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“两步转化法”高效制备携带自杀基因的重组腺病毒载体
被引量：
3
1
作者
杨文宇
黄宗海
+2 位作者
汤福祥
钱勇
车小燕
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2004年第2期164-167,共4页
目的采用“两步转化法”高效制备含胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的腺病毒重组载体。方法将质粒pAdEasy-1线性化后转化于BJ5183菌,制备AdEasy-1细菌;自载体pBS-CD中切出CD基因,亚克隆至穿梭质粒pAdtrackCMV上,构建的pAdtrackCMV-CD线性化后...
目的采用“两步转化法”高效制备含胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的腺病毒重组载体。方法将质粒pAdEasy-1线性化后转化于BJ5183菌,制备AdEasy-1细菌;自载体pBS-CD中切出CD基因,亚克隆至穿梭质粒pAdtrackCMV上,构建的pAdtrackCMV-CD线性化后转化AdEasy-1细菌,抽提同源重组腺病毒质粒,PacⅠ酶切后转染293细胞,在293细胞中包装与扩增,利用GFP报告基因进行滴度测定。同时按“一步转化法”进行同样的重组腺病毒制备,比较二者的优劣性。结果“两步转化法”终产物17个克隆中13个正确,正确率为76.5%(13/17);“一步转化法”重组产物17个克隆中有2个正确,正确率为11.8%(2/17),两者具有显著性差异(P=0.000 17)。结论“两步转化法”细菌内同源重组是一种更高效、更方便的重组腺病毒制备方法。
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关键词
两步转化法
制备
自杀基因
重组腺病毒载体
恶性肿瘤
基因治疗
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题名
“两步转化法”高效制备携带自杀基因的重组腺病毒载体
被引量：
3
1
作者
杨文宇
黄宗海
汤福祥
钱勇
车小燕
机构
第一军医大学珠江医院普外科
广州军区总院放射科
第一军医大学珠江医院中心实验室
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2004年第2期164-167,共4页
基金
国家863计划项目(2001AA217171)
广东省自然科学基金重点项目(013072)~~
文摘
目的采用“两步转化法”高效制备含胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的腺病毒重组载体。方法将质粒pAdEasy-1线性化后转化于BJ5183菌,制备AdEasy-1细菌;自载体pBS-CD中切出CD基因,亚克隆至穿梭质粒pAdtrackCMV上,构建的pAdtrackCMV-CD线性化后转化AdEasy-1细菌,抽提同源重组腺病毒质粒,PacⅠ酶切后转染293细胞,在293细胞中包装与扩增,利用GFP报告基因进行滴度测定。同时按“一步转化法”进行同样的重组腺病毒制备,比较二者的优劣性。结果“两步转化法”终产物17个克隆中13个正确,正确率为76.5%(13/17);“一步转化法”重组产物17个克隆中有2个正确,正确率为11.8%(2/17),两者具有显著性差异(P=0.000 17)。结论“两步转化法”细菌内同源重组是一种更高效、更方便的重组腺病毒制备方法。
关键词
两步转化法
制备
自杀基因
重组腺病毒载体
恶性肿瘤
基因治疗
Keywords
neoplasms
gene therapy
suicide gene
adenovirus vector
homologous recombination
分类号
R73-36 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
“两步转化法”高效制备携带自杀基因的重组腺病毒载体
杨文宇
黄宗海
汤福祥
钱勇
车小燕
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2004
3
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