免疫磁珠体外提纯胚胎大鼠神经干细胞的实验研究 被引量：5

1

作者 王彦惠 刘振华 +5 位作者 廖可立 姜晓丹 徐如祥 李留洋 彭杰 柳息洪 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期959-961,共3页

为建立免疫磁珠体外提纯胚胎神经干细胞 (NSC)的方法 ,制备胚胎SD大鼠的大脑皮质组织悬液 ,采用磁珠分选法选择Nestin阳性细胞群 ,台盼蓝染色观察活力 ,扫描电镜下行形态学观察 ,流式细胞仪检测荧光标记细胞的Nestin表达阳性率。结果发... 为建立免疫磁珠体外提纯胚胎神经干细胞 (NSC)的方法 ,制备胚胎SD大鼠的大脑皮质组织悬液 ,采用磁珠分选法选择Nestin阳性细胞群 ,台盼蓝染色观察活力 ,扫描电镜下行形态学观察 ,流式细胞仪检测荧光标记细胞的Nestin表达阳性率。结果发现 ,分选后所得细胞纯度达 (87 8± 2 4 ) % ,细胞活力 (94 8± 2 3) % ,流式细胞仪检测细胞Nestin阳性表达率为 (88 3± 1 0 4 ) % ,符合NSC的特点 ,扫描电镜观察可见细胞表面有数目不等的磁珠紧密结合。研究表明 ,磁性分选系统是一种有效的神经干细胞分离提纯方法 。 展开更多

关键词 神经干细胞 免疫磁珠 扫描电镜 流式细胞仪 神经巢蛋白 体外提纯

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腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位表达的机制研究 被引量：1

2

作者 方怡 李冰 +2 位作者 陈娟 刘启才 冉丕鑫 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2382-2385,共4页

目的:研究腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)表达的机制。方法:构建稳定表达腺病毒E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞,将GCLC基因5’-上游调控序列不同长度的缺失体-萤火虫荧光素酶报道系统转染后分... 目的:研究腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)表达的机制。方法:构建稳定表达腺病毒E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞,将GCLC基因5’-上游调控序列不同长度的缺失体-萤火虫荧光素酶报道系统转染后分析转录活性的变化;检测AP-1、NF-κB、USF与GCLC基因调控序列的结合活性。结果:GCLC基因5’-上游调控序列报道系统检测结果显示大部分(9/11)缺失体的转录活性抑制,AP-1、NF-κB、USF与GCLC基因的结合活性增强,而对应的功能元件的转录活性降低。结论:腺病毒E1A蛋白通过抑制GCLC基因5’-上游调控序列的转录活性,扩大大鼠肺泡上皮细胞氧化应激时的氧化/抗氧化失衡,其机制可能涉及E1A对辅助转录因子的抑制。 展开更多

关键词 腺病毒E1A蛋白质类 Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 肺疾病 慢性阻塞性

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mtHSP70/HSV-tk重组沙门菌抗小鼠黑色素瘤的作用 被引量：8

3

作者 曾曙光 刘启才 +3 位作者 王素文 彭细毛 章锦才 张积仁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期101-105,共5页

目的研究携带结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)、人单纯疱疹病毒一胸苷激酶(HSV-TK)双基因的重组沙门菌瘤内注射抗小鼠黑色素瘤的抑瘤效应。方法构建重组沙门菌SL7207/PCMV-mtHSP70-IRES-TK,建立小鼠黑色素瘤动物模型,瘤内注射重组沙门菌... 目的研究携带结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)、人单纯疱疹病毒一胸苷激酶(HSV-TK)双基因的重组沙门菌瘤内注射抗小鼠黑色素瘤的抑瘤效应。方法构建重组沙门菌SL7207/PCMV-mtHSP70-IRES-TK,建立小鼠黑色素瘤动物模型,瘤内注射重组沙门菌观察其抑瘤效应、荷瘤鼠的生存期并进行安全性评估。结果瘤内注射重组沙门菌,实验组抑瘤率显著高于对照组,延长荷瘤鼠生存期,重组菌治疗后荷瘤小鼠的生存状态良好,无腹泻,治疗期间体质量无明显改变。结论减毒沙门菌携带的mtHSP70/HSV-TK双基因真核共表达质粒瘤内注射对B16肿瘤细胞具有显著抑制作用。 展开更多

