文摘目的:针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)包膜糖蛋白D(gD),以热休克蛋白70(Hsp70)为载体,构建pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗。方法:将Hsp70和HSV-2gD蛋白的基因分别克隆至真核表达载体pVAX,构建成重组质粒pVAX-Hsp70-gD并测序鉴定。重组质粒pVAX-Hsp70-gD转染COS-7细胞,用免疫组化、SDS-PAGE和W est-ern b lotting方法鉴定重组质粒的表达情况。结果:测序证实重组质粒序列正确,表达产物的SDS-PAGE分析发现,在相对分子量为92 000处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。免疫组化方法和W estern b lotting也证明,构建的重组质粒能在COS-7细胞内表达。pVAX-Hsp70-HSV2gD组核酸疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素的水平高于其他组(P<0.05)。结论:成功构建了pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗,为其进一步的研究打下了基础。
