β-人绒毛膜促性腺激素快速高灵敏化学发光POC检测方法的建立及评价 被引量：1

1

作者 谢海宇 秦静 +3 位作者 张艳妮 刘俊杰 何小维 王羽 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期615-620,共6页

目的:建立β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)快速高灵敏化学发光POC检测法(POC-CLIA)并进行评价。方法:采用碱性磷酸酶(Alp)-AMPPD发光体系,以磁微粒(Mps)为固相载体构建POC-CLIA,并评估其灵敏度、精密度、准确度、线性范围、特异性、稳定... 目的:建立β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)快速高灵敏化学发光POC检测法(POC-CLIA)并进行评价。方法:采用碱性磷酸酶(Alp)-AMPPD发光体系,以磁微粒(Mps)为固相载体构建POC-CLIA,并评估其灵敏度、精密度、准确度、线性范围、特异性、稳定性、钩状效应和临床应用。结果:β-HCG最低检测限为0.71 mU/ml,线性检测范围为0.710~1.092×10^(4) mU/ml,且在1.7×10^(5) mU/ml内无钩状效应影响。批内和批间变异系数均<10%,可在37℃稳定保存10 d。准确度偏差在±10%之内,结果可靠。干扰物质与β-HCG均无交叉反应。对100例临床血清标本进行检测,与临床标准方法检测结果高度相关(R^(2)=0.997 0)。单个样品检测时间<15 min,且测试通量可达到200 T/h。结论:该方法具有较高应用价值,可广泛用于基层社区,助力基层医疗中妊娠及相关疾病筛查。 展开更多

关键词 人绒毛膜促性腺激素 化学发光免疫 即时检测 基层健康筛查

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克伦特罗荧光免疫层析试纸条的制备及特性研究 被引量：10

2

作者 李静宇 何小维 +2 位作者 刘晓云 李文美 邓建超 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2606-2611,共6页

本研究旨在制备性能优异的克伦特罗（clenbuterol,CLB）荧光免疫层析快速定量检测试纸条,为实现其产业化应用奠定基础。采用荧光胶乳微粒为标记物,以抗原包被浓度、膜干燥时间、混匀反应时间、反应温度及层析时间为单因素优化制备了CLB... 本研究旨在制备性能优异的克伦特罗（clenbuterol,CLB）荧光免疫层析快速定量检测试纸条,为实现其产业化应用奠定基础。采用荧光胶乳微粒为标记物,以抗原包被浓度、膜干燥时间、混匀反应时间、反应温度及层析时间为单因素优化制备了CLB荧光免疫层析试纸条,并对该试纸条的检测限、特异性、临床准确度及添加回收率、精密度和稳定性进行了评价。最佳制备条件：抗原包被浓度2.0mg/mL,膜干燥时间5d,混匀反应时间1min,反应温度25℃,层析时间15min。评价结果显示,试纸条检测限可达0.35μg/L;CLB与其他8种同类药物交叉反应率均小于0.8%,特异性良好;各批添加回收率在80%-120%之间,准确度达到要求;不同CLB浓度下变异系数（CV）均小于5%,符合精密度标准;此外,稳定性试验验证了该试纸条稳定性良好。 展开更多

关键词 克伦特罗 荧光免疫层析法 试纸条 快速检测

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NT-proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2

3

作者 刘鹏展 黄绮玲 +3 位作者 何小维 李文美 张文琪 张赛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期148-154,共7页

旨在制备并鉴定抗人NT-pro BNP特异性单克隆抗体。采用重组NT-pro BNP蛋白免疫Balb/c小鼠,取血清效价高的脾细胞与SP2/0细胞融合,经HAT筛选和有限稀释法亚克隆,获得阳性杂交瘤细胞株,用动物体内诱生法制备腹水,用正辛酸-硫酸铵沉淀法将... 旨在制备并鉴定抗人NT-pro BNP特异性单克隆抗体。采用重组NT-pro BNP蛋白免疫Balb/c小鼠,取血清效价高的脾细胞与SP2/0细胞融合,经HAT筛选和有限稀释法亚克隆,获得阳性杂交瘤细胞株,用动物体内诱生法制备腹水,用正辛酸-硫酸铵沉淀法将抗体纯化,并测定抗体的亚类、效价、特异性及相对亲和力。结果表明,获得4株能稳定分泌抗人NT-pro BNP单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为1G12、1B2、3D5和2D11。抗体Ig亚类,1G12和1B2为Ig G2a型,2D11为Ig G1型,3D5为Ig G2b型;1G12,1B2和3D5的抗体效价达到106,而2D11的效价仅达104。特异性好,1G12、1B2、3D5和2D11四株抗体的亲和常数依次为9.32×1011、1.07×1012、2.31×1012和6.33×1010。成功制备了特异性抗人NT-pro BNP单克隆抗体。 展开更多

