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基于网络药理学的“丹参-红花药对”抗骨质疏松分子机制研究 被引量：2
1
作者 张罡瑜 何琪 +6 位作者 林瑞婷 温晓雯 杨均政 钟莎 曾嘉旭 王海彬 陈鹏 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期284-291,319,共9页
目的构建丹参-红花药对活性成分-作用靶点网络和蛋白相互作用网络,分析靶点涉及的生物学过程和通路,研究丹参-红花抗骨质疏松(osteoporosis,OP)的分子作用机制。方法通过TCMSP数据库筛选丹参-红花药对的潜在活性成分,用Swiss数据库预测... 目的构建丹参-红花药对活性成分-作用靶点网络和蛋白相互作用网络,分析靶点涉及的生物学过程和通路,研究丹参-红花抗骨质疏松(osteoporosis,OP)的分子作用机制。方法通过TCMSP数据库筛选丹参-红花药对的潜在活性成分,用Swiss数据库预测其作用靶点,与Disgenet数据库获得的OP靶点相映射,得到丹参-红花药对抗OP的潜在靶点。采用Cytoscape软件构建"药物-活性成分-潜在靶点"网络,利用String数据库和Cytoscape构建蛋白质相互作用网络。使用David数据库对丹参-红花药对的作用靶点进行GO生物功能分析和KEGG通路富集分析。结果获得丹参和红花中具有类药性、口服吸收良好的潜在活性成分分别为65个和22个,其治疗OP的潜在靶点36个。其中成分Poriferast-5-en-3beta-ol、Poriferasterol、Flavoxanthin、Beta-sitosterol、Stigmasterol、Luteolin、Kaempferol、α-amyrin、5,6-dihydroxy-7-isopropyl-1,1-dimethyl-2,3-dihydrophenanthren-4-one、Przewalskin a、Salviolone、Phytoene、Phytofluene、Beta-carotene等能与5个及5个以上的靶点相连接,为丹参-红花药对治疗OP的主要活性成分。蛋白质网络分析显示,靶点基因ESR1、MAPK3、ERBB2、CYP19A1、CYP2B6的Degree值均大于中位数7的2倍以上。GO生物过程分析和KEGG通路富集分析显示,丹参-红花药对治疗OP主要涉及的生物过程有妊娠期乳腺分支、转录后基因沉默的负调控、RNA对基因沉默的负调控、前列腺生长、乳腺导管形态形成分支、花生四烯酸的代谢等过程,主要富集的通路为卵巢类固醇生成、甾类激素生物合成、催乳素信号通路、粘着连接、膀胱癌、雌激素信号通路等,表明丹参-红花可以通过参与调控多种生物学过程发挥治疗OP的作用。结论丹参-红花药对治疗OP具有多成分、多靶点、多途径的作用特点,该研究为进一步开展丹参-红花药对抗OP分子作用机制的研究以及新药开发等提供了新思路和新方法。 展开更多
关键词 丹参-红花药对 骨质疏松 网络药理学 生物过程 信号通路
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槲皮素调控关节炎软骨细胞胆固醇代谢的机制研究 被引量：10
2
作者 肖嘉聪 麦嘉乐 +4 位作者 张罡瑜 何琪 杨均政 潘兆丰 王海彬 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1336-1341,共6页
目的 探讨槲皮素对关节炎软骨细胞胆固醇代谢的影响及作用机制。方法 体外分离培养小鼠软骨细胞,分为对照组、模型组、低浓度组、高浓度组。CCK-8检测槲皮素对软骨细胞增殖的影响;胆固醇检测试剂盒检测细胞内总胆固醇(TC)水平;qRT-PCR... 目的 探讨槲皮素对关节炎软骨细胞胆固醇代谢的影响及作用机制。方法 体外分离培养小鼠软骨细胞,分为对照组、模型组、低浓度组、高浓度组。CCK-8检测槲皮素对软骨细胞增殖的影响;胆固醇检测试剂盒检测细胞内总胆固醇(TC)水平;qRT-PCR检测骨关节炎软骨细胞中Cyp7b1、CH25H、RORα、Mmp3、Mmp13、Col2a1、Il-6的表达水平;Western blot检测软骨细胞中CYP7B1、CH25H、RORα、MMP3和MMP13的蛋白表达水平。结果 (1)CCK-8结果显示浓度在10μmol/L以下的槲皮素对软骨细胞没有毒性,而高浓度(25、50、100μmol/L)的槲皮素会抑制软骨细胞增殖。