调节相关机制。方法:分离、培养并鉴定大鼠的骨髓间充质干细胞,采用MTT法观察其对Ⅰ型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖能力的影响,采用流式细胞仪分析骨髓间充质干细胞对Ⅰ型糖尿病大鼠CD4+CD25+调节性T细胞比例、细胞周期和细胞凋亡的影响。结果:B组和C组的吸光度值明显低于A组,数据之间比较差异均有统计学意义(P<0.05),C组吸光度值明显低于B组,数据之间比较差异有统计学意义(P<0.05);B组和C组的CD4+CD25+调节性T细胞比例均明显高于A组,数据比较差异均有统计学意义(P<0.05),C组CD4+CD25+调节性T细胞比例明显高于B组,数据比较差异有统计学意义(P<0.05);B组和C组的细胞凋亡水平明显高于A组,数据比较差异有统计学意义(P<0.05),C组细胞凋亡水平明显高于B组,数据比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:骨髓间充质干细胞可以显著抑制Ⅰ型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖,其机制可能通过调节CD4+CD25+调节性T细胞比例,促进细胞凋亡,继而影响T淋巴细胞的免疫功能,发挥其抑制能力。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 Ⅰ型糖尿病 大鼠 淋巴细胞
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肺炎链球菌表面粘附素A蛋白抗原表位的预测筛选及确定
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作者 古文雅 梁雪清 +2 位作者 麦璟莹 马长玲 袁竹青 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期55-64,共10页
【目的】确定肺炎链球菌表面粘附素A(Psa A)蛋白抗原的B细胞、CD4 T细胞和CD8 T细胞表位。【方法】通过生物信息学方法预测肺炎链球菌Psa A蛋白分子小鼠B细胞线性表位、MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)及MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)并人... 【目的】确定肺炎链球菌表面粘附素A(Psa A)蛋白抗原的B细胞、CD4 T细胞和CD8 T细胞表位。【方法】通过生物信息学方法预测肺炎链球菌Psa A蛋白分子小鼠B细胞线性表位、MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)及MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)并人工合成相应肽段;克隆重组质粒BL21/p ET/Psa A并得到纯化的r Psa A蛋白用以免疫小鼠;分离每只免疫组和对照组小鼠的血清分别与人工合成的候选B细胞表位肽段进行间接ELISA检测,筛选B细胞表位;分离小鼠脾及淋巴结细胞并分别与人工合成的T细胞候选表位肽段体外共培养,取上清进行双夹心ELISA检测IFN-γ的量进行初步筛选。用初筛到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴结细胞并进行细胞内染色及细胞流式检测,确定Psa A蛋白分子T细胞表位。【结果】分析Psa A蛋白分子的B细胞表位及MHC-Ⅰ结合肽、MHC-Ⅱ结合肽;得到候选B细胞表位肽10条,MHC-Ⅰ结合肽21条,MHC-Ⅱ结合肽7条,并进行了人工合成。利用分子生物学技术获得了r Psa A蛋白并成功免疫了小鼠。间接ELISA结果显示:肽段PB2、PB6,PB7与r Psa A免疫小鼠的血清发生反应,其OD450nm读数比相应的阴性对照小鼠显著升高;双夹心ELISA结果初步提示:肽段PⅠ10、PⅠ14、PⅠ17、PⅠ18、PⅠ21以及肽段PⅡ2、PⅡ5、PⅡ6刺激免疫小鼠细胞产生的IFN-γ量比相应的对照小鼠显著升高。细胞流式结果进一步确定:经肽段PⅡ2、PⅡ5刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD4双阳性细胞百分比较对照小鼠细胞显著升高;经肽段PⅠ14、PⅠ17、PⅠ21刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD8双阳性细胞的百分比较对照小鼠细胞显著升高。【结论】确定了肺炎链球菌Psa A蛋白分子的3个B细胞线性表位;2个CD4 T细胞表位;3个CD8 T细胞表位。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 表面粘附素A 抗原表位
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