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检测β-CTX和N-MID水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法的建立和评价 被引量：4
1
作者 毛骞 陈翠翠 +3 位作者 梁焕坤 刘鹏娥 钟树海 李来庆 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期770-776,共7页
目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能。方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu... 目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能。方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu^(3+))和钐离子(Sm^(3+))分别标记2G6和5A3 MAb作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。通过试剂盒的灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果:制备的双标记TRFIA试剂盒对β-CTX的检测灵敏度为0.025μg·L^(-1),线性范围为0.025~5.000μg·L^(-1),对N-MID的检测灵敏度为0.5μg·L^(-1),线性范围为0.5~200.0μg·L^(-1)。β-CTX平均稀释回收率为102.13%,N-MID平均稀释回收率为103.02%,与其他常见骨检测指标无明显交叉反应,特异性较强。β-CTX批内变异系数(CV)为5.81%~7.82%,批间CV为5.97%~8.02%;N-MID批内CV为6.05%~8.32%,批间CV为6.14%~8.56%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论:建立的双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异度、高准确率和方便快捷等优点,适用于大批量临床样品的检测。 展开更多
关键词 β胶联降解产物 N端中分子片段 骨质疏松症 双抗体夹心 双标记时间分辨免疫荧光分析
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姬松茸多糖对2型糖尿病大鼠SREBP-1c和SCD-1蛋白表达的影响 被引量：2
2
作者 陈翠翠 白丽娟 +4 位作者 梁焕坤 钟树海 彭凤兰 李佳丽 李来庆 《贵州师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2020年第3期53-58,共6页
目的分析姬松茸多糖对2型糖尿病大鼠肝脏保护作用及对SREBP-1c和SCD-1表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠(随机数字表)分为空白对照组、2型糖尿病模型组、姬松茸多糖组(150、100、50 mg/kg)及二甲双胍组(150 mg/kg),分别为A、B、C、D、E... 目的分析姬松茸多糖对2型糖尿病大鼠肝脏保护作用及对SREBP-1c和SCD-1表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠(随机数字表)分为空白对照组、2型糖尿病模型组、姬松茸多糖组(150、100、50 mg/kg)及二甲双胍组(150 mg/kg),分别为A、B、C、D、E和F组。除A组外,B-F组均腹腔注射STZ(35 mg/kg)诱导复制糖尿病大鼠模型;A和组注射等体积生理盐水,C-F组按相应的药物及剂量进行灌胃处理干预,4周后取大鼠血清,检测血清FBG、TG、TC、HDL-C、LDL-C;取大鼠肝脏组织进行HE染色观察,采用qRT-PCR和Western blotting检测SREBP-1c和SCD-1 mRNA和蛋白水平。结果B组大鼠血糖水平明显高于A组(P<0.05),给药后C、D和F组血清FBG、LDL-C、TC、TG水平均显著低于B组(P<0.05),而HDL-C水平高于B组(P<0.05);与B组相比较,E组的FBG、LDL-C、TC、TG、HDL-C水平有降低的趋势,其差异无统计学意义。HE染色结果:与B组比较,C组和F组小叶结构清晰、肝细胞排列规则、肝脏细胞脂肪变性减少。qRT-PCR和Western blotting结果表明,B组肝脏SREBP-1c和SCD-1 mRNA和蛋白表达高于A组(P<0.05);与B组相比较,C、D和F组肝脏SREBP-1c和SCD-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),E组SREBP-1c和SCD-1 mRNA和蛋白降低,但差异无统计学意义。结论姬松茸多糖高、中剂量对2型糖尿病大鼠干预后,血糖血脂水平、肝脏SREBP-1c和SCD-1表达降低,肝脏细胞脂肪变性和肝细胞坏死减少,对肝脏有一定的保护作用,在治疗2型糖尿病中具有较高的应用前景。 展开更多
关键词 姬松茸多糖 2型糖尿病 SREBP-1C SCD-1
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非洲猪瘟病毒抗体时间分辨免疫荧光方法的建立及初步应用 被引量：8
3
作者 陈翠翠 钟树海 +3 位作者 赖宏锐 梁焕坤 郭桂玲 李来庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期284-288,319,共6页
