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脐血造血细胞体外扩增过程中DNA损伤的研究
1
作者 王彩霞 毛平 +2 位作者 张玉平 段华新 杜庆华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期450-453,共4页
本研究检测脐血(CB)单个核细胞(MNC)体外培养DNA损伤情况,以探讨体外培养的最佳收获时机。脐血MNC分别接种于含细胞因子无血清培养体系并进行集落接种,分别在0、7、14及21天收集细胞,用流式细胞仪检测CD34+及CD133+细胞数,采用单细胞凝... 本研究检测脐血(CB)单个核细胞(MNC)体外培养DNA损伤情况,以探讨体外培养的最佳收获时机。脐血MNC分别接种于含细胞因子无血清培养体系并进行集落接种,分别在0、7、14及21天收集细胞,用流式细胞仪检测CD34+及CD133+细胞数,采用单细胞凝胶电泳试验检测培养后不同时间点脐血造血细胞及集落细胞的DNA链断裂损伤情况。结果表明,体外短期培养(14天内)时,脐血CD34+及CD133+细胞数最多,脐血细胞DNA损伤率均低于5.0%,21天时CD34+及CD133+细胞数降到低于0天的比例,细胞DNA损伤率为28.2%,DNA损伤率比0天时高(p=0.000),损伤细胞彗星尾长度明显大于0天(p=0.000);而其余各培养时间点(7天和14天)损伤细胞彗星尾长度与培养0天组损伤细胞的彗星尾长度比较,差异无统计学意义(p=0.863及p=0.253);集落培养细胞DNA损伤率均低于5.0%。结论:利用本方法进行脐血造血细胞短期(14天)培养DNA损伤率均低于5.0%,但超过14天时DNA损伤明显增加,体外培养的最佳收获时机应在14天内。 展开更多
关键词 脐血 造血细胞 DNA损伤 体外扩增
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应用酵母双杂交技术筛选与RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白
2
作者 王顺清 钟雯婷 +2 位作者 邓晖 毛平 许艳丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期730-732,737,共4页
目的:应用酵母双杂交技术筛选小鼠巨噬细胞中与核因子κB受体激活因子(RANK)蛋白上新基序IVVY相互作用的蛋白,以探寻RANKL/RANK系统中介导破骨细胞形成的RANK下游新信号转导蛋白。方法:应用GAL4酵母双杂交系统3,构建仅包含编码新基序535... 目的:应用酵母双杂交技术筛选小鼠巨噬细胞中与核因子κB受体激活因子(RANK)蛋白上新基序IVVY相互作用的蛋白,以探寻RANKL/RANK系统中介导破骨细胞形成的RANK下游新信号转导蛋白。方法:应用GAL4酵母双杂交系统3,构建仅包含编码新基序535IVVY538的一小段RANK的cDNA片段为诱饵质粒pGBKT7-IVVY,并与巨噬细胞cDNA文库质粒pGADT7-library共转化AH109酵母,筛选与RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白,通过回复性杂交实验验证其可靠性,并对阳性克隆进行测序和基因同源性分析。结果:筛选出4个可能与IVVY基序有相互作用的蛋白,包括Ring1和YY1结合蛋白(RYBP)、ATP结合盒、E2F转录因子和热休克蛋白8,其中表达RYBP的阳性克隆出现频率高、速度快。结论:应用酵母双杂交技术成功地筛选出4个可能与IVVY基序相互作用的候选蛋白,其中RYBP可能性最大。 展开更多
关键词 酵母双杂交 RANKL/RANK系统 IVVY基序 相互作用蛋白质
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变性高效液相色谱技术定量检测急性髓细胞白血病FLT3基因内部串联重复突变方法学的建立 被引量：4
3
作者 陈建兰 李庆山 +7 位作者 王汉平 应逸 杜庆华 许艳丽 陈晓燕 谢健晋 毛平 李志鹏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1852-1856,共5页
目的:建立一种应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)相对定量检测急性髓细胞白血病(AML)患者Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因的内部串联重复(ITD)突变的方法。方法:根据FLT3-ITD突变基因多位于14外显子而设计引物,用聚合酶链反应(PCR)方法特异... 目的:建立一种应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)相对定量检测急性髓细胞白血病(AML)患者Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因的内部串联重复(ITD)突变的方法。方法:根据FLT3-ITD突变基因多位于14外显子而设计引物,用聚合酶链反应(PCR)方法特异性扩增121例AML患者FLT3-ITD突变基因,再用DH-PLC技术相对定量检测FLT3-ITD等位基因突变的情况;与毛细管电泳法(CE)检测突变的结果对比进行该方法的有效性检验;最后与121例样品PCR扩增产物的测序结果进行对比。结果:经DHPLC分析后均能得到特征性的洗脱峰。121例样本中检测到FLT3-ITD突变阳性的样本13例,总阳性率为10.7%,阳性突变等位基因的比例不一,分布范围中位数为34.5%(11.4%-80.2%),为21-87 bp单个插入片段。阳性率和突变比例与CE方法检测结果相比较均无显著差异(P>0.05),并与121例样本FLT3-ITD扩增PCR产物基因测序结果一致。结论:成功建立了一种应用DHPLC相对定量检测AML患者FLT3-ITD基因突变的方法。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱 白血病 髓样 急性 Fms样酪氨酸激酶3 内部串联重复 基因
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