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仙草总黄酮提取纯化工艺优化及其抗氧化活性
被引量：
13
1
作者
魏星任
宋晓娟
+3 位作者
龙洁怡
张娇
严萍
詹若挺
《中成药》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期1185-1188,共4页
目的优化仙草总黄酮提取纯化工艺,并评价其抗氧化活性。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、料液比、提取时间为影响因素,总黄酮提取量为评价指标,正交试验优化提取工艺;以总黄酮吸附率、解吸附率为指标,考察不同型号大孔树脂对纯...
目的优化仙草总黄酮提取纯化工艺,并评价其抗氧化活性。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、料液比、提取时间为影响因素,总黄酮提取量为评价指标,正交试验优化提取工艺;以总黄酮吸附率、解吸附率为指标,考察不同型号大孔树脂对纯化效果的影响。然后,通过测定总黄酮DPPH清除能力考察纯化产物抗氧化活性。结果最佳提取条件为乙醇体积分数50%,料液比1∶50,提取时间1.5 h,总黄酮提取量1 335 mg。X-5型大孔树脂最适合纯化总黄酮,吸附量为12.73 mg/g,解吸率为58.84%,最佳纯化条件为0.3 mg/m L、p H 2~4的粗提物静态吸附24 h,以2 BV/h速率用10%、20%、30%、40%乙醇进行梯度洗脱。纯化后总黄酮对DPPH自由基的清除能力增强,IC50为21μg/m L。结论该工艺稳定可靠,仙草总黄酮纯化后抗氧化活性显著提高。
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关键词
仙草总黄酮
提取
纯化
抗氧化活性
正交试验
DPPH
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职称材料
广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析
被引量：
3
2
作者
钟李婷
陈秀珍
+6 位作者
唐云
李俊仁
王小兵
刘彦婷
周璇璇
詹若挺
陈立凯
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期10-15,共6页
对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatF...
对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatFPPS融合蛋白。利用GST Pull-Down技术,将GST-PatFPPS融合蛋白分别与广藿香叶片总蛋白进行体外孵育,洗脱得到蛋白复合物,经SDS-PAGE及LC-MS/MS鉴定。结果表明,PatFPPS原核表达体系成功建立,获得纯化重组蛋白,并且筛选得到一些候选PatFPPS互作蛋白。利用优化的原核表达体系,可获得可溶性的PatFPPS蛋白,并鉴定得到与之互作的候选蛋白。
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关键词
广藿香
蛋白表达
广藿香醇
互作蛋白
茉莉酸甲酯
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职称材料
毛冬青三萜C-28位氧化修饰相关CYP450基因的发掘和功能鉴定
被引量：
1
3
作者
陈媛媛
赖美红
+2 位作者
贠小芸
王魁
徐晖
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第4期459-467,共9页
药用植物毛冬青Ilex pubescens Hook.et Arn.含有大量的五环三萜及三萜皂苷,化学结构复杂多样。三萜类化合物骨架的修饰与其生物合成途径下游的一类关键酶——细胞色素P450单加氧酶(CYP450)密切相关。本研究通过分析毛冬青转录组数据,...
药用植物毛冬青Ilex pubescens Hook.et Arn.含有大量的五环三萜及三萜皂苷,化学结构复杂多样。三萜类化合物骨架的修饰与其生物合成途径下游的一类关键酶——细胞色素P450单加氧酶(CYP450)密切相关。本研究通过分析毛冬青转录组数据,筛选到1个可能具有五环三萜C-28位氧化功能的CYP450基因(IpAO2)。克隆IpAO2基因并将其通过质粒转化法导入能高效合成amyrin的酿酒酵母工程菌中,GC-MS分析重组酵母代谢产物,发现IpAO2基因编码的蛋白可以将α-amyrin和β-amyrin分别氧化为熊果酸和齐墩果酸,确定IpAO2是一个五环三萜C-28位氧化酶基因。IpAO2基因的鉴定对全面阐明毛冬青三萜及三萜皂苷的生物合成机制具有重要意义,为后期开展毛冬青活性三萜类化合物的代谢工程研究奠定了基础。
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关键词
毛冬青
三萜
生物合成
C-28氧化酶
熊果酸
酿酒酵母
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职称材料
题名
仙草总黄酮提取纯化工艺优化及其抗氧化活性
被引量：
13
1
作者
魏星任
宋晓娟
龙洁怡
张娇
严萍
詹若挺
机构
广州中医药大学
中药
资源
科学与
工程
研究
中心
岭南
中药
资源
教育部
重点
实验室
(
广州中医药大学
)
国家
中成药
工程技术
研究
中心
南
药
研发
实验室
出处
《中成药》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期1185-1188,共4页
基金
广东省普通高校创新团队项目-中药资源创新研究团队(2016KYTD02)
省级大学生创新创业训练计划项目(201610572099)