关键词 重组DNA 黑色素瘤 沙门氏菌 结核杆菌热休克蛋白70 人单纯疱疹病毒一胸苷激酶

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F10蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：9

4

作者 付欣 邹东霆 +2 位作者 周问渠 邢福祺 李冰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期856-858,共3页

目的:表达F10蛋白,并制备兔抗F10多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增F10基因片段,经BamH I和EcoR I酶切后连接入pET-GST原核表达载体,构建的pET-GST/F10融合重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达蛋白,并以亲和层析的方法进行纯... 目的:表达F10蛋白,并制备兔抗F10多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增F10基因片段,经BamH I和EcoR I酶切后连接入pET-GST原核表达载体,构建的pET-GST/F10融合重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达蛋白,并以亲和层析的方法进行纯化。表达产物用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定。以纯化的F10蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗F10的多克隆抗体,并以ELISA法检测抗体效价。结果:经酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的F10读码框。SDS-PAGE电泳分析显示pET-GST/F10诱导后表达一相对分子质量(Mr)约为61 000的融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后的纯度达90%以上,Western blot证实该蛋白是GST/F10的融合蛋白。将纯化的GST/F10融合蛋白免疫家兔,得到的兔抗F10抗体效价达1∶20 000。结论:成功构建了人F10基因原核表达载体,并获得了高纯度的F10重组蛋白及兔抗F10抗体,为下一步研究F10基因功能奠定了实验基础。 展开更多

关键词 F10基因 原核表达 抗体

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尾加压素Ⅱ促兔肺动脉平滑肌细胞增殖及机理探讨 被引量：6

5

作者 彭公永 何志义 +3 位作者 刘启才 李冰 钟南山 冉丕鑫 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1597-1600,共4页

目的探讨尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,U-Ⅱ)对兔肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的作用及机理。方法采用植块法培养家兔PASMCs,以MTT测定和[3H]-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法观察U-Ⅱ对PASMCs增殖的影响,加入不同浓度的几种细胞内信号转导阻断剂... 目的探讨尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,U-Ⅱ)对兔肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的作用及机理。方法采用植块法培养家兔PASMCs,以MTT测定和[3H]-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法观察U-Ⅱ对PASMCs增殖的影响,加入不同浓度的几种细胞内信号转导阻断剂,观察对U-Ⅱ效应的影响。结果U-Ⅱ(10-9mol/L-10-7mol/L)浓度依赖地促进PASMCs的A值增加及[3H]-TdR掺入,以10-7mol/LU-Ⅱ的作用最明显,A值和[3H]-TdR掺入量分别较对照组高429%和685%(P<005)。10-10mol/LU-Ⅱ对PASMCs增殖无作用。尼卡地平、W7、H7、PD98059在一定浓度范围内(10-7mol/L-10-5mol/L)均可以浓度依赖地抑制U-Ⅱ诱导的PASMCs的A值增加及[3H]-TdR掺入增加。在浓度为10-5mol/L时,其抑制作用最明显,A值的抑制率分别为423%、196%、232%和105%(P<005),[3H]-TdR掺入量的抑制率分别为466%、98%、217%和147%(P<005)。结论U-Ⅱ具有较强的促PASMCs增殖的作用,其诱导PASMCs增殖是通过Ca2+、CaM、PKC、MAPK来介导的。 展开更多

关键词 尾紧张素类 肺动脉 肌 平滑 血管 兔

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2,3,7,8-四氯苯并二噁英(TCDD)短期染毒可造成着床前胚胎丢失并伴随雌性生殖器官中毒物相关蛋白的诱导表达 被引量：9

6

作者 黄莉 黄韧 +3 位作者 冯媛瑜 刘寒英 丘剑峰 李冰 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2010年第3期334-342,共9页

