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K_(ATP)通道Kir6.2亚基点突变体Kir6.2AAA在大鼠心肌细胞中的表达
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作者 张晓晖 魏春山 +6 位作者 林坚 熊益群 徐超英 刘心亮 穆桂萍 徐绍钢 刘文赫 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期391-395,共5页
目的制备含K ATP通道亚基点突变的重组腺病毒,并将其在大鼠心肌细胞中表达。方法针对Kir6.2位点的引物,利用Overlap PCR的方法定点突变Kir6.2的GFG氨基酸变成AAA,并将其克隆到pShuttle载体中进行序列分析,经PmeⅠ线性化、连接到腺病毒... 目的制备含K ATP通道亚基点突变的重组腺病毒,并将其在大鼠心肌细胞中表达。方法针对Kir6.2位点的引物,利用Overlap PCR的方法定点突变Kir6.2的GFG氨基酸变成AAA,并将其克隆到pShuttle载体中进行序列分析,经PmeⅠ线性化、连接到腺病毒表达载体pAdEasy-1中,将pAdEasy-1包装进脂质体、转染入大鼠原代心肌细胞,并利用反转录PCR和Western blot法进行检测。结果成功制备了携带大鼠Kir6.2AAA及EGFP基因的重组腺病毒,病毒的滴度为2.64×1011VP/mL。荧光显微镜下可见Kir6.2AAA重组体腺病毒感染后的大鼠心肌细胞表达EGFP而发出绿色荧光,反转录PCR证实重组腺病毒载体Ad-Kir6.2AAA感染的心肌细胞中Kir6.2AAA的表达显著上调,Western blot法证明Kir6.2AAA在大鼠心肌细胞中过表达。结论成功构建了携带EGFP基因的Kir6.2AAA重组腺病毒载体并将其在大鼠心肌细胞中正确表达。 展开更多
关键词 Kir6 2基因 点突变 腺病毒载体
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肾上腺髓质素对脓毒性休克大鼠心肌细胞外向钾电流的影响
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作者 张晓晖 Jean-Pierre Bourreau 金满文 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期42-46,共5页
目的研究肾上腺髓质素(ADM)对脓毒性休克大鼠心肌细胞外向钾电流的影响。方法成年大鼠腹腔注射脂多糖(LPS,10 mg/kg)4 h后,分离心室肌细胞。用全细胞膜片钳的方法记录瞬时外向钾电流(Ito),稳态钾电流(Iss)和ATP敏感钾电流(IK,ATP)。结果... 目的研究肾上腺髓质素(ADM)对脓毒性休克大鼠心肌细胞外向钾电流的影响。方法成年大鼠腹腔注射脂多糖(LPS,10 mg/kg)4 h后,分离心室肌细胞。用全细胞膜片钳的方法记录瞬时外向钾电流(Ito),稳态钾电流(Iss)和ATP敏感钾电流(IK,ATP)。结果LPS处理对Ito和Iss无影响。休克心肌细胞IK,ATP密度[(2.66±0.56)pA/pF(n=12)]较正常心肌细胞值[(0.27±0.08)pA/pF(n=14)]明显增加(P<0.01)。ADM受体拮抗剂ADM-(22-52)可使增加的IK,ATP得到明显的恢复[(0.69±0.21)pA/pF(n=11),P<0.01 vs LPS组]。而ADM-(22-52)与100μmol/L氨基胍联合处理几乎可完全取消IK,ATP的增加。结论脓毒性休克大鼠心肌细胞IK,ATP被激活。ADM与NO共同参与了脓毒性休克大鼠心肌细胞IK,ATP的激活。 展开更多
关键词 脓毒性休克 ATP敏感钾通道 肾上腺髓质素
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肾上腺髓质素对内毒素性休克大鼠心肌细胞β-肾上腺素受体激动剂反应性的影响
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作者 张晓晖 金满文 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期2010-2013,共4页
目的:研究肾上腺髓质素(ADM)对内毒素性休克大鼠心肌细胞β-肾上腺素受体激动剂反应性的影响。方法:成年SD大鼠腹腔注射脂多糖(LPS 10 mg/kg)4 h后,分离心室肌细胞。用细胞缩短的方法观察ADM对心肌收缩的影响。以细胞内cAMP的水平为指标... 目的:研究肾上腺髓质素(ADM)对内毒素性休克大鼠心肌细胞β-肾上腺素受体激动剂反应性的影响。方法:成年SD大鼠腹腔注射脂多糖(LPS 10 mg/kg)4 h后,分离心室肌细胞。用细胞缩短的方法观察ADM对心肌收缩的影响。以细胞内cAMP的水平为指标,研究ADM对内毒素性休克大鼠心肌细胞β-肾上腺素受体激动剂反应性的影响。结果:休克心肌细胞细胞缩短程度较正常心肌细胞明显减弱。ADM孵育心肌细胞时间超过60min具有明显的负性肌力作用。特异性ADM受体拮抗剂ADM-(22-52)可取消上述两种负性肌力作用。休克心肌细胞cAMP基础水平较正常心肌细胞降低(P<0.05)。与正常对照组比较,用1μmol/L异丙肾上腺素(Iso)刺激内毒素性休克大鼠的β-肾上腺素受体,cAMP的增加明显减少(P<0.01)。1μmol/L forskolin[一种直接的腺苷酸环化酶(AC)激动剂]增加cAMP的作用在2组间没有显著变化(P>0.05)。ADM-(22-52)可使内毒素性休克时心肌细胞对β-肾上腺素受体激动剂降低的反应性得到恢复。结论:内毒素性休克时过量产生的ADM使大鼠心肌细胞收缩减弱,有可能是ADM使大鼠心肌细胞对β-肾上腺素受体刺激的反应性降低所致。 展开更多
关键词 休克 肾上腺髓质素 β-肾上腺素受体激动剂
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