关键词 NT-PROBNP 单克隆抗体 间接ELISA法

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呋喃唑酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备 被引量：5

4

作者 贾慧勤 丁焕中 +3 位作者 刘晓云 李小红 张炳旭 鲁晓雄 《中国兽药杂志》 2013年第6期20-23,共4页

为改进和完善免疫检测呋喃唑酮代谢物方法,制备了抗呋喃唑酮代谢物(AOZ)特异性抗体。采用对醛基苯甲酸对AOZ进行衍生化得到CPAOZ,还原CPAOZ结构中的C=N双键得到半抗原,半抗原用N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法与BSA偶联制备免疫原,免疫新西兰... 为改进和完善免疫检测呋喃唑酮代谢物方法,制备了抗呋喃唑酮代谢物(AOZ)特异性抗体。采用对醛基苯甲酸对AOZ进行衍生化得到CPAOZ,还原CPAOZ结构中的C=N双键得到半抗原,半抗原用N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法与BSA偶联制备免疫原,免疫新西兰大白兔制得特异性抗体,采用间接(竞争)ELISA法评价抗血清效价及特异性。结果显示,试验获得了较高效价(1∶1280000)的抗AOZ血清,AOZ半抑制浓度为5.9 ng/mL;抗血清与结构类似物呋喃它酮代谢物的交叉反应率仅为0.76%,与呋喃妥因代谢物和呋喃西林代谢物无交叉反应;利用该抗体建立的间接竞争ELISA检测法,AOZ在1～27 ng/mL与抑制率呈线性关系。结果表明,该特抗体虽然灵敏度较低,却对AOZ而非AOZ衍生物有特异性,可为畜产品中AOZ残留检测提供新的思路和方法。 展开更多

关键词 呋喃唑酮代谢物 特异性抗体 间接(竞争)ELISA

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新型冠状病毒抗原快速检测专家共识(2022) 被引量：16

5

作者 中国医院协会临床微生物实验室专业委员会 徐英春 +3 位作者 胡继红 邹嘉琪 王瑶 康可人 《协和医学杂志》 CSCD 2022年第3期402-411,共10页

新型冠状病毒肺炎疫情持续时间长、流行范围广,给全球公共卫生带来了巨大负担。作为感染早期诊断和疫情防控的主要检测手段之一,新型冠状病毒抗原快速检测已在国内逐步开展临床应用。就目前医务人员和社会公众所关注的新型冠状病毒抗原... 新型冠状病毒肺炎疫情持续时间长、流行范围广,给全球公共卫生带来了巨大负担。作为感染早期诊断和疫情防控的主要检测手段之一,新型冠状病毒抗原快速检测已在国内逐步开展临床应用。就目前医务人员和社会公众所关注的新型冠状病毒抗原检测相关问题,中国医院协会临床微生物实验室专业委员会组织医学检验、临床医学、感染控制、公共卫生及体外诊断产品研发等多领域专家,依据国内外最新研究进展和应用实践,共同制定了《新型冠状病毒抗原快速检测专家共识(2022)》。本共识介绍了目前新型冠状病毒抗原快速检测方法的技术原理、性能特点、结果解读及处置建议,并就不同场景下新型冠状病毒抗原快速检测应用策略和注意事项进行了解析,以期为临床诊疗和疫情防控中正确理解和应用这一检测技术提供参考建议。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 抗原快速检测 专家共识

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一种新的沙丁胺醇人工抗原的合成及单克隆抗体的制备 被引量：3

6

作者 陈观银 黄显会 +4 位作者 刘晓云 邓发亮 李帅鹏 孔祥凯 怀彬彬 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期23-28,共6页

