酪氨酸酶抑制剂的研究进展 被引量：27

1

作者 丁大鹏 马文丽 郑文岭 《实用医学杂志》 CAS 2005年第12期1364-1366,共3页

关键词 酪氨酸酶抑制剂 色素沉着性皮肤病 合成反应 皮肤黑色素 生物合成 哺乳动物 选择应用 祛斑增白 作用机制 研究前景 关键性 限速酶 黄褐斑 化妆品 分类学

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乙型脑炎病毒寡核苷酸基因芯片研究 被引量：9

2

作者 张海燕 马文丽 +4 位作者 李凌 吴清华 徐秋林 温颖 郑文岭 《实用医学杂志》 CAS 2005年第12期1244-1247,共4页

目的:制备检测乙型脑炎病毒寡核苷酸(oligo)基因芯片。方法:应用生物信息学软件设计60-meroligo探针用于制备基因芯片,乙型脑炎病毒(JEV)基因片段经限制性显示技术扩增标记,用于芯片杂交,清洗和干燥后对芯片进行扫描和数据分析。结果:... 目的:制备检测乙型脑炎病毒寡核苷酸(oligo)基因芯片。方法:应用生物信息学软件设计60-meroligo探针用于制备基因芯片,乙型脑炎病毒(JEV)基因片段经限制性显示技术扩增标记,用于芯片杂交,清洗和干燥后对芯片进行扫描和数据分析。结果:大部分oligo探针都能特异性与相应样品杂交,呈现阳性荧光信号,而阴性对照和空白对照则基本不能检测到荧光信号。结论:实验中建立的oligo基因芯片检测病原体方法可行,具有应用于临床诊断的前景。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 寡核苷酸基因芯片 限制性显示技术 基因芯片检测 生物信息学 软件设计 基因片段 数据分析 空白对照 阴性对照 临床诊断 光信号 特异性 病原体 制备 探针 杂交

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用基因芯片研究苦丁茶甙对K562细胞基因表达的影响 被引量：2

3

作者 祝骥 马文丽 +3 位作者 李凌 宋艳斌 姚汝华 郑文岭 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第7期83-86,共4页

以人红白血病K5 6 2细胞株为材料 ,应用基因芯片技术研究苦丁茶甙对人红白血病K5 6 2细胞作用前后基因表达的差异 ,以诱导分化药物羟基脲处理作为正对照 ,分别提取药物处理前后细胞RNA进行逆转录cDNA ,使获得的cDNA分别标记上Cy3和Cy5... 以人红白血病K5 6 2细胞株为材料 ,应用基因芯片技术研究苦丁茶甙对人红白血病K5 6 2细胞作用前后基因表达的差异 ,以诱导分化药物羟基脲处理作为正对照 ,分别提取药物处理前后细胞RNA进行逆转录cDNA ,使获得的cDNA分别标记上Cy3和Cy5两种荧光物质 ;然后与由 16 32条cDNA片段制作的基因表达谱芯片杂交 ,经扫描及对获得的数据用相关软件分析 ,确定K5 6 2细胞经苦丁茶甙处理前后差异表达基因 4 8条 ,有 4 1条与羟基脲处理相同 ,其中上调表达的基因有 32条 ,下调表达的基因有 16条 . 展开更多

关键词 基因芯片 苦丁茶甙 K562细胞 基因表达 人红白血病 药物筛选模型

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人胎盘基因表达谱芯片的初步研究 被引量：4

4

作者 朱利娜 马文丽 +3 位作者 毛向明 李 凌 冯春琼 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第5期400-402,共3页

