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RD-PCR技术在酵母基因表达谱研究中的应用 被引量:1
1
作者 刘莉扬 马文丽 +2 位作者 宋艳斌 张宝 郑文岭 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期246-248,261,共4页
目的 应用RD PCR技术分离酵母基因。方法 首先提取酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)总RNA ,纯化mRNA ;然后 ,反转录成双链cDNA ;再用限制性内切酶Sau3AI酶切 ,在酶切片段上加上接头后 ,用通用引物U进行第一次PCR扩增 ,以这一产物... 目的 应用RD PCR技术分离酵母基因。方法 首先提取酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)总RNA ,纯化mRNA ;然后 ,反转录成双链cDNA ;再用限制性内切酶Sau3AI酶切 ,在酶切片段上加上接头后 ,用通用引物U进行第一次PCR扩增 ,以这一产物为模板用选择性引物(在通用引物的 3’端延伸两个碱基 )作第二次PCR扩增。 5 %PAGE胶分离基因片段 ,选择单带割胶回收 ,做第三次PCR扩增 ,与载体连接 ,最后进行测序分析。结果 采用这种方法分离得到的基因片段 ,经Blast检索分析 ,确为来自酿酒酵母基因的cDNA片段或表达序列标签 (EST)。结论 RD PCR技术可以有效地分离EST ,可用于酵母基因表达调控的研究。 展开更多
关键词 RD-PCR技术 基因表达谱 酿酒酵母 限制性显示技术 表达序列标签
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扶正抗癌方抑制人肺癌细胞增殖及增强LAK抑瘤活性的实验研究
2
作者 石世德 郑文岭 +3 位作者 杨太成 李任先 周岱翰 冼江 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第S2期229-233,共5页
研究中药复方制剂扶正抗癌方对人肺癌细胞LA、肺癌原代细胞增殖的影响,探讨其抗癌作用机制.扶正抗癌方灌胃给药后,采集大鼠血清,处理人肺癌细胞LA、人肺癌原代细胞,MTT法观察细胞增殖;并与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK... 研究中药复方制剂扶正抗癌方对人肺癌细胞LA、肺癌原代细胞增殖的影响,探讨其抗癌作用机制.扶正抗癌方灌胃给药后,采集大鼠血清,处理人肺癌细胞LA、人肺癌原代细胞,MTT法观察细胞增殖;并与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)共同处理以上2种细胞.扶正抗癌方具有显著抑制人肺癌细胞LA、人肺癌原代细胞增殖的作用,且存在不同浓度之间的差异,提示呈现出血清浓度依赖性;可以显著提高LAK抑制人肺癌细胞LA、人肺癌原代细胞增殖的活性抑制人肺癌细胞增殖,提高LAK活性可能是扶正抗癌方抗癌的主要作用机制. 展开更多
关键词 肺癌/中医药疗法 扶正抗癌方/治疗应用 肺癌细胞/人肺癌细胞LA、肺癌原代细胞 血清药理学 大鼠
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芯片杂交中荧光标记样品定量与非定量的比较研究
3
作者 冯春琼 马文丽 +5 位作者 李凌 宋艳斌 石嵘 吴清华 郭秋野 郑文岭 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第6期32-35,共4页
比较在芯片杂交中 ,荧光标记样品定量与非定量对杂交结果的影响。其方法是 ,提取经As2 O3 作用K5 6 2细胞前后的总RNA ,逆转录成cDNA第一链 ,并分别用Cy3/Cy5标记。标记后的样品再次定量或不定量 ,但均取相同体积上样与K5 6 2芯片杂交 ... 比较在芯片杂交中 ,荧光标记样品定量与非定量对杂交结果的影响。其方法是 ,提取经As2 O3 作用K5 6 2细胞前后的总RNA ,逆转录成cDNA第一链 ,并分别用Cy3/Cy5标记。标记后的样品再次定量或不定量 ,但均取相同体积上样与K5 6 2芯片杂交 ,用扫描仪扫描并分析。其结果 ,标记后样品定量与不定量杂交的结果都与理论推测一致 ,但以样品定量进行杂交的效果更好 ,标记样品杂交前再次定量的 ,分析发现 2个基因表达下调 ;杂交前不定量仅取相同体积进行杂交的 ,发现 6个基因片段表达下调 ,其中只有 2个基因与细胞凋亡通路密切相关。认为在芯片的杂交检测中 ,对荧光标记样品杂交前再次定量可大大提高杂交结果的可靠性。 展开更多
关键词 定量 荧光标记 AS2O3 样品 K562细胞 细胞凋亡 表达 杂交 总RNA 基因片段
