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α肌动蛋白基因转录激活因子HMGB34367的克隆和调控功能研究 被引量:2
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作者 蔡琳 吴壮 徐军 《医学研究生学报》 CAS 2008年第6期572-576,I0002,共6页
目的:探讨从博来霉素致肺纤维化小鼠肺组织中筛选出的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)亚家族成员HMGB34367,作为转录因子对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达的影响。方法:①克隆与构建HMGB34367真核表达载体及α-SMA启动子红色荧光报告质粒... 目的:探讨从博来霉素致肺纤维化小鼠肺组织中筛选出的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)亚家族成员HMGB34367,作为转录因子对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达的影响。方法:①克隆与构建HMGB34367真核表达载体及α-SMA启动子红色荧光报告质粒。②构建质粒共转染气道上皮细胞系16HBE,荧光显微镜观察重组转化生长因子-β1(rhTGF-β1)刺激下红色荧光的表达。③电泳迁移率(EMSA)及超迁移实验分析HMGB34367和α-SMA启动子CArGB基序的特异性结合活性。④RT-PCR检测细胞转染HMGB34367真核表达载体HMGB34367-pcDNA3.0对内源性α-SMA基因表达的影响。结果:细胞过表达HMGB34367能活化α-SMA启动子,转染HMGB34367-pcDNA3.0质粒的16HBE细胞核蛋白,显著增强了与α-SMA启动子CArGB序列特异结合,过表达HMGB34367诱导了α-SMA基因表达。结论:HMGB34367基因编码蛋白能作为转录因子特异性地诱导α-SMA启动子的转录激活,上调αS-MA基因表达。提示致纤维化环境因子通过诱导HMGB34367表达使αS-MA基因转录激活,可能在气道重塑和肺纤维化的病理过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白B1 Α-平滑肌肌动蛋白 气道重塑 纤维化
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严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白启动急性肺损伤的可能机制 被引量:2
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作者 要国华 杨新艳 徐军 《医学研究生学报》 CAS 2005年第8期677-681,共5页
目的:研究严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(CoV)S蛋白作用于呼吸道上皮及免疫细胞后对趋化因子IP-10和其他细胞因子生成的影响。方法:通过昆虫-杆状病毒表达系统表达SARS-CoV的S蛋白,并经镍亲和磁珠纯化,将重组的S蛋白分别作用于人支... 目的:研究严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(CoV)S蛋白作用于呼吸道上皮及免疫细胞后对趋化因子IP-10和其他细胞因子生成的影响。方法:通过昆虫-杆状病毒表达系统表达SARS-CoV的S蛋白,并经镍亲和磁珠纯化,将重组的S蛋白分别作用于人支气管上皮细胞16HBE、外周血单个核细胞和单核细胞、肺泡单核-巨噬细胞,观察其形态学变化,并检测IP-10和其他细胞因子的变化。结果:基础状态下16HBE并不生成IP-10,S蛋白作用于人支气管上皮细胞16HBE,引起部分细胞变圆、空泡形成并裂解,12h后即可见IP-10生成达(79.97±13.81)pg/ml,呈显著量效关系。但对其他参与免疫反应的Th1/Th2细胞因子及趋化因子影响不明显。S蛋白并不诱导外周血单核细胞和单个核细胞(主要为淋巴细胞)合成释放IP-10。比较而言,干扰素-γ(IFN-γ)不仅能诱导16HBE,而能诱导免疫细胞生成IP-10。结论:①SARS-CoV可通过其S蛋白早期诱导肺上皮细胞合成释放IP-10,从而启动免疫病理过程。②SARS-CoVS蛋白诱导IP-10在宿主细胞的生成不依赖IFN-γ。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 冠状病毒 S蛋白 支气管上皮细胞
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损伤气道上皮组织转化在气道重塑中的作用 被引量:4
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作者 张敏 吴壮 徐军 《医学研究生学报》 CAS 2004年第11期966-969,F004,共5页
目的 :探讨损伤气道上皮表型向肌纤维母细胞转化的可能性 ,以及转化生长因子 β1(TGF β1)在此过程中的影响。 方法 :用多聚左旋精氨酸 (PLA)反复损伤气道上皮细胞系 16HBE 14o,显微镜下实时观察形态学变化 ,免疫组化方法检测α 平滑... 目的 :探讨损伤气道上皮表型向肌纤维母细胞转化的可能性 ,以及转化生长因子 β1(TGF β1)在此过程中的影响。 方法 :用多聚左旋精氨酸 (PLA)反复损伤气道上皮细胞系 16HBE 14o,显微镜下实时观察形态学变化 ,免疫组化方法检测α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达 ;以TGF β1(10 μg/L)刺激转染表达质粒VSMP8[含(α SMA)启动子和氯霉素已酰基转移酶 (CAT)报告基因 ]的 16HBE 14o ,ELISA法测定细胞裂解液中CAT相对活性。 结果 :①在气道上皮细胞系 16HBE 14o反复损伤、修复过程中 ,有部分细胞α SMA表达阳性 ,其中有少数细胞形态呈现长梭形、多角形或星形 ;TGF β1的刺激增加了α SMA阳性细胞数 ,并延缓了损伤后 16HBE 14o的修复。②TGF β1刺激后 2 4hCAT活性显著升高。 结论 :气道上皮细胞反复损伤、修复过程中 ,可能有部分细胞未能正常愈合而出现向肌纤维母细胞转化 ,进而可能参与哮喘气道重塑、气道高反应性的发生发展 ,提示TGF 展开更多
关键词 气道上皮细胞 肌纤维母细胞 转化生长因子-Β1 转化 哮喘
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一种改良的免疫组织化学染色方法 被引量:1
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作者 陈劲龙 冉丕鑫 《广州医学院学报》 2003年第1期69-71,共3页
目的 :探讨一种新的有效检测出肺部血管内皮生长因子 (VEGF)表达的免疫组化方法。方法 :实验分三组 ,分别为阴性对照组、常规消除背景组、改良组。阴性对照组包括DAKO公司二抗组 ,华美公司二抗组。余两组均包括阴性对照组及正常组。结... 目的 :探讨一种新的有效检测出肺部血管内皮生长因子 (VEGF)表达的免疫组化方法。方法 :实验分三组 ,分别为阴性对照组、常规消除背景组、改良组。阴性对照组包括DAKO公司二抗组 ,华美公司二抗组。余两组均包括阴性对照组及正常组。结果 :常规消除背景组有效消除背景但无法检出肺部VEGF表达。改良组既能有效消除背景 ,又能成功检测出待测物质。结论 :改良组有效消除背景干扰 ,检测出肺部VEGF表达。 展开更多
关键词 免疫组化 改良 肺组织 大鼠 血管内皮生长因子
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