目的 制备人胎盘基因表达谱芯片,前用于基因差异表达分析。方法用基因芯片点样仪将胎盘基因文库探针打印在氨基包被的玻片上制备表达谱芯片。分别提取对照组三氧化二砷处理的K562细胞总RNA,纯化mRNA后反转录成cDNA。再以限制性显示技术... 目的 制备人胎盘基因表达谱芯片,前用于基因差异表达分析。方法用基因芯片点样仪将胎盘基因文库探针打印在氨基包被的玻片上制备表达谱芯片。分别提取对照组三氧化二砷处理的K562细胞总RNA,纯化mRNA后反转录成cDNA。再以限制性显示技术进行荧光标记,将两组荧光标记的样品混合后与芯片进行杂交。杂交后清洗芯片,干燥后对芯片进行扫描,分析杂交结果。结果 建立了较可靠的制备与检测基基表达芯片的方法,并筛选出45个差异表达基因片段。结论 制备的人胎盘基因表达谱芯片可有效地应用于基因的差异表达分析。 展开更多

关键词 基因芯片 基因表达谱 胎盘 基因差异表达 DNA

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HIV基因芯片的初步研究 被引量：4

5

作者 李凌 马文丽 +2 位作者 毛向明 祝骥 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第8期724-727,共4页

目的建立HIV基因检测芯片的分析技术。方法分离HIV1U26942基因限制性显示片段作探针,应用PixSys 5500点样仪将探针打印在氨基包被的玻片上制作基因芯片。然后与随机引物荧光标记的HIV样品进行杂交,以分析限制性显示基因片段的杂交动力... 目的建立HIV基因检测芯片的分析技术。方法分离HIV1U26942基因限制性显示片段作探针,应用PixSys 5500点样仪将探针打印在氨基包被的玻片上制作基因芯片。然后与随机引物荧光标记的HIV样品进行杂交,以分析限制性显示基因片段的杂交动力学。经杂交后清洗和干燥,扫描芯片进行检测。结果对基因检测芯片的制作与检测的实验条件进行了初步研究并筛选了12个限制性显示基因探针。结论建立的检测芯片的实验方法可行且较特异。 展开更多

关键词 基因芯片 DNA微矩阵 HIV感染 限制性显示

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精子基因表达谱研究初探 被引量：2

6

作者 毛向明 马文丽 +2 位作者 冯春琼 邹亚光 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第9期1033-1036,共4页

目的应用限制性显示技术,收集正常成年男性的精子基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,以对成年男性正常精子的基因表达情况有一全面、系统的了解。方法提取成年男性正常精子的总RNA,逆转录为cDNA,经限制性内切酶酶切、加接头、PC... 目的应用限制性显示技术,收集正常成年男性的精子基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,以对成年男性正常精子的基因表达情况有一全面、系统的了解。方法提取成年男性正常精子的总RNA,逆转录为cDNA,经限制性内切酶酶切、加接头、PCR扩增、转化、克隆、鉴定等操作,收集成年男性正常精子的基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,并进行初步的杂交分析。结果收集了1 859个基因片段,取其中368个基因探针制备芯片,进行了小量初试。结论证实在精子中有大量基因表达;提示我们自行制备的精子基因表达谱探针也具有较好的特异性和可信性。 展开更多

关键词 精子 限制性显示技术 探针 芯片

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Agilent 2100 Bioanalyzer在基因差异表达研究中的应用 被引量：2

7

作者 刘翠华 马文丽 +2 位作者 石嵘 欧阳谦 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第12期1066-1069,共4页

目的观察Agilent 2100 Bioanalyzer 芯片分析系统(以下简称Bioanalyzer)在基因差异表达研究中的应用。方法应用限制性显示技术分别从正常和热休克处理后的酿酒酵母细胞中分离出cDNA片段,然后再用Bioanalyzer和传统的琼脂糖凝胶电泳技术... 目的观察Agilent 2100 Bioanalyzer 芯片分析系统(以下简称Bioanalyzer)在基因差异表达研究中的应用。方法应用限制性显示技术分别从正常和热休克处理后的酿酒酵母细胞中分离出cDNA片段,然后再用Bioanalyzer和传统的琼脂糖凝胶电泳技术对RD-PCR产物进行检测分析。结果Bioanalyzer能更快速、敏感地分离和显示差异表达的基因片段,并且通过对差异片段进行定量比较,发现了数个表达有明显差异的基因片段。结论Bioanalyzer在基因差异表达研究中具有重要的应用价值。 展开更多