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体外转染canstatin核糖核酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的研究 被引量:2
4
作者 李浪 冯建章 +6 位作者 郑文岭 谭宁 邓春玉 张宏斌 赖晃文 杨传红 唐其东 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期144-147,共4页
目的 :研究体外转染canstatin核糖核酸 (RNA)对培养的兔血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的影响。方法 :在无菌条件下取新西兰白兔胸主动脉 ,采用阳离子脂质体介导的基因转染方法 ,将外源性canstatinRNA转入VSMC中 ,应用流式细胞仪 (FCM )、TU... 目的 :研究体外转染canstatin核糖核酸 (RNA)对培养的兔血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的影响。方法 :在无菌条件下取新西兰白兔胸主动脉 ,采用阳离子脂质体介导的基因转染方法 ,将外源性canstatinRNA转入VSMC中 ,应用流式细胞仪 (FCM )、TUNEL及电镜观察canstatinRNA转染细胞的凋亡。实验共分对照组、DOSPER组和canstatin组。结果 :阳离子脂质体介导的canstatinRNA成功转入VSMC并表达 ,流式细胞仪检测表明 ,canstatinRNA转染细胞的细胞周期发生细胞生长期 (G1期 )阻滞 ,G1期细胞 ( 5 8 93± 2 17) %较对照组 ( 4 9 13± 2 0 7) %及DOSPER组 ( 4 9 99± 1 45 ) %增加 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,脱氧核糖核酸合成期 (S期 )细胞 ( 19 88± 2 2 8) %较对照组 ( 2 8 0 6± 3 77) %及DOSPER组( 2 8 5 0± 4 41) %减少 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。canstatin组RNA转染细胞的凋亡率 ( 17 74± 3 93) %高于对照组 ( 4 89± 3 5 9) %及DOSPER组 ( 4 0 6± 1 80 ) % ,有极显著性差异 (P <0 0 1) ,而对照组及DOSPER组无显著性差异 (P >0 0 5 )。TUNEL检测显示 ,canstatin基因转染细胞凋亡明显增加 ,电镜下观察到转染细胞出现典型凋亡特征性改变。结论 :阳离子脂质体介导的canstatinRNA成功转染VSMC并能显著? 展开更多
关键词 体外转染 CANSTATIN 核糖核酸 血管平滑肌细胞
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细胞凋亡的MTT染色法检测 被引量:23
5
作者 冯春琼 马文丽 +3 位作者 宋艳斌 郭秋野 吴清华 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期262-263,266,共3页
目的研究MTT染色法用于检测细胞凋亡的可行性。方法以As2O3诱导K562细胞建立凋亡细胞模型,并比较以下3种方法检测凋亡的结果。MTT染色法检测、直接在光镜下进行形态学观察以及DNA凝胶电泳。结果MTT染色法可准确判定细胞凋亡,并可清晰分... 目的研究MTT染色法用于检测细胞凋亡的可行性。方法以As2O3诱导K562细胞建立凋亡细胞模型,并比较以下3种方法检测凋亡的结果。MTT染色法检测、直接在光镜下进行形态学观察以及DNA凝胶电泳。结果MTT染色法可准确判定细胞凋亡,并可清晰分辨正常细胞、凋亡细胞和死亡细胞。结论MTT染色法是一种简单、可行的检测细胞凋亡的方法。 展开更多
关键词 细胞凋亡 MTT染色 三氧化二胂 K562细胞
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应用RD-PCR方法制备K562细胞表达谱芯片基因探针 被引量:8
6
作者 毛向明 马文丽 +1 位作者 姜立 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期548-550,553,共4页
目的收集K562细胞表达谱芯片的基因片段。方法培养K562细胞,抽提其mRNA,反转录为cDNA,应用限制性显示PCR技术(RD-PCR)分离K562细胞不同组别的产物片段,分别行PCR扩增。结果制备了可用于基因芯片制作的基因探针片段。结论RD-PCR方法适合... 目的收集K562细胞表达谱芯片的基因片段。方法培养K562细胞,抽提其mRNA,反转录为cDNA,应用限制性显示PCR技术(RD-PCR)分离K562细胞不同组别的产物片段,分别行PCR扩增。结果制备了可用于基因芯片制作的基因探针片段。结论RD-PCR方法适合于基因芯片探针的收集。 展开更多