【目的】为证明采用4-溴丁酸乙酯半抗原合成人工抗原可制备灵敏度高、特异性好的单克隆抗体.【方法】将硫酸沙丁胺醇(SAL)与4-溴丁酸乙酯反应制备半抗原(SAL-HS);通过N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成免疫原与包被原,用聚丙烯酰胺凝胶电泳... 【目的】为证明采用4-溴丁酸乙酯半抗原合成人工抗原可制备灵敏度高、特异性好的单克隆抗体.【方法】将硫酸沙丁胺醇(SAL)与4-溴丁酸乙酯反应制备半抗原(SAL-HS);通过N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成免疫原与包被原,用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱和质谱方法对沙丁胺醇免疫原及包被原进行鉴定.免疫原免疫Balb/c小鼠,采用融合技术产生杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性.【结果和结论】筛选出1株杂交瘤细胞株,其细胞培养上清液效价达1∶128 000,腹水效价达1∶2 560 000,免疫球蛋白亚型鉴定为IGg1;抗体对沙丁胺醇的半数抑制浓度(IC50)为:0.746 ng/mL;与其他同类结构药物的交叉反应率均小于0.015%. 展开更多

关键词 沙丁胺醇 单克隆抗体 胶体金 间接竞争ELISA

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尿微量白蛋白荧光免疫层析定量检测试剂的研制及性能评价 被引量：3

7

作者 张赛 洪裕好 +2 位作者 李凯 何小维 李文美 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期199-204,共6页

旨在建立一种快速定量检测人尿液中微量白蛋白的荧光免疫层析方法。以羧基荧光微球标记的抗人白蛋白单克隆抗体及羊抗兔Ig G为标记抗体,人白蛋白和兔Ig G分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。结果显示,所制备检测试剂的线性... 旨在建立一种快速定量检测人尿液中微量白蛋白的荧光免疫层析方法。以羧基荧光微球标记的抗人白蛋白单克隆抗体及羊抗兔Ig G为标记抗体,人白蛋白和兔Ig G分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。结果显示,所制备检测试剂的线性范围为5-300 mg/L,检测限为2.3 mg/L,批内和批间变异系数(CV)分别为6.4%-9.3%和6.5%-12.3%,平均回收率为102.3%。试剂与尿液中20种干扰物质无交叉反应,实时稳定性试验表明试剂盒有效期>12月。临床样本测试,与Orion Quik Read U-ALB试剂相关性较好(r=0.993,P<0.01),Bland-Altman分析表明两种方法的诊断结果具有较好的一致性。所制备的荧光免疫层析检测试剂提供了一种简单、快速、准确的定量检测尿液中微量白蛋白的方法。 展开更多

关键词 尿微量白蛋白 荧光免疫层析 快速检测

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犬C-反应蛋白荧光定量免疫层析检测方法的建立与应用 被引量：3

8

作者 康业 王羽 +3 位作者 胡树昆 吴培钿 李文美 何小维 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期621-627,共7页

试验开展了犬C-反应蛋白(C-CRP)荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在研制一种操作简易、灵敏度高,用于快速定量检测C-CRP荧光免疫层析试纸条。采用双抗体夹心法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球标记的抗C-CRP单克隆抗体及羊抗鸡IgY... 试验开展了犬C-反应蛋白(C-CRP)荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在研制一种操作简易、灵敏度高,用于快速定量检测C-CRP荧光免疫层析试纸条。采用双抗体夹心法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球标记的抗C-CRP单克隆抗体及羊抗鸡IgY为标记抗体,抗C-CRP单克隆抗体和鸡IgY分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。结果显示,所制备C-CRP检测试纸条的检测范围为0.5～250mg/L,检测限为0.5mg/L,批内和批间变异系数(CV)分别为0.68%～6.94%和0.89%～8.79%,平均回收率为98.15%～101.19%,试剂与9种干扰物质无交叉反应。加速破坏稳定性试验表明试纸条可以常温放置24个月。临床样本测试发现,其与I-CHROMA试剂盒检测结果相关性良好(R2=0.995)。综上所述,该荧光免疫层析试纸条灵敏度、特异度较高,且操作简单、快速,可用于宠物犬临床检测。 展开更多

关键词 犬C-反应蛋白(C-CRP) 荧光免疫层析 定量检测

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人体尿液中卡西酮类毒品的SPE-GC-MS定性定量分析 被引量：10

9

作者 王平 刘晓云 +2 位作者 刘遥 罗叶锋 王震 《法医学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期606-610,共5页

