卵黄抗体用于蛇毒抗原检测的初步研究 被引量：5

1

作者 王桂平 余清声 +3 位作者 刘新艳 朱柳 覃媛 黄劭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1351-1354,共4页

目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶... 目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶标抗体应用于常规ELISA中,对国内常见蛇毒样品抗原(包括眼镜王蛇毒、眼镜蛇毒、金环蛇毒、银环蛇毒、五步蛇毒及广东园斑蝰蛇毒)进行检测,并进行灵敏度、精确度、特异性及交叉反应等分析.结果检测的灵敏度可达32 μg·L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32～750 μg·L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);初步应用表明卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500 μg·L-1)时存在轻度交叉反应,不干扰实验检测,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显,干扰实验检测;应用本方法对低(100 μg·L-1)、中(300 μg·L-1)、高(1 000 μg·L-1)不同浓度的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内变异系数均在1%～3%之内,板间变异系数在8%以内.结论 特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,具有灵敏度高、特异性较强等优点.该研究将为蛇伤诊断试剂盒的研制提供相应的理论依据. 展开更多

关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体(IgY) 酶联免疫吸附试验(ELISA) IGG类抗体

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中华眼镜蛇毒活性组分体外抑制三维血管生成的实验研究 被引量：3

2

作者 余清声 刘晓颖 +1 位作者 覃媛 黄劭 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第10期1105-1109,共5页

目的研究中华眼镜蛇毒活性组分的抗血管生成作用。方法采用拟血管生成三维培养法,观察活性组分对体外血管生成的抑制效应。结果活性组分可抑制内皮细胞在培养基质中生成血管网状三维结构的反应,0.6、1.2、2.4μg·ml-1的不同浓度组... 目的研究中华眼镜蛇毒活性组分的抗血管生成作用。方法采用拟血管生成三维培养法,观察活性组分对体外血管生成的抑制效应。结果活性组分可抑制内皮细胞在培养基质中生成血管网状三维结构的反应,0.6、1.2、2.4μg·ml-1的不同浓度组分抑制程度不同。在0.6μg·ml-1浓度组,培养基质Matrigel中的内皮细胞团只形成局部的、不完整的空间网状结构;在1.2μg·ml-1浓度组,悬浮于凝胶中的细胞团所形成的管芽不能相互连接而形成空间网状结构;在2.4μg·ml-1浓度组,细胞散在悬浮于胶层中大部分不能粘聚,且随培养时间的延长无明显的结构变化。结论中华眼镜蛇毒活性组分具有体外抑制血管生成的生物活性。 展开更多

关键词 中华眼镜蛇毒 抗血管生成 三维血管生 成 内皮细胞 体外 细胞培养

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中华眼镜蛇毒组份Ⅲ的药代动力学及组织分布研究 被引量：3

3

作者 侯力强 赵路宁 +3 位作者 林振桃 强永刚 廖永华 管锦霞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期2058-2062,共5页

目的 :观察中华眼镜蛇 (Najanajaatra)蛇毒组份Ⅲ在兔体内的药代动力学过程和在小鼠体内的分布状况。方法 :用氯胺 -T法对眼镜蛇毒组份Ⅲ进行碘化标记 ,用放射性核素示踪动力法检测血液中的药物浓度 ,以放射性参与量 (脏器与血液放射比 ... 目的 :观察中华眼镜蛇 (Najanajaatra)蛇毒组份Ⅲ在兔体内的药代动力学过程和在小鼠体内的分布状况。方法 :用氯胺 -T法对眼镜蛇毒组份Ⅲ进行碘化标记 ,用放射性核素示踪动力法检测血液中的药物浓度 ,以放射性参与量 (脏器与血液放射比 )的比值作为组份Ⅲ在组织中分布的依据。结果 :兔静脉注射眼镜蛇毒组份Ⅲ 75、15 0和 30 0 μg/kg 3个剂量后 ,快分布相半衰期T1/2 α为 39 6 - 4 2 5min ,慢分布相半衰期T1/2 β为 16 8- 17 3h ,消除相半衰期T1/2 γ为 2 1 7- 2 2 1h。小鼠尾静脉注射 [12 5Ⅰ ]-组份Ⅲ后 ,2h及 4h放射性参与量大于 1的器官为肝脏、肾脏、肺脏、心脏和肌肉 ,其中以肾脏分布最高 ,且 4h放射性参与量高于 2h。结论 :兔静脉注射组份Ⅲ 3个剂量后 ,血药 -时间曲线经 3P87药动学程序拟合符合三房室模型特征 ,3个时相的半衰期各剂量组之间无显著差异 ,曲线下面积 (AUC)与剂量成正比 ,表明药物在兔体内的分布和消除为一级线性动力学过程。小鼠静注组份Ⅲ后 2h ,以肾脏分布最高 ,肝脏与肺脏的放射性参与量也较高 。 展开更多