关键词 RD-PCR方法 K562细胞 表达谱 基因芯片 分子探针 幼红细胞白血病
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血管生成抑制素canstatin的新发现 被引量:6
7
作者 李浪 冯建章 郑文岭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期862-864,共3页
AIM: As a human basement membrane-derived inhibitor of angiogenesis and tumor growth, canstatin has been paid great attention since it was isolated and identified in 2000. Canstatin significantly inhibited human endot... AIM: As a human basement membrane-derived inhibitor of angiogenesis and tumor growth, canstatin has been paid great attention since it was isolated and identified in 2000. Canstatin significantly inhibited human endothelial cell migration and proliferation and induced apoptosis, suggesting that it might be a powerful and potential therapeutic molecule for atherosclerosis,unstable angina and tumor. 展开更多
关键词 血管生成抑制素 CANSTATIN 血管生成因子 血管内皮 动脉粥样硬化
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一种新的基因芯片检测荧光标记技术:通用引物U_2联合标记法 被引量:5
8
作者 徐秋林 马文丽 +2 位作者 李凌 石嵘 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期289-292,共4页
目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss1... 目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss10.0对杂交结果进行分析。结果UPL方法在标记物杂交的荧光强度、信噪比、探针真阳性率和可重复性等方面均高于随机引物逆转录掺入标记法,而与其他两种RD标记方法相当,但标记过程相对更加简单。结论UPL方法可用于基因芯片研究和应用。 展开更多
关键词 流感病毒 检测RD技术 基因芯片
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细胞松弛素B对K562细胞脱核作用的观察 被引量:5
9
作者 危敏 马文丽 +4 位作者 毛向明 宋艳斌 张宝 冯春琼 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第12期1087-1089,共3页
目的观察细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响.方法以人红白血病K562细胞为细胞模型,经不同浓度的CB作用不同时间(4~48 h),通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变.细胞计数法绘制细胞不同条件下的... 目的观察细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响.方法以人红白血病K562细胞为细胞模型,经不同浓度的CB作用不同时间(4~48 h),通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变.细胞计数法绘制细胞不同条件下的生长曲线.结果细胞形态发生显著变化,处理组细胞出现不同程度的脱核,细胞生长受到显著抑制.结论CB对K562细胞的脱核作用与其浓度呈正相关,随作用时间延长而增强;秋水仙素有显著提高CB诱发细胞脱核的作用;CB对细胞的增殖能力有显著抑制作用. 展开更多
关键词 细胞松弛素 K562细胞 细胞脱核 秋水仙素 细胞增殖 白血病
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As_2O_3处理前后K562细胞基因表达变化的基因芯片检测 被引量:4
10
作者 冯春琼 马文丽 +6 位作者 李凌 宋艳斌 石嵘 吴清华 郭秋野 祝骥 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第9期772-775,共4页