广东省高水平大学建设科研项目-凉粉草降脂活性成分筛选及作用机制研究(广中医研[2017]10)
文摘
目的优化仙草总黄酮提取纯化工艺,并评价其抗氧化活性。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、料液比、提取时间为影响因素,总黄酮提取量为评价指标,正交试验优化提取工艺;以总黄酮吸附率、解吸附率为指标,考察不同型号大孔树脂对纯化效果的影响。然后,通过测定总黄酮DPPH清除能力考察纯化产物抗氧化活性。结果最佳提取条件为乙醇体积分数50%,料液比1∶50,提取时间1.5 h,总黄酮提取量1 335 mg。X-5型大孔树脂最适合纯化总黄酮,吸附量为12.73 mg/g,解吸率为58.84%,最佳纯化条件为0.3 mg/m L、p H 2~4的粗提物静态吸附24 h,以2 BV/h速率用10%、20%、30%、40%乙醇进行梯度洗脱。纯化后总黄酮对DPPH自由基的清除能力增强,IC50为21μg/m L。结论该工艺稳定可靠,仙草总黄酮纯化后抗氧化活性显著提高。
关键词
仙草总黄酮
提取
纯化
抗氧化活性
正交试验
DPPH
分类号
R284.2 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析
被引量：
3
2
作者
钟李婷
陈秀珍
唐云
李俊仁
王小兵
刘彦婷
周璇璇
詹若挺
陈立凯
机构
广州中医药大学
中药
资源
科学与
工程
研究
中心
岭南
中药
资源
教育部
重点
实验室
(
广州中医药大学
)
国家
中成药
工程技术
研究
中心
南
药
研发
实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期10-15,共6页
基金
国家自然科学基金项目(81803657)
广东省教育厅青年创新人才类项目(2017KQNCX039)
+1 种基金
广东省教育厅重点提升平台建设项目—岭南中药资源教育部重点实验室(2014KTSPT016)
广东省中医药局科技项目(20181075)
文摘
对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatFPPS融合蛋白。利用GST Pull-Down技术,将GST-PatFPPS融合蛋白分别与广藿香叶片总蛋白进行体外孵育,洗脱得到蛋白复合物,经SDS-PAGE及LC-MS/MS鉴定。结果表明,PatFPPS原核表达体系成功建立,获得纯化重组蛋白,并且筛选得到一些候选PatFPPS互作蛋白。利用优化的原核表达体系,可获得可溶性的PatFPPS蛋白,并鉴定得到与之互作的候选蛋白。
关键词
广藿香
蛋白表达
广藿香醇
互作蛋白
茉莉酸甲酯
Keywords
Pogostemon cablin
protein expression
patchouli alcohol
interaction protein
methyl jasmonate
分类号
R28 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
毛冬青三萜C-28位氧化修饰相关CYP450基因的发掘和功能鉴定
被引量：
1
3
作者
陈媛媛
赖美红
贠小芸
王魁
徐晖
机构
广州中医药大学
中药
资源
科学与
工程
研究
中心
岭南
中药
资源
教育部
重点
实验室
(
广州中医药大学
)
国家
中成药
工程技术
研究
中心
南
药
研发
实验室
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第4期459-467,共9页
基金
广东省自然科学基金资助项目(No.2015A030313347)
广东省教育厅重点提升平台建设资助项目(No.2014KTSPT016)~~
文摘
药用植物毛冬青Ilex pubescens Hook.et Arn.含有大量的五环三萜及三萜皂苷,化学结构复杂多样。三萜类化合物骨架的修饰与其生物合成途径下游的一类关键酶——细胞色素P450单加氧酶(CYP450)密切相关。本研究通过分析毛冬青转录组数据,筛选到1个可能具有五环三萜C-28位氧化功能的CYP450基因(IpAO2)。克隆IpAO2基因并将其通过质粒转化法导入能高效合成amyrin的酿酒酵母工程菌中,GC-MS分析重组酵母代谢产物,发现IpAO2基因编码的蛋白可以将α-amyrin和β-amyrin分别氧化为熊果酸和齐墩果酸,确定IpAO2是一个五环三萜C-28位氧化酶基因。IpAO2基因的鉴定对全面阐明毛冬青三萜及三萜皂苷的生物合成机制具有重要意义,为后期开展毛冬青活性三萜类化合物的代谢工程研究奠定了基础。
关键词
毛冬青
三萜
生物合成
C-28氧化酶
熊果酸
酿酒酵母
Keywords
Ilex pubescens
triterpenoid
biosynthesis
C-28 oxidase
ursolic acid
Saccharomyces cerevisiae
分类号
R965 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
仙草总黄酮提取纯化工艺优化及其抗氧化活性
魏星任
宋晓娟
龙洁怡
张娇
严萍
詹若挺
《中成药》
CAS
CSCD
北大核心
2018
13
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析
钟李婷
陈秀珍
唐云
李俊仁
王小兵
刘彦婷
周璇璇
詹若挺
陈立凯
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
毛冬青三萜C-28位氧化修饰相关CYP450基因的发掘和功能鉴定
陈媛媛
赖美红
贠小芸
王魁
徐晖
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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职称材料
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