目的建立人体尿液中卡西酮类毒品的固相萃取-气相色谱-质谱联用(solid phase extraction-gas chromatography-mass spectrometry,SPE-GC-MS)定性定量分析方法,并进行方法学验证。方法人体尿液样品经固相萃取法提取、七氟丁酸酐衍生后,... 目的建立人体尿液中卡西酮类毒品的固相萃取-气相色谱-质谱联用(solid phase extraction-gas chromatography-mass spectrometry,SPE-GC-MS)定性定量分析方法,并进行方法学验证。方法人体尿液样品经固相萃取法提取、七氟丁酸酐衍生后,通过气相色谱-质谱仪检测甲卡西酮、4-甲基甲卡西酮和3,4-亚甲二氧基甲卡西酮,采用内标法定量分析,从特异性、精密度、回收率等方面进行方法学验证。结果尿液中甲卡西酮、4-甲基甲卡西酮和3,4-亚甲二氧基甲卡西酮在25～200 ng/mL的质量浓度范围内线性良好(r>0.99),检出限均为2.0 ng/mL,定量限均为25.0 ng/mL,日内、日间精密度均小于6.0%,回收率为98.4%～105.7%。结论本研究所建立的方法准确性、特异性好,可以满足滥用药物人员尿液中卡西酮类毒品的定性定量分析,为卡西酮类滥用检测提供了技术保障。 展开更多

关键词 法医毒理学 固相萃取 气相色谱-质谱法 甲卡西酮 4-甲基甲卡西酮 3 4-亚甲二氧基甲卡西酮 尿液

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莱克多巴胺人工抗原的合成与鉴定 被引量：5

10

作者 邓发亮 刘晓云 +1 位作者 唐时幸 王继华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第18期146-149,共4页

为合成新的、稳定的莱克多巴胺人工抗原,对莱克多巴胺结构进行修饰,合成带羧基基团的莱克多巴胺半抗原,经碳二亚胺法与载体BSA蛋白偶联制备莱克多巴胺人工抗原,采用紫外光谱扫描法、蛋白质电泳法和胶体金免疫层析法检测偶联物。莱克多... 为合成新的、稳定的莱克多巴胺人工抗原,对莱克多巴胺结构进行修饰,合成带羧基基团的莱克多巴胺半抗原,经碳二亚胺法与载体BSA蛋白偶联制备莱克多巴胺人工抗原,采用紫外光谱扫描法、蛋白质电泳法和胶体金免疫层析法检测偶联物。莱克多巴胺半抗原的结构经气相质谱联用仪确证。结果表明:莱克多巴胺人工合成抗原连接成功,与抗莱克多巴胺抗体有特异性反应,具有抗原性。该方法合成的莱克多巴胺人工抗原结构未见报道、稳定性优越,可作为莱克多巴胺免疫检测方法中包被抗原用于莱克多巴胺检测,也可作为免疫源性抗原用于制备抗莱克多巴胺抗体。 展开更多

关键词 莱克多巴胺 半抗原 人工抗原 免疫检测

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D16S539基因座中检出三带型等位基因及遗传分析 被引量：5

11

作者 宋晓丽 赵奇 +2 位作者 刘晓云 王继华 才蕾 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期143-145,共3页

目的:在亲子鉴定案件中检出的D16S539基因座三带型.方法:提取个体不同组织样本DNA,经两种扩增试剂盒检测及DNA测序分析.结果:被检母亲D16S539基因座分型结果为9/10/11,阴阳性对照分型结果准确.结论:D16S539三带型非常罕见,该个体为正常... 目的:在亲子鉴定案件中检出的D16S539基因座三带型.方法:提取个体不同组织样本DNA,经两种扩增试剂盒检测及DNA测序分析.结果:被检母亲D16S539基因座分型结果为9/10/11,阴阳性对照分型结果准确.结论:D16S539三带型非常罕见,该个体为正常成年女性,推测此三带型突变来源于杂合子局部的染色体重排或非整倍染色体. 展开更多

关键词 短串联重复序列(STR) 三带型等位基因 D16S539 遗传分析

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LC-MS/MS法快速测定头发中可卡因及其代谢物苯甲酰爱康宁 被引量：4

12

作者 潘美如 强火生 +2 位作者 沈保华 严慧 向平 《法医学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期375-378,383,共5页