为探明妊娠早期胚胎的丢失是否与卵巢、输卵管、子宫组织受到2,3,7,8-四氯苯并二噁英(TCDD)直接毒害有关,检测了NIH小鼠胚胎着床前期和后期TCDD暴露对胚胎毒性影响的敏感性,并利用免疫组化方法分析了模型动物肝脏、子宫、输卵管和卵巢... 为探明妊娠早期胚胎的丢失是否与卵巢、输卵管、子宫组织受到2,3,7,8-四氯苯并二噁英(TCDD)直接毒害有关,检测了NIH小鼠胚胎着床前期和后期TCDD暴露对胚胎毒性影响的敏感性,并利用免疫组化方法分析了模型动物肝脏、子宫、输卵管和卵巢组织中TCDD所引起的AhR、ARNT以及Cyp1a2分子标记物的变化.检测发现:妊娠第9d,100ng·kg-1·d-1剂量TCDD经口染毒,造成胚胎着床数量减少,且着床前期暴露的影响大于着床后期;子宫蜕膜反应受到明显抑制;胚胎迁移率没有明显变化,但胚胎数量减少.免疫组织化学分析发现正常组小鼠的肝脏、子宫、输卵管和卵巢组织中有AhR和Cyp1a2弱阳性信号表达,ARNT有细胞核的强阳性信号表达;妊娠第1～8d、第1～3d和第4～8d处理组小鼠肝脏、子宫、输卵管和卵巢组织中的AhR、Cyp1a2的阳性面积和光密度值均高于正常组;随处理时间和组织蓄积量的增加,ARNT在组织中的变化由胞核(妊娠第1～3d组)表达到胞浆(妊娠第4～8d组)表达,然后完全无表达(妊娠第1～8d组).以上研究结果表明:TCDD对早期妊娠小鼠子宫、输卵管和卵巢组织中的AhR、ARNT和Cyp1a2的激活和代谢方式与肝脏相同,说明雌性生殖系统中的组织有TCDD蓄积和代谢活性,这可能是导致早期胚胎迁移、着床等过程改变,造成胚胎丢失的重要原因. 展开更多

关键词 2 3 7 8-四氯苯并二噁英(TCDD) 胚胎丢失 毒性介导蛋白

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糖皮质激素及NAC对腺病毒E1A蛋白上调IL-8及ICAM-1的抑制作用 被引量：4

7

作者 郭园园 冉丕鑫 +3 位作者 张锦 郑西卫 李冰 陈娟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期235-240,共6页

目的探讨腺病毒E1A蛋白在致炎因素TNF-α作用下对人肺腺癌细胞(A549)炎症因子IL-8和ICAM-1表达的影响以及地塞米松(DXM)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的A549细胞系(E1A+组)及对照质粒转染细胞系(E1A-组)。... 目的探讨腺病毒E1A蛋白在致炎因素TNF-α作用下对人肺腺癌细胞(A549)炎症因子IL-8和ICAM-1表达的影响以及地塞米松(DXM)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的A549细胞系(E1A+组)及对照质粒转染细胞系(E1A-组)。用TNF-α刺激、DXM以及NAC干预细胞,用ELISA检测炎症因子IL-8蛋白的表达,流式细胞术检测ICAM-1的表达。结果E1A+组在10μg.L-1的TNF-α作用前后细胞IL-8蛋白浓度分别为(48.49±0.27)ng.L-1和(22 841.75±12.92)ng.L-1,明显高于E1A-组作用前的(1.67±0.07)ng.L-1和作用后的(3 576.04±3.20)ng.L-1,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α单独作用组相比,DXM和NAC预作用细胞可明显降低TNF-α诱导下IL-8的高表达,差异有统计学意义(P<0.01)。E1A+组在10μg.L-1的TNF-α作用前后细胞ICAM-1蛋白浓度(荧光强度)分别为17.12±3.32和35.12±3.19,均高于E1A-组作用前0.59±0.09和作用后29.72±3.32,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α单独作用组相比,DXM和NAC预作用细胞可明显降低TNF-α诱导的ICAM-1的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 E1A蛋白能够增加TNF-α诱导下的IL-8和ICAM-1蛋白的表达。DXM和NAC能够明显拮抗TNF-α诱导下的IL-8和ICAM-1的蛋白表达,具有较强的抗炎作用。腺病毒E1A蛋白对NAC及DXM的抗炎作用无明显拮抗作用。 展开更多

关键词 腺病毒科 即早蛋白质类 糖皮质激素 N-乙酰半胱氨酸 炎症反应 慢性阻塞性肺疾病

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NP9对鼻咽癌细胞系CNE1基因表达谱的影响 被引量：3

8

作者 刘启才 李晓艳 +2 位作者 彭燕 李晓岩 李冰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期982-985,共4页

