改良法培养骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的实验研究 被引量：11

1

作者 郭立达 王捷 夏冰 《实用医学杂志》 CAS 2006年第2期131-133,共3页

目的:研究大鼠骨髓基质干细胞的生长特点和在诱导条件下的成骨能力。方法:通过改良的骨髓培养法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,应用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,并检测骨钙素的分... 目的:研究大鼠骨髓基质干细胞的生长特点和在诱导条件下的成骨能力。方法:通过改良的骨髓培养法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,应用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,并检测骨钙素的分泌、碱性磷酸酶的活性和细胞矿化作用。结果:原代培养基质干细胞首先形成细胞集落,12d时集落间接近融合;传代细胞体积变大,约5～7d传代一次。诱导条件下,细胞碱性磷酸酶活性明显增高,并出现了矿化结节。结论:骨髓基质干细胞易于分离培养及体外扩增,成骨能力肯定,可作为骨组织工程的种子细胞。 展开更多

关键词 成骨细胞 骨髓基质干细胞 诱导分化 大鼠

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人骨唾液蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量：13

2

作者 王捷 董燕 +2 位作者 张宏斌 武婕 郑文岭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期325-329,共5页

利用RT PCR技术 ,从人骨膜组织总RNA中扩增长度为 1kb的人骨唾液蛋白 (bonesialoprotein ,BSP)基因编码区序列 ,克隆至pBluescriptⅡ ,进行双链核苷酸序列测定 .构建人BSP毕赤酵母表达质粒pPICZaA hBSP并导入毕赤酵母PichiapastorisGS1 ... 利用RT PCR技术 ,从人骨膜组织总RNA中扩增长度为 1kb的人骨唾液蛋白 (bonesialoprotein ,BSP)基因编码区序列 ,克隆至pBluescriptⅡ ,进行双链核苷酸序列测定 .构建人BSP毕赤酵母表达质粒pPICZaA hBSP并导入毕赤酵母PichiapastorisGS1 1 5 .SDS PAGE和Western印迹检测rhBSP的分泌表达 .采用镍离子亲合层析纯化rhBSP并检测生物学活性 .结果表明 ,克隆片段与基因库所登录的序列相一致 ,分泌表达的rhBSP His融合蛋白分子量约为 6 7kD ,占培养上清总蛋白的 80 % ,浓度约为 0 2 4 8g L 。 展开更多

关键词 骨 唾液糖蛋白 分泌表达 毕赤酵母

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骨唾液蛋白(BSP)高稳定表达对乳腺癌骨转移的促进作用 被引量：13

3

作者 杜红延 王捷 +2 位作者 杨静 郑霖 刘大志 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期815-816,829,共3页

目的了解乳腺癌细胞中骨唾液蛋白(BSP)高稳定表达对其骨转移的影响,为乳腺癌骨转移的预防和治疗寻找新的药物靶点。方法通过鸡胚尿囊绒膜实验和骨条黏附实验确定BSP的高稳定表达对乳腺癌细胞血管侵袭能力及骨条黏附能力的影响。将乳腺... 目的了解乳腺癌细胞中骨唾液蛋白(BSP)高稳定表达对其骨转移的影响,为乳腺癌骨转移的预防和治疗寻找新的药物靶点。方法通过鸡胚尿囊绒膜实验和骨条黏附实验确定BSP的高稳定表达对乳腺癌细胞血管侵袭能力及骨条黏附能力的影响。将乳腺癌细胞种植于鸡胚尿囊膜的上部空腔,经过孵育收集下囊腔血管组织,PCR检测人特异的Alu基因,以了解乳腺癌细胞的血管侵袭能力;将乳腺癌细胞与经胶原酶和胰蛋白酶消化的骨条共同孵育,胰酶消化收集乳腺癌细胞,通过染色测定OD_(488)值来确定乳腺癌细胞对骨条的黏附。结果空白对照组和未经转染的乳腺癌细胞组各5个鸡胚中均没有扩增出人的Alu基因,BSP高稳定表达的乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(piE))各5个鸡胚中分别有4个和3个扩增出人Alu基因;乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)的骨条黏附实验测得的488nm处的吸光度值分别为0.580±0.046和0.490±0.039,明显高于未经转染的乳腺癌细胞组(0.260±0.021,P<0.05)和空白对照组(0.034±0.003,P<0.01)。结论BSP的高稳定表达增加了乳腺癌细胞的血管侵袭能力,提高了乳腺癌细胞的骨条黏附能力,可能对乳腺癌的骨转移有一定促进作用。 展开更多

关键词 唾液糖蛋白类 乳腺肿瘤 肿瘤转移

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抗克伦特罗噬菌体单链抗体库的构建、筛选及鉴定 被引量：9

4

作者 潘科 王弘 +4 位作者 张宏斌 王捷 雷红涛 杨金易 孙远明 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期51-54,共4页