(2)细胞内总胆固醇水平测定结果显示,使用槲皮素处理后的关节炎软骨细胞内总胆固醇水平较模型组低(P<0.05)。(3)qRT-PCR结果显示,槲皮素组中软骨细胞的Cyp7b1、CH25H、RORα、Mmp3、Mmp13、Il-6的表达水平较模型组降低,Col2a1的表达水平较模型组升高(P<0.05)。(4)Western blot结果显示药物干预组中CYP7B1、CH25H、RORα、MMP3、 MMP13的蛋白表达水平均比模型组降低(P<0.05)。结论 槲皮素可以通过CH25H/CYP7B1/RORα信号通路调控关节炎软骨细胞中的胆固醇代谢,减轻关节炎软骨细胞中的炎症和细胞外基质降解。 展开更多
关键词 骨关节炎 槲皮素 胆固醇代谢 CH25H/CYP7B1/RORα 基质金属蛋白酶
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去势小鼠椎体骨质疏松和终板重塑导致椎间盘退变 被引量：20
3
作者 肖志锋 林定坤 +3 位作者 何剑波 苏国义 侯宇 陈树东 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1278-1283,共6页
目的通过去势小鼠模型探讨椎体骨质疏松(osteoporosis,OP)是否影响椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IVDD),并初步阐明OP相关性IVDD的发病机制。方法 30只8周龄健康雌性C57BL/6 J小鼠(16.8±0.6) g,随机分为正常对照组... 目的通过去势小鼠模型探讨椎体骨质疏松(osteoporosis,OP)是否影响椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IVDD),并初步阐明OP相关性IVDD的发病机制。方法 30只8周龄健康雌性C57BL/6 J小鼠(16.8±0.6) g,随机分为正常对照组(CT组,n=15)和去势组(OVX组,n=15)。适应性饲养3 d后分别行假手术和双侧卵巢摘除,记录体重等一般资料。术后12周处死小鼠,取下L4/5脊柱节段。Micro-CT检测小鼠L5椎体骨量、微结构、终板孔隙率以及L4/5椎间盘体积变化;番红O-固绿染色观察椎间盘病理改变;免疫组织化学法检测椎间盘Col2的表达,免疫荧光检测椎间盘血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。结果 OVX组小鼠与CT组相比,腹腔内可见大量脂肪堆积,卵巢明显萎缩,伴随体重明显增加及子宫重量明显减轻(~*P<0.05)。Micro-CT结果显示,OVX小鼠可见明显的椎体骨质疏松,与CT组相比骨结构参数骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁连接密度明显降低,而骨小梁变异系数及模型指数明显升高(~*P<0.05);终板出现明显的骨化重塑和孔隙率增加,同时伴有椎间盘体积的明显降低(~*P<0.05)。番红O-固绿染色显示OVX小鼠L4/5椎间盘出现明显退变,可见终板明显骨化和增厚,髓核细胞外基质的降解和结构紊乱。椎间盘免疫组化显示OVX小鼠椎间盘中Col2表达明显降低,在终板骨化区和纤维环中尤其明显,免疫荧光显示在椎间盘终板中VEGF表达明显增加。结论 OVX小鼠椎体OP和终板骨化重塑可促使椎间盘发生退变,终板孔隙的增加及血管新生并不能为椎间盘修复提供更多营养,反而是导致IVDD的重要因素。 展开更多
关键词 椎间盘退变 骨质疏松 终板 骨-软骨重塑 去卵巢 动物实验
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阿伦磷酸钠联合肾骨安对去势小鼠终板结构和椎间盘退变的影响 被引量：7
4
作者 肖志锋 林定坤 +3 位作者 苏国义 陈美惠 侯宇 陈树东 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1128-1134,共7页