目的:确定NP9表达对鼻咽癌CNE1细胞基因表达谱的影响。方法:稳定表达NP9基因和稳定转染空载体的CNE1细胞分别作为基因芯片分析的实验组和对照组,用高通量的基因芯片筛选实验组细胞的差异表达基因,荧光定量逆转录PCR验证部分基因表达差... 目的:确定NP9表达对鼻咽癌CNE1细胞基因表达谱的影响。方法:稳定表达NP9基因和稳定转染空载体的CNE1细胞分别作为基因芯片分析的实验组和对照组,用高通量的基因芯片筛选实验组细胞的差异表达基因,荧光定量逆转录PCR验证部分基因表达差异。结果:所分析的14500个基因中,266个检测出有表达差异,其中82个基因呈现表达上调(RA>1),184个基因显示表达下调(RA<1)。显著上调和下调的基因分别为34个(RA>1.5)和75个(RA<1.5)。结论:NP9基因的表达导致了CNE1细胞中与细胞周期调控、细胞增殖和分化、细胞信号转导、细胞黏附相关基因表达的改变,为NP9的功能及分子机制研究提供了新的线索。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 基因 NP9 基因表达 CNE1细胞

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结核杆菌热休克蛋白70与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建 被引量：3

9

作者 曾曙光 张积仁 +4 位作者 章锦才 吴世卿 刘启才 艾伟健 薛国初 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期433-436,445,共5页

目的利用pIRES-EGFP载体构建含有人巨细胞病毒(cytomegaloviru,CMV)启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子真核表达载体pCMV-hsp70-IRES-EGFP。方法根据mtHSP70基因全长cDNA的特异引物... 目的利用pIRES-EGFP载体构建含有人巨细胞病毒(cytomegaloviru,CMV)启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子真核表达载体pCMV-hsp70-IRES-EGFP。方法根据mtHSP70基因全长cDNA的特异引物PCR扩增获得mtHSP70基因序列。将PCR产物进行T载体克隆获得重组质粒PMD-18T-mtHSP70,测序分析选定序列正确的克隆提取质粒,用限制性内切酶Xho I和EcoR I酶切pMD18T-TK和pCMV-IRES-EGFP质粒。将mtHSP70基因定向亚克隆至pCMV-IRES-EGFP载体,酶切鉴定,构建获得含mtHSP70和EGFP基因的重组质粒。Lipofectamine介导下转染B16细胞,并分别在荧光显微镜下观察EGFP的表达和以Westernblot检测mtHSP70蛋白表达情况。结果酶切见特异酶切图谱,该载体在瞬时表达时获得mtHSP70/EGFP的良好表达。结论含mtHSP70和EGFP基因双顺反子真核表达载体pCMV-mtHSP70-IRES-EGFP构建成功,为研究基于以GFP为报告基因的mtHSP70的肿瘤DNA疫苗对肿瘤的治疗作用及机制奠定了实验基础。 展开更多

关键词 结核杆菌 热休克蛋白70 增强型绿色荧光蛋白 真核表达 免疫治疗 肿瘤

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腺病毒潜伏感染对大鼠肺泡上皮细胞氧化／抗氧化平衡的影响 被引量：3

10

作者 方怡 李冰 +2 位作者 陈娟 刘启才 冉丕鑫 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1205-1211,共7页

目的:研究腺病毒潜伏感染对大鼠肺泡上皮细胞氧化/抗氧化平衡的影响。方法:构建稳定表达腺病毒E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞,检测氧化剂刺激时GSH、MDA的含量变化和主要抗氧化酶SOD、CAT、GPx、GST以及γ-GCS酶活性的变化。结果:腺病毒E1... 目的:研究腺病毒潜伏感染对大鼠肺泡上皮细胞氧化/抗氧化平衡的影响。方法:构建稳定表达腺病毒E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞,检测氧化剂刺激时GSH、MDA的含量变化和主要抗氧化酶SOD、CAT、GPx、GST以及γ-GCS酶活性的变化。结果:腺病毒E1A蛋白通过抑制大鼠肺泡上皮细胞内γ-GCS酶的活性,抑制了氧化应激时GSH的合成和GPx及GST酶的活性;腺病毒E1A蛋白下调了细胞在氧化应激后的恢复能力。结论:腺病毒潜伏感染扩大了大鼠肺泡上皮细胞氧化应激时的氧化/抗氧化失衡,而腺病毒E1A蛋白抑制γ-GCS酶的活性是其中的关键环节。 展开更多