目的建立头发中可卡因(cocaine)及其代谢物苯甲酰爱康宁(benzoylecgonine)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)快速测定方法。方法去污处理后的头发中加入氘代内标(可卡因-D_3和苯甲酰爱康宁-D_8),经甲醇超声提取后用Restek Allure PFP丙基... 目的建立头发中可卡因(cocaine)及其代谢物苯甲酰爱康宁(benzoylecgonine)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)快速测定方法。方法去污处理后的头发中加入氘代内标(可卡因-D_3和苯甲酰爱康宁-D_8),经甲醇超声提取后用Restek Allure PFP丙基柱分离,采用多反应监测模式同时测定可卡因和苯甲酰爱康宁。结果头发中可卡因和苯甲酰爱康宁在0.02~10.00 ng/mg质量分数范围内线性关系良好,检出限均为0.01 ng/mg。结论本研究所建方法样品前处理简单、快速、选择性好,适用于头发中可卡因及代谢物苯甲酰爱康宁的检测。 展开更多

关键词 法医毒理学 液相色谱-串联质谱 可卡因 苯甲酰爱康宁 头发

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人C反应蛋白在不同原核表达载体及菌株中的表达及免疫反应性分析 被引量：4

13

作者 李江峰 矫丽媛 +2 位作者 赵晓妮 王继华 才蕾 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期166-170,共5页

构建人C反应蛋白(CRP)原核表达载体,并分别将其转化进入E.coli BL21(DE3)和Rosetta gami 2(DE3)p Lys S中,诱导CRP重组蛋白的表达;主要运用了基因工程,亲和层析及透析复性等方法。成功构建了CRP原核表达载体及菌株。经IPTG诱导后,得到... 构建人C反应蛋白(CRP)原核表达载体,并分别将其转化进入E.coli BL21(DE3)和Rosetta gami 2(DE3)p Lys S中,诱导CRP重组蛋白的表达;主要运用了基因工程,亲和层析及透析复性等方法。成功构建了CRP原核表达载体及菌株。经IPTG诱导后,得到了不同的重组CRP蛋白。结果表明,相同表达载体在不同的表达菌株中的表达情况有一定差别,分别在大肠杆菌及Rosetta gami2(DE3)p Lys S中表达并得到了重组CRP的包涵体,对复性后的CRP重组蛋白进行Westen blotting及ELISA检测,结果表明原核表达的重组CRP蛋白的免疫反应性很低,CRP蛋白发挥免疫活性需要以五聚体形式存在。 展开更多

关键词 C反应蛋白 原核表达 包涵体 复性

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人白细胞介素6的原核表达和纯化及包涵体复性 被引量：3

14

作者 李江峰 万惠芳 +1 位作者 王继华 才蕾 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期228-231,共4页

1980年,Weissenbach等在研究人成纤维细胞β干扰素（interferonβ,IFN-β）时,首次发现一种相对分子质量（Mr）约为26 000的蛋白,当时将其命名为IFN-β2,直到1989年,在纽约召开的“急性期反应和免疫应答的调控：新的细胞因子”会议中将... 1980年,Weissenbach等在研究人成纤维细胞β干扰素（interferonβ,IFN-β）时,首次发现一种相对分子质量（Mr）约为26 000的蛋白,当时将其命名为IFN-β2,直到1989年,在纽约召开的“急性期反应和免疫应答的调控：新的细胞因子”会议中将其命名为白细胞介素6（interleukin 6,IL-6）,并一直沿用至今。 展开更多

关键词 白细胞介素6 原核表达载体 包涵体 亲和层析 透析复性

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甲胎蛋白的原核表达及复性优化 被引量：3

15

作者 才蕾 矫丽媛 +1 位作者 王继华 唐时幸 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期193-197,共5页

构建甲胎蛋白的原核表达载体p ET32a-AFP,对包涵体形式表达的甲胎蛋白进行复性优化。将构建的重组质粒p ET32a-AFP转化入E.coli,IPTG诱导表达后,经亲和层析纯化获得AFP包涵体,通过对复性过程、p H、添加剂等的研究摸索,获得最佳复性条... 构建甲胎蛋白的原核表达载体p ET32a-AFP,对包涵体形式表达的甲胎蛋白进行复性优化。将构建的重组质粒p ET32a-AFP转化入E.coli,IPTG诱导表达后,经亲和层析纯化获得AFP包涵体,通过对复性过程、p H、添加剂等的研究摸索,获得最佳复性条件。当采用添加0.5 mol/L L-精氨酸的一步法透析复性方法,且透析液p H值为8.5,重组人AFP包涵体蛋白起始浓度为1.0 mg/m L时,复性效率最高。该复性方法获得蛋白质具有较高的回收率且操作简便。 展开更多