关键词 芯片分析系统 Agilent2100 Bioanalyzer 限制性显示技术 琼脂糖凝胶电泳 热休克 基因差异表达

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绿色荧光蛋白基因在脂肪细胞分化研究中的应用 被引量：1

8

作者 祝骥 马文丽 +3 位作者 毛向明 李凌 吴清华 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第9期1119-1123,共5页

目的建立人脂肪细胞分化的绿色荧光蛋白活体检测动态模型,为进一步进行脂肪细胞分化及其相关基因表达研究奠定基础。方法用PCR法从培养的人前脂肪细胞总DNA中扩增出过氧化物体酶增殖物激活受体γ2(PPARγ2)基因启动子,将该启动子插入真... 目的建立人脂肪细胞分化的绿色荧光蛋白活体检测动态模型,为进一步进行脂肪细胞分化及其相关基因表达研究奠定基础。方法用PCR法从培养的人前脂肪细胞总DNA中扩增出过氧化物体酶增殖物激活受体γ2(PPARγ2)基因启动子,将该启动子插入真核细胞表达载体pEGFP-1后转染3T3成纤维细胞及人前脂肪细胞,并诱导脂肪细胞分化。结果在胰岛素、地塞米松及3-异丁基-1-甲基黄嘌呤诱导下,人前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞时表达绿色荧光蛋白基因,而3T3细胞则不能诱导为脂肪细胞及表达绿色荧光蛋白基因。结论脂肪组织特异表达的PPARγ2基因启动子与绿色荧光蛋白基因构成的重组基因转化人前脂肪细胞后,能够用来动态活体检测脂肪细胞分化状态。这一模型的建立为脂肪细胞分化调控的分子机制研究提供一个更加方便的检测途径。 展开更多

关键词 脂肪细胞分化 绿色荧光蛋白基因 过氧化物体酶增殖物激活受体γ2基因启动子

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DNA芯片技术筛选K562肿瘤细胞特异性基因 被引量：2

9

作者 彭桂福 马文丽 +4 位作者 宋艳斌 彭翼飞 石嵘 毛向明 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第5期525-528,共4页

目的应用DNA芯片技术筛选人白血病K562细胞中的肿瘤特异性基因。方法提取正常人白细胞和K562细胞基因组DNA,并用限制性内切酶Sau3AI酶切。其中K562细胞基因组酶切产物经DNA聚合酶Ⅰ补平加A后克隆到T-载体,挑选阳性克隆,用PCR扩增,以纯化... 目的应用DNA芯片技术筛选人白血病K562细胞中的肿瘤特异性基因。方法提取正常人白细胞和K562细胞基因组DNA,并用限制性内切酶Sau3AI酶切。其中K562细胞基因组酶切产物经DNA聚合酶Ⅰ补平加A后克隆到T-载体,挑选阳性克隆,用PCR扩增,以纯化的PCR产物做探针,制备K562细胞基因组DNA芯片。正常人白细胞基因组酶切产物加上人工通用接头,用限制性标记技术标记上荧光标记物Cy3,与制备的K562细胞基因组DNA芯片杂交。结果芯片杂交结果经扫描分析,发现42个K562细胞肿瘤特异性基因,进一步用序列分析证实,其中有1个为BCR(breakpoint cluster gene)基因。结论我们自制的K562细胞基因组DNA芯片可以成功地用于筛选肿瘤特异性基因,为更好地从基因组水平研究肿瘤发生的分子机制提供了新的技术途径。 展开更多

关键词 DNA芯片技术 筛选 K562 肿瘤细胞 特异性基因

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一种限制性cDNA文库的构建 被引量：14

10

作者 祝骥 马文丽 +2 位作者 李凌 姚汝华 郑文岭 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期174-176,共3页