关键词 腺病毒潜伏感染 E1A 大鼠 肺泡上皮细胞 肺疾病 阻塞性

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整合荧光素酶的稳定细胞克隆建立裸鼠肺癌静脉移植瘤模型的探索 被引量：4

11

作者 张金栋 吕景礼 +2 位作者 周问渠 刘启才 李晓艳 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第7期1055-1057,共3页

目的:应用建立的整合荧光素酶的稳定细胞克隆构建裸鼠肺癌模型,并用活体成像技术检测肿瘤成瘤及变化。方法:细胞计数分析其生长特性,体外测定不同数量的细胞的发光强度;尾静脉注射接种BLAB/c nu/nu裸鼠,活体成像系统监测裸鼠体内肿瘤的... 目的:应用建立的整合荧光素酶的稳定细胞克隆构建裸鼠肺癌模型,并用活体成像技术检测肿瘤成瘤及变化。方法:细胞计数分析其生长特性,体外测定不同数量的细胞的发光强度;尾静脉注射接种BLAB/c nu/nu裸鼠,活体成像系统监测裸鼠体内肿瘤的生长及转移,肿瘤组织切片验证移植瘤的病理特性。结果:在稳定表达荧光素酶的SPC-A-1-luc+细胞基因组中能有效扩增到荧光素酶基因;该细胞系具有与母细胞相同的生长曲线,体外检测发现其发光强度与细胞数量呈正相关;尾静脉接种裸鼠后肺部成瘤率为100%,且信号强度随时间递增。结论:建立了稳定整合Luciferase基因的肺腺癌细胞株SPC-A-1-luc+稳定克隆,尾静脉接种后可有效构建肺部肺腺癌成瘤模型,并可动态监测肿瘤的生长及转移。 展开更多

关键词 荧光素酶 SPC-A-1细胞 移植瘤 活体成像

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分次胶原酶消化法分离、培养成人肺微小动脉平滑肌细胞 被引量：2

12

作者 洪城 王健 +3 位作者 李冰 彭公永 胡锦兴 冉丕鑫 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1240-1243,共4页

目的:建立一种简便、高效分离和培养成人肺微小动脉平滑肌细胞的方法并鉴定该方法培养的传代细胞生物学特性。方法:分次胶原酶消化法与传统胶原酶消化法进行细胞获得率、细胞存活率及培养成功率比较;绘制生长曲线对原代与传代细胞的生... 目的:建立一种简便、高效分离和培养成人肺微小动脉平滑肌细胞的方法并鉴定该方法培养的传代细胞生物学特性。方法:分次胶原酶消化法与传统胶原酶消化法进行细胞获得率、细胞存活率及培养成功率比较;绘制生长曲线对原代与传代细胞的生长特性进行分析;细胞形态学观察、平滑肌肌动蛋白(SMα-actin)测定及细胞免疫荧光化学法进行细胞鉴定及纯度计算;比较原代与第10代细胞形态、SMα-actin含量、染色体数量及形态。结果:分次胶原酶消化法优于传统胶原酶消化法,细胞获得率(3.10±0.29vs1.20±0.35)×108cells/L、细胞存活率(69%vs21%)及培养成功率(61.5%vs16.7%)(P<0.01);传代细胞长至融合时间7 d快于原代细胞21d;细胞显典型的"峰-谷"状生长,胞浆内表达SMα-actin,细胞纯度达98%以上;原代与第10代细胞形态、SMα-actin含量、二倍体数量(78.13%vs76.47%)及形态无明显差别(P>0.05)。结论:分次胶原酶消化法是一种简便、可行,获得高纯度、功能良好的成人肺微小动脉平滑肌细胞的方法。经过此方法分离、培养的细胞在10代以内传代培养细胞生物学及遗传学特性稳定,可用于实验。 展开更多

关键词 成人肺微小动脉 平滑肌细胞 分次胶原酶消化法 传统胶原酶消化法

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人γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因E-box元件功能初步分析 被引量：2

13

作者 罗伶俐 邹国民 +1 位作者 李冰 冉丕鑫 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1428-1430,共3页