目的 :观察阿伦磷酸钠(alendronate,ALN)联合补肾中药———肾骨安(herbs,HB)对去势小鼠椎体终板、椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IVDD)的影响,初步探讨ALN+HB干预IVDD的作用机制。方法:32只12周龄健康雌性C57BL/6J小鼠... 目的 :观察阿伦磷酸钠(alendronate,ALN)联合补肾中药———肾骨安(herbs,HB)对去势小鼠椎体终板、椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IVDD)的影响,初步探讨ALN+HB干预IVDD的作用机制。方法:32只12周龄健康雌性C57BL/6J小鼠,随机分为正常对照组(对照组,n=8)、去卵巢组(OVX组,n=8)、ALN组(n=8)及ALN+HB组(n=8)。对照组行假手术,其余各组行双侧卵巢摘除。术后3d开始给药,连续给药2个月后取材,HE及番红O-固绿染色观察椎间盘组织形态学改变并进行病理评分,显微计算机断层扫描(u-CT)检测终板表面孔隙变化及附近骨赘增生情况,免疫组织化学法检测椎间盘中Ⅱ型胶原(Collagen-typeⅡ,Col2)的表达。结果:实验过程中无小鼠死亡。HE及番红O-固绿染色对照组椎间盘结构和形态基本正常;OVX组椎间盘终板发生严重骨化重塑,以下位终板更为明显,同时出现终板与髓核的边界结构紊乱,椎间盘基质的丢失及裂隙形成;ALN组终板骨化重塑较OVX组轻,髓核结构形态改善,软骨终板内仍可见一些小的骨化区;ALN+HB组终板骨化重塑不明显,番红O固绿染色染色可见软骨终板着色加深。IVDD病理评分、终板表面孔隙率(%)和Col2积分光密度(IOD)值分别为1.20±0.84、28.60±4.04和27764.7±1958.2,OVX组为4.00±1.58、56.80±9.39和17213.6±1021.3,ALN组为2.40±0.89、36.20±3.42和18921.4±888.1,ALN+HB组为2.00±0.71、29.60±6.19和23420.1±2439.6。OVX组与对照组比较IVDD病理评分、终板孔隙率均显著性升高(P<0.05);ALN组、ALN+HB组与OVX组比较二者均显著性降低(P<0.05);ALN组、ALN+HB组与对照组比较,及ALN+HB组与ALN组比较二者均无统计学差异(P>0.05)。OVX组、ALN组和ALN+HB组与对照组比较Col2 IOD值均显著性降低(P<0.05),ALN组与OVX组比较无统计学差异(P>0.05),ALN+HB组与OVX组、ALN组比较均显著性升高(P<0.05)。结论 :OVX小鼠雌激素缺乏可引起椎体终板的骨化重塑及孔隙率增加,导致IVDD。ALN及ALN+HB均可以抑制椎体终板的重塑,降低终板孔隙率,保证终板结构和功能完整,从而能延缓雌激素缺乏相关IVDD,ALN+HB效果更为明显。 展开更多
关键词 椎间盘退变 卵巢切除 终板 阿伦膦酸钠 肾骨安 小鼠
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组蛋白甲基转移酶2(SMYD2)抑制剂LLY-507对成骨分化的影响 被引量：2
5
作者 李建良 张濛 +7 位作者 麦嘉乐 何琪 张罡瑜 陈伟坚 肖嘉聪 潘兆丰 宫大伟 王海彬 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期373-379,433,共8页
目的研究SMYD2抑制剂LLY-507对小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1)及人骨髓间充质干细胞(hMSCs)成骨分化的影响。方法通过CCK-8法检测LLY-507对MC3T3-E1和hMSCs增殖的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)染色和活性测定检测不同浓度LLY-507干预下... 目的研究SMYD2抑制剂LLY-507对小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1)及人骨髓间充质干细胞(hMSCs)成骨分化的影响。方法通过CCK-8法检测LLY-507对MC3T3-E1和hMSCs增殖的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)染色和活性测定检测不同浓度LLY-507干预下MC3T3-E1和hMSCs早期成骨分化标志物ALP的活性情况;通过茜素红染色及半定量分析检测LLY-507对MC3T3-E1和hMSCs矿化能力的影响;运用荧光定量PCR检测hMSCs的成骨相关基因Osterix、Runx2、OPG、OPN mRNA的表达;Western blot检测hMSCs的Runx2和SMYD2蛋白表达量。