利用噬菌体展示技术构建克伦特罗(CBL)单链抗体(scFv)库,从中筛选CBL特异性噬菌体scFv,从而成功扩增出抗CBL的VL,VH基因片段并采用重叠延伸PCR拼接为全长的scFv基因片段,抗体库库容约为1.6×104,经4轮吸附—洗脱—扩增的富集,采用... 利用噬菌体展示技术构建克伦特罗(CBL)单链抗体(scFv)库,从中筛选CBL特异性噬菌体scFv,从而成功扩增出抗CBL的VL,VH基因片段并采用重叠延伸PCR拼接为全长的scFv基因片段,抗体库库容约为1.6×104,经4轮吸附—洗脱—扩增的富集,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法筛选到6个具有CBL结合活性的噬菌体scFv,为进一步大量表达CBL单链抗体奠定了基础. 展开更多

关键词 克伦特罗 单链抗体 噬菌体展示

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骨唾液蛋白非融合荧光蛋白载体的构建及其在特异性骨转移乳腺癌细胞中的稳定表达 被引量：3

5

作者 杜红延 王捷 +3 位作者 郭勇 郑霖 杨静 刘大志 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期410-412,共3页

目的构建骨唾液蛋白(BSP)非融合荧光表达载体,建立稳定高效表达BSP和荧光蛋白的乳腺癌细胞系,为进一步研究BSP在乳腺癌细胞骨转移中的作用奠定基础。方法从构建好的pB hBSP载体中用PCR方法扩增hBSP基因,通过BglⅡ和PstⅠ两个限制性酶切... 目的构建骨唾液蛋白(BSP)非融合荧光表达载体,建立稳定高效表达BSP和荧光蛋白的乳腺癌细胞系,为进一步研究BSP在乳腺癌细胞骨转移中的作用奠定基础。方法从构建好的pB hBSP载体中用PCR方法扩增hBSP基因,通过BglⅡ和PstⅠ两个限制性酶切位点定向克隆至真核表达载体pIRES2EGFP,构建重组载体pIRES2hBSP EGFP。利用脂质体转染的方法将构建好的重组质粒转入特异性骨转移的乳腺癌细胞株MDA MB231BO中,并利用G418和流式细胞仪筛选阳性克隆。结果成功构建hB SP和EGFP非融合表达的真核表达载体pIRES2hBSP EGFP,并成功转染特异骨转移的乳腺癌细胞株,获得hBSP的稳定转染细胞株,荧光显微镜下可观察到荧光蛋白标记。结论真核表达载体pIRES2hBSP EGFP的构建及hBSP稳定转染细胞株的获得为研究BSP在乳腺癌骨转移中的作用奠定了的基础。 展开更多

关键词 骨唾液蛋白 荧光蛋白 乳腺癌细胞 基因转染 稳定表达 非融合荧光蛋白载体 特异性骨转移

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BSP的高稳定表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响 被引量：3

6

作者 杜红延 王捷 +2 位作者 郑霖 杨静 刘大志 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期428-430,共3页

目的研究骨唾液蛋白(BSP)的高稳定表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响,揭示BSP在乳腺癌骨转移中的作用。方法通过细胞生长曲线实验、肿瘤细胞克隆形成率实验以及细胞黏附性实验,研究高稳定表达hBSP对乳腺癌细胞生物学行为的影响。结果hBS... 目的研究骨唾液蛋白(BSP)的高稳定表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响,揭示BSP在乳腺癌骨转移中的作用。方法通过细胞生长曲线实验、肿瘤细胞克隆形成率实验以及细胞黏附性实验,研究高稳定表达hBSP对乳腺癌细胞生物学行为的影响。结果hBSP的高稳定表达增加了乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)的生长速率,提高了其活性和致瘤性。乳腺癌细胞MDA-MB-231BO的克隆形成率为8.90%±0.53%,明显低于MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)(分别为15.6%±0.94%和12.8%±0.77%),同时乳腺癌细胞MDA-MB-231BO的细胞贴壁率OD620的值(0.29±0.017)也明显低于MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)(分别为0.52±0.03和0.43±0.03)。结论hBSP具有一定的自分泌作用,增加BSP的表达促进乳腺癌细胞骨转移的发生。 展开更多

关键词 唾液糖蛋白类 乳腺肿瘤 肿瘤转移

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hBSP与GFP非融合表达载体的构建及乳腺癌细胞转染条件优化 被引量：2

7

作者 杜红延 王捷 +3 位作者 郭勇 郑霖 杨静 刘大志 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期46-50,共5页

为进一步研究骨唾液蛋白(BSP)在乳腺癌细胞骨转移的整个过程中的作用,首先要建立稳定高效表达BSP的乳腺癌细胞系.文中首先从构建好的pB-hBSP载体中亚克隆hbsp基因,构建重组质粒pIRES2-hBSP-EGFP,然后利用脂质体介导转染特异性骨转移的... 为进一步研究骨唾液蛋白(BSP)在乳腺癌细胞骨转移的整个过程中的作用,首先要建立稳定高效表达BSP的乳腺癌细胞系.文中首先从构建好的pB-hBSP载体中亚克隆hbsp基因,构建重组质粒pIRES2-hBSP-EGFP,然后利用脂质体介导转染特异性骨转移的乳腺癌细胞MDA-MB-231BO,优化一系列转染条件以提高转染效率,再利用G418和流式细胞仪筛选获得稳定转染细胞.结果发现:在96孔板中,细胞融合度达到90%;用1μg脂质体介导280 ng重组质粒转染10 h,转染效率最高可达(19.70±1.10)%. 展开更多

