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硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株的建立及其差异表达蛋白的飞行时间质谱分析 被引量:6
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作者 朱蓉 奚昊 +3 位作者 李勇华 姜华 邹剑锋 侯健 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期445-452,共8页
目的:建立硼替佐米耐药的骨髓瘤细胞株,探讨硼替佐米敏感和耐药多发性骨髓瘤细胞株在蛋白质组水平上的差异。方法:采用硼替佐米浓度递增法诱导NCI-H929细胞株产生耐药株。采用流式细胞术比较亲本NCI-H929和NCI-H929B的细胞周期,双向电泳... 目的:建立硼替佐米耐药的骨髓瘤细胞株,探讨硼替佐米敏感和耐药多发性骨髓瘤细胞株在蛋白质组水平上的差异。方法:采用硼替佐米浓度递增法诱导NCI-H929细胞株产生耐药株。采用流式细胞术比较亲本NCI-H929和NCI-H929B的细胞周期,双向电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析两者间的差异蛋白表达情况。采用Westernblot方法对部分鉴定结果进行验证。结果:采用浓度递增法自骨髓瘤细胞系NCI-H929建立了硼替佐米耐药株NCI-H929B。MTT法检测硼替佐米对亲本NCI-H929和NCI-H929B 24 h的IC50,其分别为20.7 nmol/L和487.4 nmol/L,耐药倍数为23.5。生长曲线及流式细胞术分析显示NCI-H929亲本和NCI-H929B的生长曲线和细胞周期分布无显著性差异。与亲本NCI-H929细胞的2-DE相比,NCI-H929B细胞中有11个蛋白点表达明显上调,6个明显下调。对这17个蛋白质点进行MALDI-TOF-MS分析,共获得了17个肽质量指纹图谱(PMF)。将PMF质量数据通过Aldente软件查询SWISS-PROT数据库,根据匹配片段及氨基酸序列覆盖率等,初步鉴定出14种蛋白质。Western blot验证其中一种蛋白质(蛋白DJ-1),结果与双向电泳鉴定结果基本一致。结论:通过浓度递增法可建立硼替佐米耐药的骨髓瘤细胞株。双向电泳结果提示这些差异表达的蛋白质可能与多发性骨髓瘤对硼替佐米耐药的机制有关。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤/药物疗法 抗药性 肿瘤 硼酸化物/治疗应用 吡嗪类/治疗应用 蛋白质类/分析 电泳 凝胶 双向
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骨髓间充质干细胞上调再生障碍性贫血患者CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的临床研究 被引量:7
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作者 刘增慧 肖扬 +7 位作者 蒋祖军 李力 高扬 李勇华 李利 庞妍 欧阳玲 邝丽萍 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第9期1582-1585,共4页
目的:初步探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达及临床意义;探讨临床使用异体骨髓间充质干细胞(MSC)治疗对CD4+CD25+Foxp3+Treg表达的影响。方法:(1)流式细胞仪检测13例重型再生障碍性贫血(SAA),17... 目的:初步探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达及临床意义;探讨临床使用异体骨髓间充质干细胞(MSC)治疗对CD4+CD25+Foxp3+Treg表达的影响。方法:(1)流式细胞仪检测13例重型再生障碍性贫血(SAA),17例慢性再生障碍性贫血(CAA)及10例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达;(2)检测7例AA患者MSC治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达。结果:(1)AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达明显低于健康对照者(P<0.01);(2)SAA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达较CAA者低(P<0.05);(3)MSC治疗后AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达升高(P<0.05)。结论:(1)AA患者存在外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达减低,其表达异常可能参与AA的发病;(2)CD4+CD25+Foxp3+Treg表达在SAA患者更低,提示其表达水平可能可以作为判断AA病情轻重的指标;(3)MSC治疗可上调AA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达,为MSC纠正AA患者的免疫异常提供了临床依据。 展开更多
关键词 贫血 再生障碍性 间充质干细胞 调节性T细胞
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CD4^+CD25^+调节性T细胞在骨髓造血系统疾病中的研究进展 被引量:11
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作者 刘增慧 李勇华 肖扬 《医学研究生学报》 CAS 2011年第1期87-91,共5页
CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)是具有独特免疫调节功能的T细胞亚群。天然CD4+CD25+Treg起源于胸腺,外周血中CD4+CD25-T细胞亦可诱导产生。其分子表面表达特异性的转录抑制因子Foxp3,还表达CD4、CD25、CTLA-4(CD152))、G... CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)是具有独特免疫调节功能的T细胞亚群。天然CD4+CD25+Treg起源于胸腺,外周血中CD4+CD25-T细胞亦可诱导产生。其分子表面表达特异性的转录抑制因子Foxp3,还表达CD4、CD25、CTLA-4(CD152))、GITR、CD103、CD62L、CD69、CD134、CD71、CD54、CD45RA、TGF-β1、IL-10、半乳糖结合蛋白(glactin)-1、神经菌毛素(neuropilin)-1等膜分子,具有免疫抑制和免疫无能作用。近年来研究发现,急性髓细胞白血病(acute myeloid leuke-mia,AML)、慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)、高危骨髓异常增生综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者Treg表达异常增高,而在再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者表达明显降低,其异常表达还与急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的发生发展密切相关。文中就Treg在白血病、aGVHD、AA、MDS、多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)等骨髓造血系统疾病中的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 CD4+CD25+调节性T细胞 白血病 急性移植物抗宿主病 再生障碍性贫血 骨髓增生异常综合征 多发性骨髓瘤
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p15^(INK4B)基因甲基化在急性粒细胞白血病和慢性粒细胞白血病中的研究 被引量:2
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作者 郭秀枝 范洪涛 +8 位作者 吴穷 周涛 郭秋野 陈鹏 许敏华 张学莉 罗更新 肖扬 梁实 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期266-270,共5页
为探索 p15 INK4B基因在CpG岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用 ,应用敏感的甲基化特异的MSP PCR的测定方法 ,测定了 p15 INK4B基因在急性粒细胞白血病 (AML)和慢性粒细胞白血病 (CML)中甲基化的表达变化。研究结果表明 ,p15 INK4B... 为探索 p15 INK4B基因在CpG岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用 ,应用敏感的甲基化特异的MSP PCR的测定方法 ,测定了 p15 INK4B基因在急性粒细胞白血病 (AML)和慢性粒细胞白血病 (CML)中甲基化的表达变化。研究结果表明 ,p15 INK4B基因操纵区在AML和CML中的甲基化发生率分别为 83.9% (2 6/ 31)和 0 % (0 / 2 8)。结论提示 :甲基化是p15 INK4B基因在AML中主要的失活方式之一 ,并可在病程进展中出现甲基化 ,使病情加重 ;在CML中无甲基化的发生 ,说明p15 展开更多
关键词 p15^INK4B基因 甲基化 急性 粒细胞白血病 慢性
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