结果CCK-8结果表明LLY-507在0.8μmol/L的剂量下细胞活性无明显影响,不会明显抑制细胞增殖。ALP染色及活性测定表明,加入50 nmol/L及以上剂量的LLY-507干预7 d后能够明显抑制MC3T3-E1及hMSCs成骨分化以及碱性磷酸酶的表达(P<0.05);茜素红染色及半定量分析表明100 nmol/L剂量的LLY-507能够明显抑制MC3T3-E1及hMSCs的矿化能力(P<0.05)。通过qPCR,加入25 nmol/L及以上剂量的LLY-507分别干预7 d和14 d后能够明显抑制hMSCs成骨分化相关基因Runx2、Osterix、OPG、OPN的mRNA表达(P<0.05)。通过Western blot,加入50 nmol/L及以上剂量的LLY-507干预7 d和14 d后均能够明显抑制hMSCs的Runx2蛋白和SMYD2蛋白的表达。结论抑制SMYD2的表达能够抑制成骨相关基因的表达,说明SMYD2在成骨分化过程中起到促进成骨的作用。 展开更多
关键词 SMYD2 LLY-507 MC3T3-E1 HMSCS 成骨分化
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基于网络药理学探讨骨碎补抗骨质疏松的分子作用机制 被引量：11
6
作者 张罡瑜 朱璐璐 +4 位作者 林瑞婷 李泽云 李敏瑶 王海彬 陈鹏 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1078-1085,共8页
目的构建骨碎补活性成分-作用靶点网络和蛋白相互作用网络,分析靶点涉及的生物过程和通路,研究骨碎补抗骨质疏松( osteoporosis,OP)的潜在机制。方法通过TCMSP 数据库筛选骨碎补的活性成分,用Swiss 数据库预测其靶点,与Disgenet 数据库... 目的构建骨碎补活性成分-作用靶点网络和蛋白相互作用网络,分析靶点涉及的生物过程和通路,研究骨碎补抗骨质疏松( osteoporosis,OP)的潜在机制。方法通过TCMSP 数据库筛选骨碎补的活性成分,用Swiss 数据库预测其靶点,与Disgenet 数据库获得的OP 靶点相映射,得到骨碎补抗OP 的潜在靶点。利用Cytoscape 构建“骨碎补-活性化合物-潜在靶点”网络,采用String 数据库和Cytoscape 构建蛋白相互作用网。利用David 数据库进行GO 生物功能和KEGG 通路富集分析。结果得到骨碎补活性成分18 个,其治疗OP 的潜在靶点24 个。成分豆甾醇( stigmasterol)、β-谷甾醇( beta-sitosterol)、黄烷酮( Eriodyctiol ( flavanone))、山奈酚( kaempferol)、柚皮素( naringenin)、圣草酚( eriodictyol)和环木菠萝烷醇( cycloartenone)能与5个以上靶点相连,为骨碎补抗OP 的主要成分。靶点CYP19A1 与成分连接次数为8 次,对骨碎补抗OP 具有重要意义;CYP1B1 为4 次,MMP1、CA2、CYP17A1、ESR1、MMP13、LDLR、CYP1A1、MMP2 均为3 次,对骨碎补抗OP 有较大意义。GO 生物过程和KEGG 富集分析显示,骨碎补抗OP 主要涉及氧化还原过程( oxidation-reduction process)、基因表达正调控( positiveregulation of gene expression)、类固醇代谢) steroid metabolic process)、RNA 聚合酶Ⅱ启动子的转录起始( transcription initiationfrom RNA polymerase II promoter)等生物学过程,通过调节代谢通路( Metabolic pathways)、类固醇激素生物合成( Steroidhormone biosynthesis)、卵巢类固醇生成( Ovarian steroidogenesis)、癌症通路( Pathways in cancer)等通路发挥抗OP 作用。结论本研究体现骨碎补多成分、多靶点、多途径的作用特点,为阐释其治疗OP 的作用机制提供了科学依据,为进一步开展骨碎补抗OP 分子作用机制的研究以及新药开发等提供了新思路和新方法。 展开更多
关键词 中医中药 骨碎补 骨质疏松 网络药理学 生物过程 信号通路
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