目的应用基因芯片研究三氧化二砷(As2O3)处理前后K562细胞基因表达的变化。方法提取As2O3处理前后K562细胞的总RNA,纯化为mRNA后再反转录为cDNA。cDNA经限制性内切酶Sau3AI切割后,cDNA片段分别用Cy3和Cy5标记,与自制的包含348个基因... 目的应用基因芯片研究三氧化二砷(As2O3)处理前后K562细胞基因表达的变化。方法提取As2O3处理前后K562细胞的总RNA,纯化为mRNA后再反转录为cDNA。cDNA经限制性内切酶Sau3AI切割后,cDNA片段分别用Cy3和Cy5标记,与自制的包含348个基因片段的胎盘库芯片杂交。结果杂交结果经扫描和软件分析,发现了11个差异表达的基因片段,其中有3个基因片段与细胞凋亡密切相关。结论 我们构建的胎盘库基因芯片可以成功地用于研究药物作用前后基因表达的变化。 展开更多
关键词 基因表达 基因芯片 基因芯片 三氧化二砷 K562细胞 凋亡
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Canstatin RNA转染对兔血管平滑肌细胞体外增殖的抑制作用 被引量:2
11
作者 李浪 冯建章 +5 位作者 郑文岭 冼江 张宏斌 杨太成 唐其东 邓春玉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期746-748,共3页
目的 :探讨canstatin对体外培养的兔血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法 :将阳离子脂质体介导的canstatinRNA转染VSMC ,应用细胞计数 ,[3 H]-TdR掺入率测定观察canstatin基因对VSMC增殖的作用。结果 :阳离子脂质体介导的canstatinRN... 目的 :探讨canstatin对体外培养的兔血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法 :将阳离子脂质体介导的canstatinRNA转染VSMC ,应用细胞计数 ,[3 H]-TdR掺入率测定观察canstatin基因对VSMC增殖的作用。结果 :阳离子脂质体介导的canstatinRNA可有效地转染VSMC并能显著地抑制VSMC的增殖及其DNA的合成率。结论 展开更多
关键词 基因转移 RNA 血管平滑肌细胞 细胞增殖 抑制作用 动物实验
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应用十六烷基三甲基溴化铵纯化PCR产物 被引量:2
12
作者 张宝 马文丽 +3 位作者 刘莉扬 吴清华 郭秋野 郑文岭 《第一军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期719-720,共2页
目的建立应用十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide, CTAB)PCR产物纯化的方法。方法应用CTAB对PCR产物进行选择性沉淀。CTAB与DNA形成复合我1.2 mol/L NaCl溶液中溶解,再用乙醇将PCR产物沉淀出来。结果这种方法可... 目的建立应用十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide, CTAB)PCR产物纯化的方法。方法应用CTAB对PCR产物进行选择性沉淀。CTAB与DNA形成复合我1.2 mol/L NaCl溶液中溶解,再用乙醇将PCR产物沉淀出来。结果这种方法可以去除PCR产物中引物和小分子dNTP。虽然纯化的产率占现在市场上的一些试剂盒产率的80%,但其成本比较低,仍不失是一种PCR产物纯化的方法。结论利用十六烷基三甲基溴化铵可以用于PCR产物纯化。 展开更多
关键词 十六烷基三甲基溴化铵 PCR产物 纯化
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用于HIV诊断的Oligo基因芯片研制 被引量:3
13
作者 温颖 马文丽 +4 位作者 李凌 吴清华 徐秋林 张海燕 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期293-297,共5页
目的研制快速筛查诊断HIV病毒的Oligo芯片。方法以HIV-1B亚型U26942全基因组序列为靶序列,利用DNA Club、Oligo 6.0、BLAST、Alignment等生物信息学软件,设计高度特异、长度均一、具近似熔解温度(Tm)的Oligo 探针,并制备成Oligo芯片。B(... 目的研制快速筛查诊断HIV病毒的Oligo芯片。方法以HIV-1B亚型U26942全基因组序列为靶序列,利用DNA Club、Oligo 6.0、BLAST、Alignment等生物信息学软件,设计高度特异、长度均一、具近似熔解温度(Tm)的Oligo 探针,并制备成Oligo芯片。B(U26942)、C(U46016)、F(AF075703)、G(AF061640)四种亚型质粒分别经RD-梯度PCR与随机特异性引物PCR,经荧光标记后与芯片杂交,扫描芯片后进行统计学分析。结果与结论获得22条60 mer 探针,Oligo芯片特异性、敏感性及稳定性好,为进一步应用提供了条件。 展开更多
