检索结果-维普期刊中文期刊服务平台

利用优化的Cas9 RNP技术高效建立人前B淋巴细胞RAG1基因c.946T>G点突变细胞系及其功能分析: 1; 作者刘永祥刘彩凤 +5 位作者李梓烁黎允诗陈杏梅周娜周少虎黄雪坤《中国临床解剖学杂志》北大核心 2025年第2期175-182,共8页; 目的利用优化的CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)技术,高效建立一种通过递送新型Cas9-gRNA核糖核蛋白复合物(RNP)制备人类重组激活基因1(RAG1)c.946T>G点突变的前B淋巴细胞系的方法,... 展开更多; 关键词原发性免疫缺陷前B淋巴细胞核糖核蛋白复合物 RAG1; 在线阅读下载PDF 职称材料

补肾健脾法治疗男性不育弱精子症对人工授精结局的影响被引量：6: 2; 作者张淑婷翁治委 +4 位作者梁爱军余丽刘立周少虎谢建兴《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第3期480-483,共4页; 目的:探讨补肾健脾法治疗男性不育弱精子症患者对夫精宫腔内人工授精(IUI)妊娠结局的影响。方法:收集"脾肾两虚型"拟行IUI的不育男性患者共78例,随机分为A组(补肾健脾法组)、B组(抗氧化治疗组)和C组(空白组)3组,每组26例,12周... 展开更多; 关键词弱精子症补肾健脾法男性不育宫腔内人工授精; 在线阅读下载PDF 职称材料