关键词 眼镜蛇毒液类 药代动力学

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国产蛇毒激活血浆蛋白C的研究 被引量：1

4

作者 孙林光 管锦霞 +1 位作者 黄劭 余清声 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期241-244,共4页

目的 :从 9种国产蛇毒中筛选具有激活血浆蛋白C作用的蛇毒。方法 :运用活化部分凝血活酶时间(APTT)和发色底物实验分别观察抗凝活性和酰胺酶活性 ,综合抗凝活性和酰胺酶活性确定蛋白C蛇毒激活作用。结果 :在 9种国产蛇毒中烙铁头蛇毒及... 目的 :从 9种国产蛇毒中筛选具有激活血浆蛋白C作用的蛇毒。方法 :运用活化部分凝血活酶时间(APTT)和发色底物实验分别观察抗凝活性和酰胺酶活性 ,综合抗凝活性和酰胺酶活性确定蛋白C蛇毒激活作用。结果 :在 9种国产蛇毒中烙铁头蛇毒及蝮蛇毒在 1 5mg/L浓度下即使人血浆纯蛋白C产生酰胺酶活性 ,并使APTT显著延长。结论 :9种国产蛇毒中烙铁头蛇毒及蝮蛇毒具有激活人体血浆蛋白C成为活化蛋白C(APC) 展开更多

关键词 蛇毒液类 血浆 蛋白质C 酶激活

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眼镜蛇毒直接溶解因子对人肝癌细胞株H_(7402)产生NO和LPO的影响 被引量：12

5

作者 龚海云 余清声 +1 位作者 管锦霞 黄劭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期18-21,共4页

目的：研究眼镜蛇毒直接溶解因子（ＤＬＦ）对人肝癌细胞株Ｈ７４０２产生一氧化氮（ＮＯ）和脂质过氧化物（ＬＰＯ）的影响。结果：ＤＬＦ对体外培养的Ｈ７４０２细胞有杀伤作用，ＩＣ５０为２４７ｍｇ·Ｌ－１，ＤＬＦ与Ｈ７４... 目的：研究眼镜蛇毒直接溶解因子（ＤＬＦ）对人肝癌细胞株Ｈ７４０２产生一氧化氮（ＮＯ）和脂质过氧化物（ＬＰＯ）的影响。结果：ＤＬＦ对体外培养的Ｈ７４０２细胞有杀伤作用，ＩＣ５０为２４７ｍｇ·Ｌ－１，ＤＬＦ与Ｈ７４０２细胞的生长抑制率呈量效关系。ＤＬＦ可介导Ｈ７４０２细胞产生大量ＮＯ２，ＮＯ２量与ＤＬＦ的剂量呈量效关系。在一定剂量范围内ＮＯ２量与Ｈ７４０２的生长抑制率呈显著正相关。用５７０型粘附式细胞仪测定单个细胞内ＬＰＯ，发现ＤＬＦ可使Ｈ７４０２细胞内ＬＰＯ产生增加。结论：ＤＬＦ可杀伤Ｈ７４０２细胞，其部分机制可能是通过诱导肿瘤细胞产生ＮＯ和ＬＰＯ。 展开更多

关键词 肝肿瘤 一氧经氮 脂质过氧化 蛇毒 DLF

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抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的制备 被引量：7

