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GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
郭晓兰
谭茵
+2 位作者
陈文生
林玉茵
戴建威
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1237-1242,共6页
目的:制备生长激素释放激素受体剪接变异体1(GHRHR-SV1)抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法:设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a(+)中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR...
目的:制备生长激素释放激素受体剪接变异体1(GHRHR-SV1)抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法:设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a(+)中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,分别加入0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol·L^(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG);诱导1、2、4和6h,并在37℃、30℃和25℃不同温度下进行诱导;观察目的蛋白表达的最佳IPTG浓度、时间和温度。亲和层析纯化重组蛋白,将纯化后的蛋白免疫家兔,制备兔多克隆抗体,ELISA法检测该抗体效价,Western blotting法检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞系B16-F10中的表达情况。结果:重组载体pET-GHRHR-SV1构建成功。在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)时目的蛋白的表达量最高;IPTG诱导蛋白表达2h时,蛋白表达量最大;当温度为25℃时,蛋白的表达量最大。诱导表达的蛋白相对分子质量约为24 000,纯化后纯度为80%,GHRHR-SV1抗体效价为1∶1 600 000,B16-F10细胞中有GHRHR-SV1蛋白表达。结论:成功制备pETGHRHR-SV1重组载体。GHRHR-SV1蛋白在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)、诱导时间为2h和温度为25℃的条件下表达最佳。成功制备了高效价的GHRHR-SV1抗体。黑色素瘤细胞系中有GHRHR-SV1蛋白表达。
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关键词
生长激素释放激素受体剪接变异体1
重组载体
重组蛋白
抗体
黑色素瘤
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职称材料
TRPC6在肺部的生理与病理生理功能
被引量：
3
2
作者
周丽芬
陈庆梓
李建华
《生理科学进展》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期77-80,F0003,共5页
经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道是一类非选择性钙离子通道,TRPC6是TRPC家族的成员之一,其基因编码的蛋白在人体脑、肾、肝和肺等多个器官均有表达。TRPC6不仅是肺中表达最丰富的TRPC通道,也是目前...
经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道是一类非选择性钙离子通道,TRPC6是TRPC家族的成员之一,其基因编码的蛋白在人体脑、肾、肝和肺等多个器官均有表达。TRPC6不仅是肺中表达最丰富的TRPC通道,也是目前肺部疾病中研究最多的TRPC通道。TRPC6参与动物体内许多重要的生理和病理调节过程,TRPC6的基因突变或过表达可引起胞内钙离子信号通路异常,从而导致多种病理生理改变。肺部疾病的病理生理过程有多种细胞共同参与。TRPC6在不同的细胞中表达不同,表现的生理与病理生理功能则有差异。
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关键词
TRPC6
肺脏
细胞
功能
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职称材料
题名
GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
郭晓兰
谭茵
陈文生
林玉茵
戴建威
机构
广州医科大学生物学实验中心
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1237-1242,共6页
基金
国家自然科学基金资助课题(31271476)
广东省广州市科技局科技计划项目资助课题(20150010076)
+1 种基金
广东省教育厅人才项目资助课题(2013KJCX0155)
广东省自然科学基金资助课题(2016A030313601)
文摘
目的:制备生长激素释放激素受体剪接变异体1(GHRHR-SV1)抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法:设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a(+)中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,分别加入0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol·L^(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG);诱导1、2、4和6h,并在37℃、30℃和25℃不同温度下进行诱导;观察目的蛋白表达的最佳IPTG浓度、时间和温度。亲和层析纯化重组蛋白,将纯化后的蛋白免疫家兔,制备兔多克隆抗体,ELISA法检测该抗体效价,Western blotting法检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞系B16-F10中的表达情况。结果:重组载体pET-GHRHR-SV1构建成功。在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)时目的蛋白的表达量最高;IPTG诱导蛋白表达2h时,蛋白表达量最大;当温度为25℃时,蛋白的表达量最大。诱导表达的蛋白相对分子质量约为24 000,纯化后纯度为80%,GHRHR-SV1抗体效价为1∶1 600 000,B16-F10细胞中有GHRHR-SV1蛋白表达。结论:成功制备pETGHRHR-SV1重组载体。GHRHR-SV1蛋白在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)、诱导时间为2h和温度为25℃的条件下表达最佳。成功制备了高效价的GHRHR-SV1抗体。黑色素瘤细胞系中有GHRHR-SV1蛋白表达。
关键词
生长激素释放激素受体剪接变异体1
重组载体
重组蛋白
抗体
黑色素瘤
Keywords
growth hormone-releasing hormone receptor splice variant 1
recombinant vector
recombinant protein
antibody
melanoma
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
TRPC6在肺部的生理与病理生理功能
被引量：
3
2
作者
周丽芬
陈庆梓
李建华
机构
广州医科大学生物学实验中心
广州医科大学
生理教研室
出处
《生理科学进展》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期77-80,F0003,共5页
基金
国家自然科学基金(81470205)
广州市属高校科研计划项目(2012C043)
广州医科大学青年科研(2014A01)资助课题
文摘
经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道是一类非选择性钙离子通道,TRPC6是TRPC家族的成员之一,其基因编码的蛋白在人体脑、肾、肝和肺等多个器官均有表达。TRPC6不仅是肺中表达最丰富的TRPC通道,也是目前肺部疾病中研究最多的TRPC通道。TRPC6参与动物体内许多重要的生理和病理调节过程,TRPC6的基因突变或过表达可引起胞内钙离子信号通路异常,从而导致多种病理生理改变。肺部疾病的病理生理过程有多种细胞共同参与。TRPC6在不同的细胞中表达不同,表现的生理与病理生理功能则有差异。
关键词
TRPC6
肺脏
细胞
功能
分类号
R332 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达
郭晓兰
谭茵
陈文生
林玉茵
戴建威
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
TRPC6在肺部的生理与病理生理功能
周丽芬
陈庆梓
李建华
《生理科学进展》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
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