利用本室创建的限制性显示技术RD -PCR ,建立的cDNA文库 ,我们称之为限制性cDNA文库。该方法构建的文库因经过了限制性分组扩增 ,每组均含有特定的cDNA 。

关键词 限制性cDNA文库 K562细胞 RD-PCR 构建

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Agilent2100 Bioanalyzer在人乳头瘤病毒检测中的应用 被引量：6

11

作者 刘翠华 马文丽 +3 位作者 石嵘 欧阳谦 彭翼飞 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期213-215,共3页

目的探讨Agilent 2100 Bioanalyzer 芯片分析系统(简称Bioanalyzer)在人乳头瘤病毒(HPV)的PCR检测和分型中的应用。方法先分别进行通用引物介导PCR(GP-PCR)和型特异性引物介导PCR,扩增HPV高保守区(L1区)的共同序列和各型(包括HPV6、11... 目的探讨Agilent 2100 Bioanalyzer 芯片分析系统(简称Bioanalyzer)在人乳头瘤病毒(HPV)的PCR检测和分型中的应用。方法先分别进行通用引物介导PCR(GP-PCR)和型特异性引物介导PCR,扩增HPV高保守区(L1区)的共同序列和各型(包括HPV6、11、16和18型)的特异性序列,然后分别用常规的琼脂糖凝胶电泳技术和Bioanalyzer对PCR产物进行检测,并比较两种检测方法的准确度、重复性和灵敏度。结果Bioanalyzer在确定片段长度时的准确度和重复性比琼脂糖凝胶电泳高,前者的准确度在95%以上,后者仅为85%;Bioanalyzer的检测灵敏度比琼脂糖凝胶电泳高100倍。结论Bioanalyzer芯片分析系统结合PCR方法可对HPV进行特异、准确、稳定、灵敏的检测和型别鉴定,具有重要的推广价值。 展开更多

关键词 芯片分析系统 Agilent2100Bioanalyzer 琼脂糖凝胶电泳 乳头瘤病毒 人

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登革病毒cDNA的生物信息学分析及其Oligo探针设计 被引量：4

12

作者 肖维威 马文丽 +2 位作者 马晓冬 毛向明 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第9期905-907,共3页

目的设计登革病毒诊断芯片的Oligo探针。方法利用BLAST软件对4型登革病毒的cDNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;然后用生物学软件Oligo6.0设计特异性高、Tm值相近、长度均一的Oligo探针。结果获得48条70-mer Oligo探针,用于打印... 目的设计登革病毒诊断芯片的Oligo探针。方法利用BLAST软件对4型登革病毒的cDNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;然后用生物学软件Oligo6.0设计特异性高、Tm值相近、长度均一的Oligo探针。结果获得48条70-mer Oligo探针,用于打印成DNA芯片,进行登革病毒的检测。结论利用BLAST系统和生物学软件Oligo6.0设计登革病毒诊断芯片的探针,是一种简便可行、有效的方法。 展开更多

关键词 登革病毒 CDNA 生物信息学 O1igo探针 生物芯片 BLAST软件

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人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：2

13

作者 祝骥 马文丽 +3 位作者 毛向明 李凌 宋艳斌 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期395-398,共4页

目的克隆中国人的肥胖基因,并在大肠杆菌中高效表达人瘦素蛋白。方法用RT-PCR从培养的中国人脂肪细胞提取的总RNA中扩增出肥胖基因,与TA载体连接后进行核酸序列测定,并将该基因定向克隆至高效表达质粒pBV220,在大肠杆菌中表达。结果克... 目的克隆中国人的肥胖基因,并在大肠杆菌中高效表达人瘦素蛋白。方法用RT-PCR从培养的中国人脂肪细胞提取的总RNA中扩增出肥胖基因,与TA载体连接后进行核酸序列测定,并将该基因定向克隆至高效表达质粒pBV220,在大肠杆菌中表达。结果克隆出中国人肥胖基因,其cDNA序列与文献报道的一致,构建了重组质粒pBV220-OB,并成功地实现了人肥胖基因在大肠杆菌中的表达。结论人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达,为进一步研究该基因在肥胖症及其相关疾病中的作用,以及在脂肪代谢与脂肪细胞分化中的调控机制奠定基础。 展开更多

