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基于EGFR/AKT和JAK2/STAT3通路研究α-常春藤皂苷单独或与顺铂联用对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响 被引量：7
1
作者 朱志明 王苏美 +6 位作者 唐青 王晰 万信良 莫瀚丹 贾璐瑜 俞晓燕 周绮纯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期333-341,共9页
目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hed)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用靶点及其潜在机制,明确α-Hed与顺铂(DDP)联用后对相应的靶点蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8法检测不同浓度α-Hed处理后NSCLC细胞A549、H1299和PC-9的存活率,采... 目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hed)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用靶点及其潜在机制,明确α-Hed与顺铂(DDP)联用后对相应的靶点蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8法检测不同浓度α-Hed处理后NSCLC细胞A549、H1299和PC-9的存活率,采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,采用WB法检测细胞中C-caspase-3和Bcl-2蛋白的表达。通过网络药理学相关方法筛选α-Hed的潜在靶点,利用分子对接法分析其结合效果,WB法检测靶点蛋白的表达。通过CCK-8法、细胞集落形成实验和WB法检测α-Hed与DDP联用对NSCLC细胞的抑制作用。结果:给药24和48 h后,10、15和20μmol/Lα-Hed可以显著抑制NSCLC细胞增殖活力(均P<0.01);与对照组相比,20μmol/Lα-Hed处理后细胞凋亡率显著升高(P<0.01);α-Hed可上调NSCLC细胞中C-caspase-3的表达(P<0.05),下调Bcl-2的表达(P<0.05)。网络药理学和分子对接筛选出结合亲和力小于-5 kcal/mol的靶点AKT1、STAT3、EGFR和JAK2。WB法检测结果显示,α-Hed处理后A549、H1299细胞中EGFR、p-AKT/AKT、p-STAT3/STAT3和JAK2蛋白的表达均明显下调(均P<0.05)。α-Hed与DDP联用后,更显著地抑制NSCLC细胞的增殖(P<0.01),进一步下调EGFR、p-AKT/AKT、p-STAT3/STAT3和JAK2蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:α-Hed通过下调EGFR和JAK2的表达抑制STAT3和AKT的磷酸化,诱导NSCLC细胞凋亡,与DDP联用后其抑制效果增强,EGFR/AKT和JAK2/STAT3通路也进一步被抑制。 展开更多
关键词 α-常春藤皂苷 非小细胞肺癌 增殖 凋亡 AKT1 STAT3 EGFR JAK2
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大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及CM-Dil标记的脑内示踪 被引量：10
2
作者 陈朝 黎奔 郭建文 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期946-949,953,共5页
目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离和培养方法 ,并探讨采用氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)对BMSCs进行体外标记和体内示踪的可行性。方法全骨髓贴壁法分离获取BMSCs,收集第3代细胞,流式细胞术检测CD34、CD44和CD29的表达率。加入CM-Di... 目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离和培养方法 ,并探讨采用氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)对BMSCs进行体外标记和体内示踪的可行性。方法全骨髓贴壁法分离获取BMSCs,收集第3代细胞,流式细胞术检测CD34、CD44和CD29的表达率。加入CM-Dil对BMSCs进行体外标记,荧光倒置显微镜下观察24h、21d和30d时的标记情况,通过描绘生长曲线明确CM-Dil对体外培养BMSCs生长特性的影响。制作局灶性脑缺血大鼠模型,将CM-Dil标记的BMSCs立体定向移植至大脑纹状体区,于移植后7、14、21d取脑组织制备冰冻切片,荧光显微镜下观察标记细胞在脑内的存活及分布情况。结果 BMSCs贴壁培养至第3代后呈成纤维细胞样,形态均一、排列有序,CD34、CD44和CD29表达率分别为1.71%、80.32%和84.89%。体外CM-Dil标记24h的BMSCs发出红色荧光,标记率为100%;21d后,经传代培养的BMSCs荧光强度与24h时点相近,但30d后荧光有所淬灭。标记后细胞的生长、增殖特性未受影响,形态无改变。脑组织冰冻切片发现移植的BMSCs在7、14、21d时主要位于针道附近,并向周围扩散,数量逐渐减少,呈椭圆形或不规则形。结论通过贴壁培养可以从大鼠骨髓中分离培养出较纯的BMSCs。CM-Dil染色简单、有效、无细胞毒性,体外标记BMSCs的最长时限为21d,可作为BMSCs脑内定向移植的体内示踪方法 。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞移植 脑缺血 氯甲基苯甲酰胺 荧光染料
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山柰酚通过Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导非小细胞肺癌NCI-H1650细胞发生自噬进而影响其增殖 被引量：4
3
作者 朱志明 周绮纯 +7 位作者 王娟娟 邓芷茵 唐青 吴万垠 王晰 万信良 莫瀚丹 王苏美 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期965-972,共8页
目的:探讨山柰酚诱导人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1650细胞发生自噬及其机制。方法:常规培养NCI-H1650细胞,用不同浓度山柰酚处理细胞,用CCK-8法、MTT法以及EdU法检测山柰酚对NCI-H1650细胞增殖能力的影响,用自噬双标记腺病毒mCherry-EGF... 目的:探讨山柰酚诱导人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1650细胞发生自噬及其机制。方法:常规培养NCI-H1650细胞,用不同浓度山柰酚处理细胞,用CCK-8法、MTT法以及EdU法检测山柰酚对NCI-H1650细胞增殖能力的影响,用自噬双标记腺病毒mCherry-EGFR-LC3感染实验检测山柰酚对NCI-H1650细胞发生自噬的影响,用WB法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中自噬相关蛋白及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达,用qPCR法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中Met mRNA的表达。采用荧光素酶标记A549-luc细胞建立裸鼠移植瘤模型后用山柰酚进行处理,用活体动物成像技术观察移植瘤生长情况,用WB法检测移植瘤组织中自噬相关蛋白以及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:山柰酚能显著抑制NCI-H1650细胞的增殖能力(P<0.05),山柰酚处理后NCI-H1650细胞内的自噬小体数量明显增加(P<0.05)、自噬标志蛋白LC3B和beclin1表达均明显上调(均P<0.05)、P62表达明显下调(P<0.05),山柰酚可明显抑制NCI-H1650细胞中Met mRNA和蛋白的表达(均P<0.05)、抑制p-PI3K p85、PI3K p85、p-Akt和p-mTOR蛋白表达(均P<0.05)。山柰酚抑制A549细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.05)和影响其体内自噬、Met/PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达(均P<0.05)。结论:山柰酚通过影响Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导NSCLC NCI-H1650细胞发生自噬,进而抑制其增殖能力。 展开更多
关键词 山柰酚 非小细胞肺癌 NCI-H1650细胞 A549细胞 细胞自噬 Met/PI3K/Akt/mTOR通路 增殖
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