为建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的时间分辨荧光免疫法(TRFIA),本研究将原核表达的ASFV重组P54蛋白(rP54)包被酶联板,并将Eu^(3+)标记rP54蛋白,经各反应条件的优化建立了双抗原夹心TRFIA。并确定该方法的cut-off值,绘制其标准曲线。... 为建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的时间分辨荧光免疫法(TRFIA),本研究将原核表达的ASFV重组P54蛋白(rP54)包被酶联板,并将Eu^(3+)标记rP54蛋白,经各反应条件的优化建立了双抗原夹心TRFIA。并确定该方法的cut-off值,绘制其标准曲线。结果显示,rP54最佳包被浓度为4μg/mL,100μL/孔;用150μL Eu^(3+)标记试剂标记1 mg抗原;反应体系为30μL标准品(即不同浓度的ASFV P54蛋白MAb)或待测样品+200μL/孔Eu^(3+)标记抗原+200μL/孔增强液。利用该方法检测100份健康猪血清样品得出该方法的cut off值为2.52 ng/mL。建立的标准曲线结果显示,ASFV P54抗体的线性范围为0.1 ng/mL~1000 ng/mL,R^(2)=0.9930,表明该检测方法具有良好的剂量-反应效应。通过特异性、敏感性、重复性、稳定性试验评估了该方法的检测性能。将23份疑似ASF患病猪和20份健康猪口鼻咽拭子/血清样品同时采用本TRFIA、PCR法及ELISA方法检测,分别计算配对卡方检验(McNemar test)P值和一致性检验(Kappa test)的Kappa值,分析它们之间的一致性。采用该方法检测P54 MAb标准品与其他常见猪病毒阳性血清,结果显示除了P54 MAb标准品检测为阳性结果外,其余均为阴性结果,无明显交叉反应,特异性较强;通过标准曲线方程得出该方法对ASFV P54抗体的检测下限为0.067 ng/mL,敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法批内变异系数小于10%,回收率在95.80%~105.62%;批间变异系数小于15%,回收率在92.50%~108.97%。组装的TRFIA试剂盒在37℃可以稳定保存7 d。对23份疑似ASF患病猪和20份健康猪口鼻咽拭子/血清样品检测,结果显示,TRFIA和PCR法同时检测出4份ASFV阳性样品,其余均为阴性样品,该方法与常规PCR法检测结果的McNemar test P值为1.00,Kappa值为1.00,提示TRFIA法与PCR法检测结果的一致性较高(符合率100%),准确性高于ELISA法。本研究首次建立了基于ASFV P54抗体的双抗原夹心TRFIA,且其具有定量、准确、特异性强、敏感性高等优点,为ASF的快速、精准检测提供新的技术手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 抗体检测 双抗原夹心 时间分辨荧光免疫法
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犬瘟热病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用 被引量：7
4
作者 陈翠翠 赖宏锐 +3 位作者 梁焕坤 钟树海 黎杰星 李来庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期258-262,共5页
为建立犬瘟热病毒(CDV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法,本研究将抗CDV的3H7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体,Eu3+标记2G4 MAb作为检测抗体,建立了检测CDV抗原的双抗体夹心TRFIA分析法,并初步制备成试剂盒。通过灵敏度、准确度(稀释回收... 为建立犬瘟热病毒(CDV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法,本研究将抗CDV的3H7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体,Eu3+标记2G4 MAb作为检测抗体,建立了检测CDV抗原的双抗体夹心TRFIA分析法,并初步制备成试剂盒。通过灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性、临床样本检测等实验评价其检测性能。结果显示,该双抗体夹心TRFIA分析法对CDV的检测灵敏度为0.58 ng/mL,线性范围在2.5 ng/mL^640 ng/mL,与荧光值有较强的剂量-反应关系;平均稀释回收率为100.48%,与其它常见病毒无明显交叉反应,特异性较强;批内CV值为5.60%~7.58%,批间CV值为5.67%~7.64%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存半年,37℃稳定保存7 d。与RT-PCR法同时检测65份疑似CDV样本和15份健康样本,2种检测方法的符合率为100%。本研究建立的CDV TRFIA方法具有灵敏度高、特异性强、准确率好、方便快捷等优点,为大批量CDV临床样品的检测提供了可行技术手段。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 双抗体夹心 时间分辨免疫荧光分析
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犬细小病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用 被引量：3