目的:探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列E-box元件的功能。方法:利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列,PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变。扩增获得的突变体片段克隆入PM... 目的:探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列E-box元件的功能。方法:利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列,PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变。扩增获得的突变体片段克隆入PMD18-T载体,DNA测序鉴定后,亚克隆入野生型GCLC-Luc荧光素酶报道载体。将3个突变体质粒和野生型质粒转染人肺泡上皮细胞A549和人支气管上皮细胞16HBE,检测转染后细胞荧光素酶活性值。结果:测序结果证实,成功将E-box1CACGGG突变为AGCGGG;E-box2CACGTG突变为CACGGA。GCLC-Luc、GCLC-mEbox1-Luc(突变E-box1)、GCLC-mEbox2-Luc(突变E-box2)、GCLC-mEbox12-Luc(突变E-box1和E-box2)转染A549细胞后荧光素酶活性值分别为(5197852±132206)U、(5455692±127431)U、(5315722±244197)U、(5174303±183179)U,转染16HBE细胞后荧光素酶活性值分别为(141157±18907)U、(126454±23724)U、(137315±22179)U、(132441±28970)U。经过统计学分析,各组荧光酶活性没有显著差别,均P>0.05。结论:E-box元件不参与基础状态下A549细胞和16HBE细胞GCLC基因转录调控。 展开更多

关键词 16HBE细胞 A549细胞 基因 GCLC Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶

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长爪沙鼠精子的显微结构观察 被引量：2

14

作者 文端成 戴丽军 +2 位作者 彭杰 黄莉 柳息洪 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第1期57-60,共4页

目的　观察长爪沙鼠精子的形态和结构。方法　应用光学显微镜、透射电镜和扫描电镜进行观察。结果与结论　长爪沙鼠精子由头、颈、尾三部分组成 ,全长为 ( 15 6 3 2± 6 61) μm ,头长为 ( 10 4 3± 2 12 ) μm ,颈、尾部长为... 目的　观察长爪沙鼠精子的形态和结构。方法　应用光学显微镜、透射电镜和扫描电镜进行观察。结果与结论　长爪沙鼠精子由头、颈、尾三部分组成 ,全长为 ( 15 6 3 2± 6 61) μm ,头长为 ( 10 4 3± 2 12 ) μm ,颈、尾部长为 ( 14 5 89± 5 14 ) μm ,具典型的啮齿类动物的精子形态 ;长爪沙鼠精子的尾部轴丝是 9+ 2模式 ,轴丝外围有 9条大小、形态不一的外周致密纤维 ,外周致密纤维从主段到末端逐渐变细 ,并在主段的近末端处分 4批终止 ;主段的纤维鞘具有腹侧纵柱、背侧纵柱、内嵴等结构。在精子尾部的末段 ,外层仍保留有纤维鞘的结构 ,但无外周致密纤维 ,轴丝仍然为 9+ 展开更多

关键词 长爪沙鼠 精子 显微结构 实验动物

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腺病毒E1A蛋白对大鼠肺泡上皮细胞及人肺腺癌细胞凋亡的影响 被引量：1

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作者 陈娟 张锦 +4 位作者 郑西卫 郭园园 付欣 李冰 冉丕鑫 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期423-426,共4页

目的:探讨腺病毒E1A蛋白对大鼠肺泡上皮细胞(CCL149)及人肺腺癌细胞(A549)在致凋亡因素TNF-α诱导下细胞凋亡影响。方法:将含腺病毒E1A基因完全编码区的Pneo-E1A质粒分别转染CCL149、A549细胞,用G418筛选抗性细胞克隆,用RT-PCR、免疫组... 目的:探讨腺病毒E1A蛋白对大鼠肺泡上皮细胞(CCL149)及人肺腺癌细胞(A549)在致凋亡因素TNF-α诱导下细胞凋亡影响。方法:将含腺病毒E1A基因完全编码区的Pneo-E1A质粒分别转染CCL149、A549细胞,用G418筛选抗性细胞克隆,用RT-PCR、免疫组化方法对单个细胞克隆进行筛选鉴定;将经鉴定确定的稳定转染E1A基因的阳性细胞克隆、对照质粒转染细胞克隆用致凋亡因素TNF-α刺激,用Hoechest荧光染色分析及流式细胞仪结合膜联蛋白V-FITC标记法检测细胞凋亡情况。结果:稳定转染E1A基因的CCL149细胞(C-E1A+)在30μg/LTNF-α作用前、后细胞的凋亡率分别为(2.63±0.8)%和(25.38±0.9)%,明显高于对照质粒转染细胞(C-E1A-)作用前的(0.62±0.3)%和作用后的(6.08±0.2)%,两组相比差别有统计学意义(P<0.01);稳定转染E1A基因的A549细胞(A-E1A+)在30μg/LTNF-α作用前、后细胞的凋亡率分别为(5.12±0.5)%和(19.82±1.6)%,明显高于对照质粒转染细胞(A-E1A-)作用前的(2.02±0.7)%和作用后的(9.15±1.2)%,两组相比差别有统计学意义(P<0.01)。结论:E1A蛋白能够增加细胞对致凋亡因素的敏感性,上调TNF-α诱导下的细胞凋亡。 展开更多

