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人外周血单核细胞来源的树突状细胞的体外诱导 被引量:7
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作者 彭卫斌 沙卫红 +1 位作者 李瑜元 聂玉强 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期1701-1704,共4页
目的:探讨在体外从人外周血单核细胞诱导培养成熟的树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法。方法:培养过程分两阶段,第一阶段:采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞,再以黏附法分离出单核细胞,经重组人粒细胞-巨噬细胞集... 目的:探讨在体外从人外周血单核细胞诱导培养成熟的树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法。方法:培养过程分两阶段,第一阶段:采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞,再以黏附法分离出单核细胞,经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)100ng/mL、重组人白介素-4(rhIL-4)100ng/mL体外诱导。第二阶段:第5天加入重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)100ng/mL,继续培养2d,刺激DC成熟。倒置显微镜下观察DC形态,流式细胞仪检测DC表面标志物CD83、CD1a、CD86、CD40、CD14表达水平,用MTT法测定DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果:人外周血单核细胞经rhGM-CSF及rhIL-4诱导培养5d后,多数细胞呈集落生长,细胞表型CD83、CD1a、CD86、CD40及CD14分别是14.3%、12.8%、20.1%、19.9%及16.2%。加入rhTNF-α诱导后,即培养第7天,细胞表型CD83、CD1a、CD86、CD40及CD14分别是29.8%、18.2%、33.6%、28.1%及8.0%(与第5天比较,均P<0.05)。成熟后的DC具备较强刺激T细胞增殖的能力。结论:rhGM-CSF联合rhIL-4诱导人外周血单核细胞,可获得大量不成熟的DC,该体系有利于DC扩增,加入rhTNF-α,继续培养2d,可诱导出成熟的DC,成熟的DC具备较强刺激T细胞增殖的能力。 展开更多
关键词 单核细胞 树突状细胞 细胞因子 体外培养
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Survivin基因及其主要剪接变构体mRNA在大肠癌组织中的表达 被引量:3
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作者 左文革 李瑜元 +3 位作者 聂玉强 沙卫红 王红 林泳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期852-856,共5页
目的:探讨大肠癌组织中Survivin基因及其主要剪接变构体与癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)CAM5mRNA表达的临床意义。方法:39例大肠癌切除标本,采集肿瘤组织、癌旁2.5cm组织和距离肿瘤10cm以上的正常大肠组织各1块,采用RT-PCR方... 目的:探讨大肠癌组织中Survivin基因及其主要剪接变构体与癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)CAM5mRNA表达的临床意义。方法:39例大肠癌切除标本,采集肿瘤组织、癌旁2.5cm组织和距离肿瘤10cm以上的正常大肠组织各1块,采用RT-PCR方法检测总survivin、survivin-△Ex3、survivin-2B、survivin-3B、survivin2α和CEACAM5 mRNA的表达。用凝胶图像分析系统或SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测上述基因mRNA的表达水平。结果:总survivin、survivin-△Ex3、survivin-2B、sur-vivin-3B、survivin2α和CEACAM5mRNA在大肠癌组织中的阳性表达率分别为100.0%、92.3%、92.3%、79.5%、87.2%和97.4%,均高于癌旁2.5cm组织中的38.5%、25.6%、28.2%、7.7%、12.8%和12.8%,差异均有统计学意义(P<0.01)。正常肠壁组织中上述mRNA的阳性表达率分别为17.9%、5.1%、7.7%、0.0%、2.6%和10.3%,与癌旁2.5cm组织比较,总survivin、survivin-△Ex3和sur-vivin-2B差异有统计学意义(P<0.05)。总survivin及其剪接变构体和CEACAM5mRNA的表达水平,大肠癌组织高于癌旁2.5cm组织(P<0.01);癌旁2.5cm组织与正常组织的差异均无统计学意义(P>0.05)。survivin剪接变构体mRNA的表达水平与一些临床病理参数有关(P<0.05)。结论:Survivin和其剪接变构体mRNA在大肠癌组织中呈高表达,表达水平与恶性临床病理参数有关。检测Survivin和其剪接变构体mRNA表达对大肠癌前预报与早期诊断比CEAmRNA更有价值。 展开更多