CORRECT介导的人HBB-28基因定点突变细胞株的建立及其应用被引量：1: 3; 作者刘永祥麦庆云 +5 位作者黎允诗梅珺琰梁爱军彭新良周瑞鸿周少虎《广西科学》 CAS 北大核心 2022年第6期1125-1133,共9页; 为利用CRISPR/Cas9系统建立一种新型、高效的定点突变和基因修复的新方法——引入阻断突变碱基的CORRECT(Consecutive re-Guide or re-Cas steps to Erase CRISPR/Cas blocked Targets)方法,本研究使用规律间隔成簇短回文重复序列(Clust... 展开更多; 关键词 Β-地中海贫血 HBB 阻断突变定点突变基因修复治疗; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种高效的β地中海贫血CD17(A>T)点突变293T细胞系的建立: 4; 作者刘永祥蔡炳 +3 位作者许言曾艳红周少虎麦庆云《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第5期581-586,共6页; 目的建立一种高效构建β-地中海贫血CD17(A>T)点突变基因型HEK293T细胞系的方法。方法利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑技术,即无痕基因组编辑(consecutive re-Guide or re-Cas steps to erase CRISPR/Cas-blocked targets, CORRECT)... 展开更多; 关键词地中海贫血 CRISPR/Cas9 同义突变单碱基突变; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名利用优化的Cas9 RNP技术高效建立人前B淋巴细胞RAG1基因c.946T>G点突变细胞系及其功能分析: 1; 作者刘永祥刘彩凤李梓烁黎允诗陈杏梅周娜周少虎黄雪坤; 机构广州中医药大学第一附属医院生殖医学科广州市花都区赤坭镇卫生院; 出处《中国临床解剖学杂志》北大核心 2025年第2期175-182,共8页; 基金广东省医学科研基金项目(A2023401) 国家中医药传承创新中心科研专项青年项目(2023QN02) 广东省中医药局科研项目(20241103)。; 文摘目的利用优化的CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)技术,高效建立一种通过递送新型Cas9-gRNA核糖核蛋白复合物(RNP)制备人类重组激活基因1(RAG1)c.946T>G点突变的前B淋巴细胞系的方法,并对突变体进行功能分析。方法实验以人前B淋巴细胞系(Nalm6细胞)为研究对象,在体外将化学修饰的gRNA(guide RNA)和高保真HIFI Cas9蛋白孵育形成RNP复合物,通过细胞核转染技术将RNP和含RAG1(T>G)目标突变与同义突变(C>A)的超分子单链寡核苷酸(Ultramer-ssODNs)同源模板带入细胞内,诱导RAG1基因发生切割与重组,T7EⅠ酶切检测基因编辑效率,并经计数稀释法进行单克隆筛选,Sanger测序鉴定基因型。结果成功构建RAG1(c.946T>G)纯合点突变的细胞系,切割效率高达78.21%,单克隆筛选获得较高比例33.33%(4/12)的目标单克隆。通过功能实验发现c.946T>G点突变导致前B淋巴细胞RAG1、RAG2蛋白表达下调,细胞凋亡比例增多,可能是导致最终成熟B淋巴细胞的生成减少的原因。结论该研究通过优化的Cas9 RNP技术高效获得RAG1基因c.946T>G纯合点突变的前B淋巴细胞系,为单碱基突变疾病模型的建立提供实验依据,更为提升剪切精确性、提高转染效率提供了新的方法。; 关键词原发性免疫缺陷前B淋巴细胞核糖核蛋白复合物 RAG1; Keywords Primary immunodeficiency Pre-B lymphocyte Ribonucleoprotein complex RAG1; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名补肾健脾法治疗男性不育弱精子症对人工授精结局的影响被引量：6: 2; 作者张淑婷翁治委梁爱军余丽刘立周少虎谢建兴; 机构广州中医药大学第一附属医院生殖医学科广州中医药大学; 出处《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第3期480-483,共4页; 基金广东省中医药管理局资助项目(编号:20151234) 广东省科学计划项目资助项目(编号:20140213); 文摘目的:探讨补肾健脾法治疗男性不育弱精子症患者对夫精宫腔内人工授精(IUI)妊娠结局的影响。方法:收集"脾肾两虚型"拟行IUI的不育男性患者共78例,随机分为A组(补肾健脾法组)、B组(抗氧化治疗组)和C组(空白组)3组,每组26例,12周为1个疗程。检测治疗前后计算机辅助精液分析(CA-SA)、精子形态学等反映精子质量指标的变化,并对IUI后的妊娠结局进行追踪随访。结果:治疗后A组患者精子活力和前向运动精子(PR)较治疗前差异有统计学意义(P<0.05);3组治疗前后患者精液量、精子浓度、精子形态以及精子运动参数等差异均无统计学意义(P>0.05);A组临床妊娠率、累积妊娠率和活胎率均高于B组和C组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:采用补肾健脾法治疗男性不育弱精子症患者,能提高该类患者的精子活力及前向运动速度,有助于改善IUI的妊娠结局。; 关键词弱精子症补肾健脾法男性不育宫腔内人工授精; Keywords Methods of invigorating spleen and kidney Male infertility Asthenospermia Intrauterineinsemination; 分类号 R277.5 [医药卫生—中医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CORRECT介导的人HBB-28基因定点突变细胞株的建立及其应用被引量：1: 3; 作者刘永祥麦庆云黎允诗梅珺琰梁爱军彭新良周瑞鸿周少虎; 机构广州中医药大学第一附属医院生殖医学科中山大学附属第一医院生殖医学中心广州医药研究总院有限公司; 出处《广西科学》 CAS 北大核心 2022年第6期1125-1133,共9页; 基金广州中医药大学“双一流”与高水平大学学科协同创新团队培育基金项目(2021xk64)资助。; 文摘为利用CRISPR/Cas9系统建立一种新型、高效的定点突变和基因修复的新方法——引入阻断突变碱基的CORRECT(Consecutive re-Guide or re-Cas steps to Erase CRISPR/Cas blocked Targets)方法,本研究使用规律间隔成簇短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPR)在线设计工具,针对人β-珠蛋白(HBB)基因设计小向导RNA (small guide RNA,sgRNA),构建PX459-sgRNA-Cas9共表达质粒,然后以含阻断突变碱基(G>T)的单链寡核苷酸(single-stranded Oligo DNA Nucleotides, ssODNs)为同源模板,通过脂质体转染HEK293T细胞,并通过Sanger测序和酶切(T7EⅠ和AatⅡ)检测编辑效率,最后通过Sanger测序分析敲除HBB单克隆细胞的基因型。结果表明,成功构建β-地中海贫血(简称β-地贫)HBB-28(A>G)基因纯合定点突变的HEK293T细胞株。阻断突变碱基优化的ssODNs减少Cas9蛋白对靶点的再次编辑,提高了整合效率。本研究建立的新型点突变技术可以高效获得纯合定点突变的HEK293T细胞株,既为单碱基突变疾病模型的建立提供实验依据,又为基因修复治疗提供高效的方法。; 关键词 Β-地中海贫血 HBB 阻断突变定点突变基因修复治疗; Keywords β-thalassemia HBB blocking mutation direct mutagenesis gene repair therapy; 分类号 Q754 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种高效的β地中海贫血CD17(A>T)点突变293T细胞系的建立: 4; 作者刘永祥蔡炳许言曾艳红周少虎麦庆云; 机构广州中医药大学第一附属医院生殖医学科中山大学附属第一医院生殖医学中心; 出处《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第5期581-586,共6页; 基金国家自然科学基金面上项目(81270750)。; 文摘目的建立一种高效构建β-地中海贫血CD17(A>T)点突变基因型HEK293T细胞系的方法。方法利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑技术,即无痕基因组编辑(consecutive re-Guide or re-Cas steps to erase CRISPR/Cas-blocked targets, CORRECT),通过电转染CRISPR/Cas9质粒诱导HEK293T细胞HBB基因切割,同时以引入有CD17(A>T)点突变和同义突变碱基(G>T)的单链寡核苷酸(singlestranded oligo DNA nucleotides, ssODNs)作为同源模板进行重组,经单克隆筛选、测序验证获得β-珠蛋白基因(HBB)点突变CD17(A>T)基因型HEK293T细胞系。结果利用“CORRECT”技术成功获得一株β-地贫CD17(A>T)基因型点突变的HEK293T细胞系,同义突变的引入减少Cas9蛋白对靶点不准确的再编辑,提高单碱基突变效率。结论通过“CORRECT”技术可以高效获得点突变的293T细胞系,对单碱基突变疾病模型的细胞系及动物模型的建立具有重要意义。; 关键词地中海贫血 CRISPR/Cas9 同义突变单碱基突变; Keywords β-thalassemia CRISPR/Cas9 Synonymous mutation Single base mutation; 分类号 R556.61 [医药卫生—血液循环系统疾病]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	利用优化的Cas9 RNP技术高效建立人前B淋巴细胞RAG1基因c.946T>G点突变细胞系及其功能分析	刘永祥刘彩凤李梓烁黎允诗陈杏梅周娜周少虎黄雪坤	《中国临床解剖学杂志》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	补肾健脾法治疗男性不育弱精子症对人工授精结局的影响	张淑婷翁治委梁爱军余丽刘立周少虎谢建兴	《实用医学杂志》 CAS 北大核心	2017	6	在线阅读下载PDF 职称材料
3	CORRECT介导的人HBB-28基因定点突变细胞株的建立及其应用	刘永祥麦庆云黎允诗梅珺琰梁爱军彭新良周瑞鸿周少虎	《广西科学》 CAS 北大核心	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	一种高效的β地中海贫血CD17(A>T)点突变293T细胞系的建立	刘永祥蔡炳许言曾艳红周少虎麦庆云	《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料