关键词 骨唾液蛋白 荧光蛋白 重组表达载体 乳腺癌细胞 转染 优化

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低功率毫米波辐照对HL60细胞增殖的影响 被引量：2

8

作者 赖晃文 赖声礼 +3 位作者 杨传红 冼江 武婕 江悦华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期831-833,共3页

目的为探讨低功率毫米波对HL60细胞活力影响的机制。方法应用细胞培养、活细胞计数、光镜、电镜及增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫组化染色及图像分析等方法,检测低功率(功率密度约2mW/cm2)及频率41.32GH... 目的为探讨低功率毫米波对HL60细胞活力影响的机制。方法应用细胞培养、活细胞计数、光镜、电镜及增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫组化染色及图像分析等方法,检测低功率(功率密度约2mW/cm2)及频率41.32GHz的毫米波辐照HL60白血病细胞增殖的影响;分为辐照时间15、30、45、60min组和对照组(0min组)共5组。结果与对照组比较,毫米波辐照45min和60min组,HL60细胞活性增加和PCNA阳性细胞增多,光镜观察各组未见明显差别,超微结构显示HL60细胞形态呈增殖改变。结论低功率毫米波辐照对HL60细胞有促进增殖的作用。 展开更多

关键词 毫米波 HL60细胞 增殖细胞核抗原 超微结构

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抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白表达条件的初步研究 被引量：2

9

作者 刘细霞 王弘 +4 位作者 杨金易 张宏斌 雷红涛 沈玉栋 孙远明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期161-165,共5页

初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导... 初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导时间和培养基对CBLscFv-AP融合蛋白表达量的影响以及重组质粒的稳定性。选用E·coliBL21(DE3)pLysS为宿主菌,在初始pH为7·4的LB培养基中培养至A600nm为0·8～0·9时,诱导表达8h,为CBLscFv-AP融合蛋白最佳表达条件。而且重组质粒pBV220-scFv-phoA具有较好的结构稳定性。在该表达条件下,提高了CBLscFv-AP融合蛋白的表达量,为进行大规模发酵生产CBLscFv-AP融合蛋白奠定基础。 展开更多

关键词 克伦特罗 单链抗体 碱性磷酸酶 融合蛋白 表达条件

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大鼠骨髓基质干细胞的成骨诱导及鉴定 被引量：1

10

作者 郭立达 王捷 夏冰 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期678-679,F0005,共3页

目的:研究大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)在体外培养、诱导后的形态学改变及生物活性,探讨BMSCs作为骨组织工程种子细胞的可能性和可行性。方法:通过改良的骨髓培养法分离成年大鼠BMSCs,经条件培养液诱导培养后,进行形态学观察和碱性磷酸酶(... 目的:研究大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)在体外培养、诱导后的形态学改变及生物活性,探讨BMSCs作为骨组织工程种子细胞的可能性和可行性。方法:通过改良的骨髓培养法分离成年大鼠BMSCs,经条件培养液诱导培养后,进行形态学观察和碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)的测定。结果:经过体外成骨诱导的BMSCs表现出增殖、聚集、结节和矿化期的阶段性形态特征,同时在诱导2周后表达ALP活性,在结节期和矿化期OCN表达呈阳性。结论:体外成骨定向诱导的BMSCs具有典型的成骨细胞的形态和功能性特征,可以作为骨组织工程的种子细胞。 展开更多

关键词 骨髓基质干细胞 成骨诱导 碱性磷酸酶 骨钙素

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低功率毫米波辐射对HL60白血病细胞基因表达谱的影响

11

作者 赖晃文 江悦华 +3 位作者 张宏斌 赖声礼 王捷 武婕 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第4期133-137,共5页

应用基因芯片技术考察了经频率为41.32 GHz的毫米波辐射的HL60白血病细胞和未经毫米波辐射的HL60白血病细胞组的基因表达差异,并用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法验证了IL-7、EGF和LGALS3基因变化.结果表明,毫米波辐射60min后,HL60... 应用基因芯片技术考察了经频率为41.32 GHz的毫米波辐射的HL60白血病细胞和未经毫米波辐射的HL60白血病细胞组的基因表达差异,并用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法验证了IL-7、EGF和LGALS3基因变化.结果表明,毫米波辐射60min后,HL60细胞增殖,基因芯片检出基因表达上调18个和下调306个,在下调的基因中,RT-PCR检出IL-7、EGF和LGALS3基因下调的情况与基因芯片结果一致.这说明低功率毫米波可导致HL60细胞的基因表达谱发生变化,这些变化的基因与HL60细胞的增殖功能相关. 展开更多

关键词 细胞 毫米波 辐射 基因表达 寡核苷酸 基因芯片

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