6

作者 王桂平 余清声 +1 位作者 覃媛 黄劭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1426-1429,共4页

目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼... 目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫抗散法测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用福林酚法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度 ;抗体的特异性及交叉反应采用酶联免疫吸附法进行进行验证。结果　母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0天后抗体效价超过 10 5;卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97 5mg ;所获取的抗体具有高度特异性 ,与蝰蛇科属的其它蛇毒无交叉反应 ,与眼镜蛇科蛇毒存在不同程度交叉反应 (蛇毒浓度大于5 0 0 μg·L-1时明显 )。结论　本研究首次研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,开拓了我国蛇伤治疗的新领域 ,并分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础 ,同时也促进其它抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制。 展开更多

关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体(IgY) 鸡

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中华眼镜蛇毒F组份对血小板活化时蛋白酪氨酸磷酸化的影响 被引量：2

7

作者 张梅 余清声 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期293-295,共3页

目的 :观察中华眼镜蛇毒F组份抑制血小板聚集的胞内信号转导机制。方法 :实验分 6组 :(1)空白组 ;(2 )对照组 ;(3) - (6 )实验组加入浓度为 10 0、30、10、3mg/LF组份。用比浊法测定血小板聚集率。用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting... 目的 :观察中华眼镜蛇毒F组份抑制血小板聚集的胞内信号转导机制。方法 :实验分 6组 :(1)空白组 ;(2 )对照组 ;(3) - (6 )实验组加入浓度为 10 0、30、10、3mg/LF组份。用比浊法测定血小板聚集率。用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定血小板内蛋白酪氨酸磷酸化的表达。结果 :F组份呈浓度依赖性抑制二磷酸腺苷 (ADP)引起的分子量为 76、6 6和 37 5kD蛋白酪氨酸磷酸化的表达 ,其中 30、10 0mg/L给药组中 ,3个分子量蛋白与对照组比较均有显著差异 ,P <0 . 0 5。F组份对ADP引起血小板聚集作用的抑制同降低 76、6 6和 37 5kD 3个分子量蛋白酪氨酸磷酸化的表达呈明显的正相关 (r=0 . 936 7,P <0 . 0 1)。结论 :中华眼镜蛇毒F组份通过抑制分子量为 76、6 6和37 5kD蛋白的酪氨酸磷酸化表达 ,对血小板胞内信号转导过程发生影响 ,可能是其抗栓机制之一。 展开更多

关键词 眼镜蛇毒液类 血小板聚集 印迹法 蛋白质 蛋白质酪氨酸磷酸化 信号转导

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肉苁蓉和管花肉苁蓉通便与补肾壮阳药理作用的研究 被引量：33

8

作者 吴波 顾少菊 +1 位作者 傅玉梅 雅来 《中医药学刊》 2003年第4期539-539,548,共2页

目的 :为了阐明管花肉苁蓉是否可以作为肉苁蓉代用品使用。方法 :根据其主治功效 ,对肉苁蓉和管花肉苁蓉水煎液对小鼠通便作用及对“肾阳虚”小鼠体重、耐寒时间等进行了实验研究。结果 :二者均具有一定的通便润燥和温补肾阳的作用。结... 目的 :为了阐明管花肉苁蓉是否可以作为肉苁蓉代用品使用。方法 :根据其主治功效 ,对肉苁蓉和管花肉苁蓉水煎液对小鼠通便作用及对“肾阳虚”小鼠体重、耐寒时间等进行了实验研究。结果 :二者均具有一定的通便润燥和温补肾阳的作用。结论 :初步认为在目前肉苁蓉地道药材资源急骤减少时 ,管花肉苁蓉可以代肉苁蓉使用。 展开更多

关键词 肉苁蓉 管花肉苁蓉 药理作用研突

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中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响

9

作者 余清声 张梅 +1 位作者 覃媛 黄劭 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第6期683-686,共4页

