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家蝇幼虫抗菌肽天蚕素基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达(英文)
被引量：
6
1
作者
徐建华
朱家勇
+4 位作者
金小宝
许琴英
刘雷山
马艳
王艳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期311-318,共8页
目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为...
目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为GGC,C-端终止密码子TAA前加进一个天冬酰胺(Asn)密码子AAC,命名为mCecropin。mCecropin基因序列克隆至融合表达载体pGEX-4T-1中。酶切分析和测序鉴定后,将阳性重组子质粒转入不同的大肠杆菌宿主细胞中进行融合表达。经SDS-PAGE分析,选用E.coliBL21(DE3)作为表达宿主菌。表达的融合蛋白GST-mCecropin通过GSTrap亲合柱纯化后用凝血酶酶切GST标签,mCecropin经HiTrap柱进一步纯化后,具有较强的抗菌活性。
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关键词
家蝇
天蚕素
抗菌肽
基因克隆
融合表达
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职称材料
PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体的构建、鉴定与表达
被引量：
1
2
作者
唐小龙
张荣波
+1 位作者
汪雪峰
张文
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期364-368,共5页
目的运用pADxsi系统构建带人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。方法采用基因克隆技术,将目的基因NKX6.1克隆至pShuttle-GFP-CMV中,得到pShuttle-GFP-CMV-NKX6.1;将PDX1克隆至pShuttle-CMV-GFP/CMV-NKX6.1上,替换掉GFP,得到pShuttle-CM...
目的运用pADxsi系统构建带人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。方法采用基因克隆技术,将目的基因NKX6.1克隆至pShuttle-GFP-CMV中,得到pShuttle-GFP-CMV-NKX6.1;将PDX1克隆至pShuttle-CMV-GFP/CMV-NKX6.1上,替换掉GFP,得到pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1;将CMV-PDX1/CMV-NKX6.1从pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1转移到ADxsi骨架载体上,得到pADxsi-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1,在293细胞中进行包装与扩增活病毒,病毒滴度测定;体外感染人胎肝间充质干细胞。结果分别酶切重组人PDX1与NKX6.1基因表达穿梭质粒与腺病毒载体质粒,阳性克隆均获得与理论相一致的目的条带;重组腺病毒感染人胎肝间充质干细胞比例达90%以上;RT-PCR结果表明目的基因在人胎肝间充质干细胞内能稳定表达;免疫细胞化学与间接荧光检测目的PDX1与NKX6.1蛋白分子均特异在细胞核表达。结论应用pADxsi系统重组技术成功构建了人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。
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关键词
腺病毒
胰腺十二指肠同源框1基因
NK6转录因子相关
基因座1
间充质干细胞
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职称材料
题名
家蝇幼虫抗菌肽天蚕素基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达(英文)
被引量：
6
1
作者
徐建华
朱家勇
金小宝
许琴英
刘雷山
马艳
王艳
机构
广州中医药大学
第二
附属
医院
(
广东省中医院
)
检验
科
广东
药学院基础医学院
广东
医学院病原生物学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期311-318,共8页
基金
grant of State Natural Science Foundation(30671832)
Key Science and Technology Programof Guangdong Province (2003B31602)
Key Science and Technology Program of Guangzhou (2005Z3-E0211) .
文摘
目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为GGC,C-端终止密码子TAA前加进一个天冬酰胺(Asn)密码子AAC,命名为mCecropin。mCecropin基因序列克隆至融合表达载体pGEX-4T-1中。酶切分析和测序鉴定后,将阳性重组子质粒转入不同的大肠杆菌宿主细胞中进行融合表达。经SDS-PAGE分析,选用E.coliBL21(DE3)作为表达宿主菌。表达的融合蛋白GST-mCecropin通过GSTrap亲合柱纯化后用凝血酶酶切GST标签,mCecropin经HiTrap柱进一步纯化后,具有较强的抗菌活性。
关键词
家蝇
天蚕素
抗菌肽
基因克隆
融合表达
Keywords
Musca domestica
cecropin
antibacterial peptide
gene cloning
fusion expression
分类号
R384.2 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体的构建、鉴定与表达
被引量：
1
2
作者
唐小龙
张荣波
汪雪峰
张文
机构
广州中医药大学
第二
附属
医院
(
广东省中医院
)
检验
科
安徽理工
大学
医学院生物工程研究所
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期364-368,共5页
文摘
目的运用pADxsi系统构建带人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。方法采用基因克隆技术,将目的基因NKX6.1克隆至pShuttle-GFP-CMV中,得到pShuttle-GFP-CMV-NKX6.1;将PDX1克隆至pShuttle-CMV-GFP/CMV-NKX6.1上,替换掉GFP,得到pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1;将CMV-PDX1/CMV-NKX6.1从pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1转移到ADxsi骨架载体上,得到pADxsi-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1,在293细胞中进行包装与扩增活病毒,病毒滴度测定;体外感染人胎肝间充质干细胞。结果分别酶切重组人PDX1与NKX6.1基因表达穿梭质粒与腺病毒载体质粒,阳性克隆均获得与理论相一致的目的条带;重组腺病毒感染人胎肝间充质干细胞比例达90%以上;RT-PCR结果表明目的基因在人胎肝间充质干细胞内能稳定表达;免疫细胞化学与间接荧光检测目的PDX1与NKX6.1蛋白分子均特异在细胞核表达。结论应用pADxsi系统重组技术成功构建了人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。
关键词
腺病毒
胰腺十二指肠同源框1基因
NK6转录因子相关
基因座1
间充质干细胞
Keywords
adenovirus vector
pancreatic and duodenal homeobox factor 1
NK6 transcription factor related locus 1
mesenchymal stem cells
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
R394.33 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
家蝇幼虫抗菌肽天蚕素基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达(英文)
徐建华
朱家勇
金小宝
许琴英
刘雷山
马艳
王艳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体的构建、鉴定与表达
唐小龙
张荣波
汪雪峰
张文
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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职称材料
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0
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