关键词 survivin剪接变构体 癌胚抗原CAM5 大肠癌 表达 凋亡
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核因子-κB、环氧合酶-2 mRNA在大肠癌中的表达及其与临床病理的关系 被引量:4
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作者 孙政 曹杰 +3 位作者 杨平 张伟健 李洁 张龙 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期1749-1752,共4页
目的:探讨核因子-κB(NF-КB)、环氧合酶-2(COX-2)基因mRNA在大肠癌组织中的表达及与临床病理参数的关系。方法:采用SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR技术检测58例手术切除的大肠癌及相应癌旁正常组织中NF-κB和COX-2mRNA的表达。结果:NF-КB... 目的:探讨核因子-κB(NF-КB)、环氧合酶-2(COX-2)基因mRNA在大肠癌组织中的表达及与临床病理参数的关系。方法:采用SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR技术检测58例手术切除的大肠癌及相应癌旁正常组织中NF-κB和COX-2mRNA的表达。结果:NF-КB、COX-2mRNA在大肠癌组织中的阳性表达率显著高于相应癌旁正常组织(P<0.01),且NF-κB、COX-2mRNA在大肠癌组织表达量亦显著高于癌旁正常组(P<0.05)。大肠癌浸润组织越深,NF-κB和COX-2mRNA相对表达水平越高,且NF-κB mRNA的表达与大肠癌淋巴结转移有关。NF-κB与COX-2mRNA表达呈正相关(r=0.417,P=0.001)。结论:大肠癌组织中NF-κB和COX-2mRNA高表达,两基因间表达水平呈正相关,且与大肠癌浸润程度、淋巴结转移有关。 展开更多
关键词 肠肿瘤 核因子-ΚB 环氧合酶-2
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信号转导子和转录激活子1在大肠癌中的表达及其意义 被引量:1
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作者 吴琼 王红 +4 位作者 聂玉强 李瑜元 夏金堂 杨劭宇 张伟健 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第17期2803-2805,共3页
目的:探讨信号转导子和转录激活子1(STAT1)在大肠癌中的表达及其意义。方法:采用SYBRGreenI荧光定量RT-PCR技术对50例大肠癌组织和相应正常大肠黏膜组织中STAT1mRNA的表达进行检测,并分析其表达情况与临床病理资料的相关性。结果:癌组织... 目的:探讨信号转导子和转录激活子1(STAT1)在大肠癌中的表达及其意义。方法:采用SYBRGreenI荧光定量RT-PCR技术对50例大肠癌组织和相应正常大肠黏膜组织中STAT1mRNA的表达进行检测,并分析其表达情况与临床病理资料的相关性。结果:癌组织中STAT1mRNA的表达水平明显低于正常组织(P<0.05);在合并淋巴结转移的癌组织中的表达水平亦低于无淋巴结转移的癌组织(P<0.05);肿瘤TNM分期中,T3/T4期癌组织STAT1mRNA表达水平明显低于T1/T2期(P<0.05)。结论:STAT1基因在大肠癌组织中低表达,可能与大肠癌的恶性程度相关,可作为大肠癌恶性潜能的检测指标之一。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 STAT1 逆转录聚合酶链反应
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siRNA沉默RAD18抑制结肠癌SW480细胞FANCD2蛋白泛素化并增强其对丝裂霉素C的敏感性 被引量:4
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作者 钟雄平 陈业金 +3 位作者 孔红祥 刘超 乐贻军 王红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第11期1731-1733,共3页
目的:研究RAD18特异性siRNA对结肠癌SW480细胞FANCD2泛素化和对化疗药物丝裂霉素C敏感性的影响。方法 :RAD18特异性siRNA转染SW480细胞后用丝裂霉素C处理,通过Western blot检测细胞RAD18及FANCD2泛素化的表达,MTT法检测干扰RAD18后细胞... 目的:研究RAD18特异性siRNA对结肠癌SW480细胞FANCD2泛素化和对化疗药物丝裂霉素C敏感性的影响。方法 :RAD18特异性siRNA转染SW480细胞后用丝裂霉素C处理,通过Western blot检测细胞RAD18及FANCD2泛素化的表达,MTT法检测干扰RAD18后细胞对丝裂霉素C的敏感性。结果:RAD18特异性siRNA转染SW480细胞96 h后,RAD18基因的表达明显降低,导致经丝裂霉素C处理后FANCD2泛素化表达明显降低;siRAD18组细胞对丝裂霉素C的敏感性显著增强。结论 :抑制RAD18蛋白表达能延缓结肠癌细胞FANCD2泛素化表达,并增强SW480细胞对丝裂霉素C的敏感性。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 RAD18 FANCD2 RNA干扰 SW480
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