关键词 腺病毒 潜伏感染 凋亡

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siRNA沉默LBH基因促进人支气管上皮细胞周期进展 被引量：1

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作者 刘启才 王颖峰 +5 位作者 杨春祥 李晓艳 彭燕 彭杰 李冰 李立 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期357-360,共4页

目的:利用合成的小分子干扰RNA(siRNA)转染人支气管上皮细胞16HBE,观察LBH(limb-budand heart)基因表达下调对16HBE细胞周期及相关基因表达的影响。方法:脂质体2000转染靶向LBH基因的siRNA到16HBE细胞,荧光定量RT-PCR检测siRNA转染后LB... 目的:利用合成的小分子干扰RNA(siRNA)转染人支气管上皮细胞16HBE,观察LBH(limb-budand heart)基因表达下调对16HBE细胞周期及相关基因表达的影响。方法:脂质体2000转染靶向LBH基因的siRNA到16HBE细胞,荧光定量RT-PCR检测siRNA转染后LBH基因表达,流式细胞术检测LBH基因沉默后16HBE细胞周期的改变,荧光定量RT-PCR及Western blotting检测LBH基因沉默后细胞周期素E1和E2表达水平。结果:50 nmol/L siRNA转染16HBE细胞48 h后,LBH基因的表达水平只有对照组的14%;siRNA转染16HBE细胞48 h,其G1期细胞百分率比对照组减少9.28%,而S期细胞百分比增加14.08%;16HBE细胞在50nmol/L siRNA的转染后,细胞周期素E2的表达水平为对照组的2倍,而细胞周期素E1的表达没有发生明显改变。结论:靶向于LBH基因的siRNA能有效沉默16HBE细胞中LBH基因的表达,LBH基因的表达下调促进了16HBE细胞周期G1/S期的进展;细胞周期素E2的表达上调参与了LBH沉默导致的细胞周期G1/S期的进展。 展开更多

关键词 RNA干扰 基因 LBH 16HBE细胞 细胞周期

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中国南方汉族人群Clara细胞蛋白基因38A/G多态性和COPD易感性的关系 被引量：1

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作者 刘升明 周玉民 +4 位作者 李冰 吴义 黄志宏 汤泰秦 冉丕鑫 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期246-250,共5页

目的:研究C lara细胞蛋白(CC16)基因的38A/G多态性与中国南方汉族人群慢性阻塞性肺疾病(COPD)的相关性。方法:在广州城区和韶关农村流行病学调查人群中经严格配对选取COPD患者与非COPD受试者共332例作为研究对象,采用聚合酶链反应-单链... 目的:研究C lara细胞蛋白(CC16)基因的38A/G多态性与中国南方汉族人群慢性阻塞性肺疾病(COPD)的相关性。方法:在广州城区和韶关农村流行病学调查人群中经严格配对选取COPD患者与非COPD受试者共332例作为研究对象,采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法,检测两组CC16的各种基因型和等位基因频率。结果:COPD与非COPD组CC16基因第1外显子第38位点的基因型频率和等位基因频率分布差异无显著性(AA基因型频率:17.5%vs 17.5%;GG基因型频率:34.9%vs 42.8%;AG基因型频率:47.6%vs 39.7%;等位基因A频率:41.3%vs 37.3%;等位基因G频率:58.7%vs 62.7%)。结论:CC16基因第1外显子38A/G多态性可能与我国南方汉族人群COPD的易感性无关。 展开更多