目的 :研究中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :用体外培养的血管平滑肌细胞 ,观察F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸 (H3 TdR)掺入的影响 ,用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定F组分对 2 ... 目的 :研究中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :用体外培养的血管平滑肌细胞 ,观察F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸 (H3 TdR)掺入的影响 ,用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原 (Pro liferationcellnuclearantigen ,PCNA)表达的影响。结果 :F组分呈浓度依赖性抑制 2 0 %小牛血清引起的细胞对H3 TdR掺入率和细胞内C myc、PCNA的表达 ,其中 30、10 0mg·L-1给药组与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :中华眼镜蛇毒F组分通过影响细胞内原癌基因C myc、PCNA的表达 。 展开更多

关键词 中华眼镜蛇毒F组分 血管平滑肌细胞 增 殖 H3.TdR C-MYC PCNA 蛋白质免疫印迹法

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小剂量茶碱对支气管哮喘患者外周淋巴细胞PAF受体mRNA表达的影响 被引量：4

10

作者 林振桃 黄海鹭 +2 位作者 赵路宁 余清声 钟南山 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期30-32,共3页

目的了解茶碱对支气管哮喘患者血小板活化因子（ＰＡＦ）受体ｍＲＮＡ表达的影响。方法采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了支气管哮喘患者及健康成人外周淋巴细胞ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ的表达水平，探讨了小剂量茶碱对哮喘... 目的了解茶碱对支气管哮喘患者血小板活化因子（ＰＡＦ）受体ｍＲＮＡ表达的影响。方法采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了支气管哮喘患者及健康成人外周淋巴细胞ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ的表达水平，探讨了小剂量茶碱对哮喘患者外周淋巴细胞ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）被检测的２０例健康成人中只有８例其外周淋巴细胞ＰＡＦ受体的ｃＤＮＡ可被扩增出来，而被检测的２１例哮喘患者均可获得ｃＤＮＡ片断；（２）服用小剂量茶碱１ｗｋ后，哮喘患者ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ表达量（以“闪烁计数ｍｉｎ－１”表示，下同）与给药前的表达量相比无明显变化（Ｐ＞０．０５），服用２ｗｋ后，哮喘患者ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ表达量由给药前的８６４０８±７４６２减少至６８９２７±５８８６（Ｐ＜０．０５），服用３ｗｋ后减少至５６７２０±４８６６（与给药前比较，Ｐ＜０．０１），接近健康人的表达量４９６８８±５４３８。结论连续服用小剂量茶碱可抑制外周淋巴细胞ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ的表达。 展开更多

关键词 哮喘 药物疗法 茶碱 血小板活化因子 mRNA 受体

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H_2O_2预处理对NF-κB的激活作用特征及其细胞保护作用 被引量：1

11

作者 张梅 郭瑞鲜 +7 位作者 莫利球 崔宇 刘微 姚巧玲 杨战利 孟金兰 陈培熹 冯鉴强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1023-1027,共5页

目的探讨H2O2预处理对核转录因子-κB(NF-κB)的激活作用,并观察NF-κB在H2O2预处理诱导的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,分组如下:(1)空白对照组;(2)预处理组;(3)损伤组;... 目的探讨H2O2预处理对核转录因子-κB(NF-κB)的激活作用,并观察NF-κB在H2O2预处理诱导的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,分组如下:(1)空白对照组;(2)预处理组;(3)损伤组;(4)预处理+损伤组;(5)TPCK+预处理+损伤组;(6)TPCK组。应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,免疫印迹法(Westernblot)测定NF-κB的表达水平,电泳迁移实验(EMSA)检测NF-κBDNA结合活性。结果H2O2预处理PC12细胞上调NF-κBp65的表达,增强DNA结合活性,并能明显地增加高浓度H2O2引起的NF-κBp65的表达(与损伤组比较,P<0.01)。H2O2预处理能使PC12细胞对抗高浓度H2O2引起的损伤,提高细胞存活率,降低细胞凋亡率(与损伤组比较,P<0.01)。NF-κB抑制剂甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮(TPCK)可拮抗H2O2预处理对NF-κBp65的激活作用,并减弱H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用(与预处理+损伤组比较,P<0.01)。结论H2O2预处理对NF-κB的激活作用可能是其引起的适应性细胞保护机制之一。 展开更多

关键词 过氧化氢 预处理 核因子-ΚB 适应性细胞保护

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