关键词 HIV Oligo芯片 RD PCR
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基因芯片制作中玻璃介质表面处理对DNA固定率的影响 被引量:1
14
作者 祝骥 马文丽 +2 位作者 李凌 姚汝华 郑文岭 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第3期94-97,共4页
用显微镜载玻片作为基因芯片制作中DNA固定介质材料 ,对玻片表面分别进行醛基化、异硫氰酸基化、氨基化等不同修饰处理 ,分析其对DNA固定率的影响 ,并比较了国产与进口玻片处理间的差异 .结果表明 ,异硫氰酸基化处理玻片DNA固定率高于... 用显微镜载玻片作为基因芯片制作中DNA固定介质材料 ,对玻片表面分别进行醛基化、异硫氰酸基化、氨基化等不同修饰处理 ,分析其对DNA固定率的影响 ,并比较了国产与进口玻片处理间的差异 .结果表明 ,异硫氰酸基化处理玻片DNA固定率高于醛基化、氨基化处理 ,接近进口的氨基化玻片 。 展开更多
关键词 基因芯片 玻璃介质 表面处理 固定率 DNA 基因固定 醛基化 异硫氰酸基化
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两种氨基修饰的基因芯片表面制备方法比较 被引量:2
15
作者 吴清华 马文丽 +4 位作者 王洪敏 毛向明 张宝 李凌 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第7期794-798,共5页
目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺... 目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺/N-羟基琥珀亚胺酯官能团分子。将被修饰好的玻片用于λ噬菌体基因组DNA芯片的制备,并进行杂交检测分析。结果经两种方法修饰后玻片表面分别形成分支结构和聚合物涂层,与商业化的芯片比较发现,两种芯片杂交、扫描检测后显示所得点阵的杂交信号均匀、稳定、清晰,杂交点饱满、同一性好。结论两种方法修饰的玻片用于制备基因芯片均取得了成功,其中丙烯酸-丙烯酰胺聚合物包被法处理过程简单、成本低廉、能大规模生产,是一种较理想的芯片表面制备方法。 展开更多
关键词 基因芯片 氨基修饰 表而化学 Λ噬菌体
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SH-SY5Y细胞基因片段文库及其数据库的建立 被引量:1
16
作者 张宝 马文丽 +4 位作者 冯前进 吴清华 刘莉扬 石嵘 郑文岭 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期333-334,341,共3页
目的 建立SH SY5Y细胞基因片段文库和一种对大量cDNA片段数据管理系统的方法。方法 采用RD PCR技术构建SH SY5Y细胞基因片段文库 ,并对每一个克隆进行测序。应用FOXPRO编制一个软件对其大量的信息进行系统化管理。结果 应用RD PCR技... 目的 建立SH SY5Y细胞基因片段文库和一种对大量cDNA片段数据管理系统的方法。方法 采用RD PCR技术构建SH SY5Y细胞基因片段文库 ,并对每一个克隆进行测序。应用FOXPRO编制一个软件对其大量的信息进行系统化管理。结果 应用RD PCR技术建立了细胞的cDNA片段文库 ,由 12 0 0余个片段克隆组成 ;应用FOXPRO制作了基因片段数据信息管理系统的软件 ,对此文库片段的测序数据进行管理。结论 采用RD PCR技术是一个很好的建立基因片段文库的方法 ;建立了基因片段数据信息管理系统的软件进行这个文库数据的管理。 展开更多
关键词 SH-SY5Y细胞 数据库 FOXPRO 基因片段文库
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大肠杆菌poly(A)化mRNA cDNA文库的构建与鉴定 被引量:1
17
作者 胡子有 马文丽 +4 位作者 吴清华 张宝 宋艳斌 郭秋野 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第11期1005-1009,共5页