关键词 慢性阻塞性肺疾病 基因多态性 Clara细胞蛋白

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重组蟹金属硫蛋白对长爪沙鼠脑缺血再灌注损伤的抗氧化作用 被引量：2

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作者 韦永芳 刘寒英 +2 位作者 曹晓敏 郭慧 李冰 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第1期16-19,共4页

目的探讨外源性重组蟹金属硫蛋白(rMT)对长爪沙鼠脑缺血再灌注损伤的抗氧化作用。方法160只长爪沙鼠随机分为4组(每组又分为4个亚组),比较假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(I/R组)、MT预处理组(MT组)和依达拉奉阳性对照组(ED组)分别再灌... 目的探讨外源性重组蟹金属硫蛋白(rMT)对长爪沙鼠脑缺血再灌注损伤的抗氧化作用。方法160只长爪沙鼠随机分为4组(每组又分为4个亚组),比较假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(I/R组)、MT预处理组(MT组)和依达拉奉阳性对照组(ED组)分别再灌注2 d3、d、5 d和7 d后,血清的谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)的变化。结果MT组在一定的时间点能明显提高血清中GSH-Px、SOD和T-AOC的活性(P<0.05),减少MDA含量(P<0.05)。结论MT在一定的时间窗内可增强体内抗氧化酶活力,阻止脂质过氧化水平的升高,减轻脑缺血再灌注引起的神经元损伤,但MT在缺血再灌注的早期对GSH含量的作用不明显。 展开更多

关键词 金属硫蛋白 长爪沙鼠 脑缺血再灌注 抗氧化

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男性不育精液电镜诊断 被引量：3

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作者 彭杰 柳息洪 《电子显微学报》 CAS CSCD 2000年第6期772-776,共5页

采用 190例男性不育患者的精液 ,作超薄切片 ,透射电镜下观察 ,进行诊断并结合文献探讨其不育的原因 ,为临床治疗男性不育患者提供依据。结果发现本文例除无精症外均属于复合型精子结构异常 ,各例精子大部分均有多个部位和多个细胞器结... 采用 190例男性不育患者的精液 ,作超薄切片 ,透射电镜下观察 ,进行诊断并结合文献探讨其不育的原因 ,为临床治疗男性不育患者提供依据。结果发现本文例除无精症外均属于复合型精子结构异常 ,各例精子大部分均有多个部位和多个细胞器结构异常。这些结构异常使受精能力降低 ,成为男性不育的原因。因此 ,对男性不育患者进行精液电镜诊断十分必要。 展开更多

关键词 电镜诊断 精子 男性不育

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单纯疱疹病毒胸苷激酶与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建 被引量：1

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作者 曾曙光 吴世卿 +3 位作者 张积仁 章锦才 刘启才 艾伟健 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期117-120,F0003,共5页

【目的】构建含有人巨细胞病毒(CMV)调控表达的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达质粒pCMV-TK-IRES-EGFP。【方法】设计HSV-tkcDNA的特异引物,PCR扩增获得HSV-tk基因序列,将PCR产物进行T载体克隆获... 【目的】构建含有人巨细胞病毒(CMV)调控表达的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达质粒pCMV-TK-IRES-EGFP。【方法】设计HSV-tkcDNA的特异引物,PCR扩增获得HSV-tk基因序列,将PCR产物进行T载体克隆获得重组质粒pMD18T-TK,测序分析选定序列正确的克隆提取质粒,用限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ分别酶切pMD18T-TK和pCMV-IRES-EGFP质粒,将HSV-tk基因定向亚克隆至pCMV-IRES-EGFP载体,酶切鉴定,构建获得含EGFP和HSV-tk基因的重组质粒,Lipofectin介导转染小鼠黑色素瘤B16细胞并检测其表达情况。【结果】酶切见特异酶切图谱,该质粒在瞬时表达时获得EGFP的良好表达。【结论】含HSV-tk和EGFP基因真核表达质粒pCMV-TK-IRES-EGFP构建成功,为利用绿色荧光蛋白标记在后续实验中进行自杀性基因治疗的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 HSV-TK/EGFP基因 内部核糖体进入位点 真核表达

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