关键词 肥胖症 肥胖基因 反转录PCR 基因表达 瘦素蛋白

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SARS冠状病毒N基因的扩增与克隆 被引量：2

14

作者 肖维威 马文丽 +6 位作者 张宝 王艳 毛向明 彭翼飞 宋艳斌 吴清华 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期39-41,共3页

目的RT-PCR扩增、克隆SARS冠状病毒N蛋白基因。方法根据GenBank数据库中TOR2株的全基因组序列,利用Primer Premier 5.0软件设计引物RT-PCR巢式扩增SARS冠状病毒的N基因,PCR产物克隆后进行测序鉴定。结果序列分析表明,pMD18-T载体中已成... 目的RT-PCR扩增、克隆SARS冠状病毒N蛋白基因。方法根据GenBank数据库中TOR2株的全基因组序列,利用Primer Premier 5.0软件设计引物RT-PCR巢式扩增SARS冠状病毒的N基因,PCR产物克隆后进行测序鉴定。结果序列分析表明,pMD18-T载体中已成功重组了N基因。结论N蛋白基因的扩增、克隆成功,为N蛋白的表达、N蛋白结构与功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 SARS 严重急性呼吸综合症 传染性非典型肺炎 冠状病毒 基因扩增 基因克隆 N蛋白

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HIV-1基因限制性显示片段的克隆与序列分析 被引量：1

15

作者 李凌 马文丽 +3 位作者 宋艳斌 吴清华 郭秋野 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第11期815-818,共4页

目的　克隆并分析经限制性显示－聚合酶链反应（ＲＤ－ＰＣＲ）扩增的ＨＩＶ－１基因片段。方法　将所有ＨＩＶ－１基因片段 分成１０组并进行ＲＤ－ＰＣＲ扩增，纯化各组ＰＣＲ产物后将之克隆至Ｔ载体上并快速鉴定。从阳性克隆中提取... 目的　克隆并分析经限制性显示－聚合酶链反应（ＲＤ－ＰＣＲ）扩增的ＨＩＶ－１基因片段。方法　将所有ＨＩＶ－１基因片段 分成１０组并进行ＲＤ－ＰＣＲ扩增，纯化各组ＰＣＲ产物后将之克隆至Ｔ载体上并快速鉴定。从阳性克隆中提取质粒，扩 增靶片段并测序。结果　序列分析表明，所扩增的片段均属于ＨＩＶ基因。结论　改良了一种多片段的克隆及鉴定方法并 用于限制性显示扩增片段的克隆。 展开更多

关键词 HIV-1 基因片段 克隆 序列分析 限制性显示-聚合酶链反应 艾滋病

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限制性显示-聚合酶链反应扩增苏云金杆菌基因片段的克隆与分析

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作者 李侠 马文丽 +3 位作者 庞义 张宝 姜立 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期323-325,共3页

目的运用限制性显示-PCR技术(RD-PCR)扩增苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因片段,并进行克隆、测序分析.方法设计特异性引物扩增长片段Bt基因,对扩增产物进行RD-PCR扩增,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定.提取阳... 目的运用限制性显示-PCR技术(RD-PCR)扩增苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因片段,并进行克隆、测序分析.方法设计特异性引物扩增长片段Bt基因,对扩增产物进行RD-PCR扩增,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定.提取阳性克隆质粒进行测序分析.结果运用RD-PCR技术,将长片断的基因(2 000-3 000 bp)分为多个短的片段,片段长度较为均一(200～600 bp).测序结果表明,所扩增的片段均属于特异扩增的Bt基因.结论运用RD-PCR技术可以将长片段基因进行片段化,使其适用于基因芯片的探针. 展开更多

关键词 苏云金杆菌 限制性显示-聚合酶链反应 基因克隆 基因芯片

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