目的构建和鉴定大肠杆菌poly(A)化mRNA的cDNA文库。方法应用限制性显示PCR技术构建大肠杆菌poly(A)化mRNA的cDNA文库,筛选、收集cDNA片段,并进行测序。根据测序结果进行初步的生物信息学分析和结果验证。结果构建了大肠杆菌poly(A)化mRN... 目的构建和鉴定大肠杆菌poly(A)化mRNA的cDNA文库。方法应用限制性显示PCR技术构建大肠杆菌poly(A)化mRNA的cDNA文库,筛选、收集cDNA片段,并进行测序。根据测序结果进行初步的生物信息学分析和结果验证。结果构建了大肠杆菌poly(A)化mRNA的限制性cDNA文库,并对其中66个基因片段进行了分析。结论所构建的大肠杆菌poly(A)化mRNA的cDNA文库片段重复性低,质量高。 展开更多
关键词 DNA 互补 大肠杆菌 多聚腺苷酸化 分子克隆 限制性显示PCR技术
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大肠杆菌poly(A)化mRNA基因片段的RD-PCR克隆 被引量:1
18
作者 胡子有 马文丽 +5 位作者 宋艳斌 张宝 吴清华 郭秋野 彭翼飞 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期203-205,共3页
目的研究大肠杆菌(E.coli)中哪些基因mRNA3'端存在poly(A)化。方法利用E.colimRNA中可能存在的poly(A)尾,以oligo(dT)-cellulose进行mRNA的纯化,并以oligo(dT)18为引物逆转录合成cDNA,应用限制性显示-聚合酶链反应(RD-PCR)分离不同... 目的研究大肠杆菌(E.coli)中哪些基因mRNA3'端存在poly(A)化。方法利用E.colimRNA中可能存在的poly(A)尾,以oligo(dT)-cellulose进行mRNA的纯化,并以oligo(dT)18为引物逆转录合成cDNA,应用限制性显示-聚合酶链反应(RD-PCR)分离不同组别的基因片段并进行克隆。结果成功克隆100多个基因片段,并对其中30个进行了测序分析。结论细菌mRNA的poly(A)化可能不是偶然和个别的现象。 展开更多
关键词 限制性显示-聚合酶链反应 E.COLI POLY(A) 基因克隆 大肠杆菌 PD-PCR
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探针的纯化与否对基因芯片重复利用的影响 被引量:1
19
作者 张宝 马文丽 +2 位作者 石嵘 吴清华 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期208-210,共3页
目的观察探针的纯度对基因芯片重复利用的影响。方法将探针分为未纯化、纯化两部分并分别与基因芯片杂交,扫描芯片后,用探针剥脱液洗涤芯片;同等条件成像后,进行下一轮杂交。结果未纯化的探针杂交结果背景高,阳性信号界限不清楚;经探针... 目的观察探针的纯度对基因芯片重复利用的影响。方法将探针分为未纯化、纯化两部分并分别与基因芯片杂交,扫描芯片后,用探针剥脱液洗涤芯片;同等条件成像后,进行下一轮杂交。结果未纯化的探针杂交结果背景高,阳性信号界限不清楚;经探针剥脱液洗涤后,仍留有较高强度的背景和原与靶基因片段杂交的阳性信号,即使洗脱4次后,仍有背景和阳性信号存在。纯化的探针杂交结果显示背景低,一般经2次探针剥脱液洗过后,可以完全去除信号并进行下一轮杂交。结论未纯化的探针与基因芯片杂交后,此芯片不能应用于下一轮的杂交;而纯化的探针杂交后,芯片可以再次利用。由此说明探针的纯化是基因芯片重复利用的前提条件。 展开更多
关键词 基因芯片 探针 纯化 重复利用 影响
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细胞周期蛋白依赖性激酶-2两种剪接体在SH-SY5Y细胞中共表达 被引量:1
20
作者 岳枫 马文丽 +2 位作者 张宝 宋艳斌 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第3期349-351,共3页
目的观察细胞周期蛋白依赖性激酶-2(CDK-2)在SH-SY5Y细胞中的表达情况。方法采用RT-PCR方法研究CDK-2的表达,用DNA银染技术观察PCR产物,割胶回收后,克隆到载体上、测序。结果在聚丙烯酰胺胶上可以观察到两条DNA带,相对分子质量小的DNA... 目的观察细胞周期蛋白依赖性激酶-2(CDK-2)在SH-SY5Y细胞中的表达情况。方法采用RT-PCR方法研究CDK-2的表达,用DNA银染技术观察PCR产物,割胶回收后,克隆到载体上、测序。结果在聚丙烯酰胺胶上可以观察到两条DNA带,相对分子质量小的DNA带染色较弱;将两条DNA带切下,回收后与载体连接,测序证实两条DNA带均为CDK-2基因的产物。结论CDK-2的两种剪接形式在SH-SY5Y细胞中共表达,其中一种剪接形式是第五外显子缺如,但其表达量比较弱,其作用机制仍有待于进一步研究。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白依赖性激酶-2 剪接体 SH-SY5Y细胞 酶学 细胞周期
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