5
作者 陈翠翠 梁焕坤 +3 位作者 赖宏锐 钟树海 黎杰星 李来庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期165-170,共6页
为建立犬细小病毒(CPV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,本实验采用抗CPV单克隆抗体(MAb)7D5作为包被抗体,Eu3+标记的MAb 2F7作为检测抗体,对各反应条件优化后制备双抗体夹心TRFIA试剂盒。并评价了其灵敏度、准确度、特... 为建立犬细小病毒(CPV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,本实验采用抗CPV单克隆抗体(MAb)7D5作为包被抗体,Eu3+标记的MAb 2F7作为检测抗体,对各反应条件优化后制备双抗体夹心TRFIA试剂盒。并评价了其灵敏度、准确度、特异性、重复性和稳定性。利用该试剂盒与RT-PCR方法同时检测了疑似患病犬的临床粪便、呕吐物、血液样品(各60份)和CPV阴性犬这3种临床样品各10份,比较并计算二者的符合率。优化结果显示,最佳的TRFIA反应条件为:MAb 7D5的包被浓度为15μg/mL;Eu^(3+)标记试剂与标记MAb 2F7(2.5 mg/mL)最佳体积分别为70μL和30μL;反应体系为25μL CPV标准品或待测样品+200μL分析缓冲液+200μL Eu^(3+)-检测抗体+200μL增强液。灵敏度试验显示TRFIA方法对CPV灭活病毒检测灵敏度为0.83 ng/mL。准确度试验结果显示,不同浓度CPV标准品稀释(1:2、1:4、1:8)后的稀释回收率在89.25%~100.8%;特异性试验结果显示,该方法除对不同亚型CPV的检测结果均为阳性外,对犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒I型、犬冠状病毒、猫细小病毒、水貂肠炎病毒等检测均为阴性,无明显交叉反应;对高、中、低3种不同浓度CPV的重复性试验结果显示,批内变异系数为2.34%~4.76%,批间变异系数为2.38%~5.10%;稳定性试验结果显示,该试剂盒至少可在4℃稳定保存6个月,37℃保存7 d;临床样品的检测结果显示,利用该方法从大部分疑似患病犬的粪便、血液以及呕吐物中均检测到了CPV,而CPV阴性犬这3类样品的检测结果均为阴性。本研究建立的TRFIA法和RT-PCR法检测结果一致,符合率达到100%。上述结果表明,本研究制备的CPV TRFIA试剂盒灵敏度准确度高、特异性强、重复性、稳定性好,且可检测的临床样品种类多,为临床样品的检测提供有效技术手段。 展开更多
关键词 犬细小病毒 双抗体夹心 时间分辨免疫荧光分析
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犬冠状病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用 被引量：2
6
作者 陈翠翠 梁焕坤 +4 位作者 高浩维 赖宏锐 钟树海 黎杰星 李来庆 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期92-97,共6页
探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对... 探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对试剂盒的准确度、特异性、重复性、稳定性、临床样本检测等性能进行评估。本研究制备的CCV时间分辨免疫荧光试剂盒灵敏度为0.68 ng/mL;各浓度CCV标准品在不同水平的稀释度回收率在94.6%~105.6%;同步检测CPV、CD、CPIV、CAV-1标准品均为阴性,特异性好;批内CV为1.91%~5.03%,批间CV为1.82%~6.03%,重复性好;试剂盒在4℃保存6个月,37℃保存7 d后,试剂盒各项性能均无明显变化;临床样本检测结果与RT-PCR方法结果一致。本研究制备的CCV TRFIA试剂盒具有灵敏度、准确度高,重复性、稳定性良好的优点,能够对CCV的临床样本进行大量的筛查,为CCV患病犬的早期确诊提供了一种全新的技术手段。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 双抗体夹心 时间分辨免疫荧光分析
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二代测序技术在骨代谢检测中的应用
7
作者 叶景文 梁焕坤 +3 位作者 程承武 陈翠翠 李佳丽 李来庆 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2017年第B12期241-244,共4页
二代测序作为新型分子检测技术,具有测序速度快、准确率高、成本较低、通量高等特点,在各领域尤其在生命科学和医学领域应用广泛。二代测序已发现许多骨代谢异常致病的基因源头,也产生许多相应的检测技术。本文主要从骨代谢病中常见的... 二代测序作为新型分子检测技术,具有测序速度快、准确率高、成本较低、通量高等特点,在各领域尤其在生命科学和医学领域应用广泛。二代测序已发现许多骨代谢异常致病的基因源头,也产生许多相应的检测技术。本文主要从骨代谢病中常见的骨质疏松、内分泌骨病、肾性骨病、变形性骨炎及遗传性骨病这几方面对二代测序的应用进行分析。 展开更多
关键词 基因 二代测序 骨代谢
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