关键词 甲胎蛋白 原核表达 复性

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人D-二聚体的制备及其冻干性质的分析 被引量：1

16

作者 武建伟 才蕾 +1 位作者 王继华 唐时幸 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期219-224,共6页

以人源纤维蛋白原为原材料制备D-二聚体,将其制成冻干品并分析其冻干性质。使用凝血酶、Factor XIIIa酶解纤维蛋白原,获得交联纤维蛋白。经纤溶酶降解交联纤维蛋白,生成纤维蛋白降解产物。超滤除去纤维蛋白降解产物中的小分子物质,可获... 以人源纤维蛋白原为原材料制备D-二聚体,将其制成冻干品并分析其冻干性质。使用凝血酶、Factor XIIIa酶解纤维蛋白原,获得交联纤维蛋白。经纤溶酶降解交联纤维蛋白,生成纤维蛋白降解产物。超滤除去纤维蛋白降解产物中的小分子物质,可获得较高纯度的D-二聚体。通过筛选和优化冻干方案,将D-二聚体制备成冻干品。经检测可知,D-二聚体冻干品可在37℃稳定保存12 d;复溶后在25℃稳定保存8 d;复溶后在4℃稳定保存30 d;复溶时,常用复溶溶剂对其复溶后的活性检测无明显影响。 展开更多

关键词 纤维蛋白 纤维蛋白原 D-二聚体 血栓 冻干品

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人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的原核表达和活性鉴定 被引量：1

17

作者 武建伟 才蕾 +4 位作者 钱伟 矫丽媛 李江峰 宋晓丽 王继华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期933-936,共4页

目的对人源中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)进行原核表达、纯化,并验证其免疫学活性。方法通过化学合成法合成人源NGAL成熟肽c DNA序列,构建原核表达载体p Cold-NGAL,转化至E.coli BL21(DE3)plys S中。摸索p Cold-NGAL最佳诱导... 目的对人源中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)进行原核表达、纯化,并验证其免疫学活性。方法通过化学合成法合成人源NGAL成熟肽c DNA序列,构建原核表达载体p Cold-NGAL,转化至E.coli BL21(DE3)plys S中。摸索p Cold-NGAL最佳诱导条件,表达并纯化重组蛋白;使用SDS-PAGE、Western blot法和免疫比浊法鉴定纯化后的重组NGAL蛋白的相对分子质量(Mr)和以及与NGAL单克隆抗体(m Ab)的结合活性。结果经双酶切和测序验证,原核表达载体p Cold-NGAL成功构建。优化诱导条件后,重组NGAL蛋白在E.coli BL21(DE3)plys S中以可溶性蛋白形式表达,Mr约为25 000。通过Ni2+亲和层析纯化获得高纯度重组NGAL蛋白,SDS-PAGE分析其纯度高于98.0%。经Western blot法和免疫比浊法鉴定,重组NGAL蛋白可与NGAL m Ab特异性结合。结论成功表达和纯化了重组NGAL蛋白,并具有免疫学活性。 展开更多

关键词 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 脂质运载蛋白2 原核表达

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应用于胶体金免疫层析的MDMA单克隆抗体的制备与鉴定

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作者 伍丽贤 陈立 康可人 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1034-1038,共5页

目的:制备高特异性的抗3-4亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)单克隆抗体,用于建立快速检测MDMA的胶体金免疫层析方法。方法:用MDMA人工抗原免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经亚克隆筛选得到稳定分泌抗MDMA单克隆抗体的杂... 目的:制备高特异性的抗3-4亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)单克隆抗体,用于建立快速检测MDMA的胶体金免疫层析方法。方法:用MDMA人工抗原免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经亚克隆筛选得到稳定分泌抗MDMA单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备腹水,辛酸-饱和硫酸铵法纯化得到抗MDMA单克隆抗体(m Ab),并用胶体金免疫层析筛选出适用的抗MDMA单克隆抗体(m Ab),并对其进行特异性、纯度、亚类的鉴定分析。结果:经多次亚克隆后筛选得到4C10、4D10、7D11、8D4 4株分泌抗MDMA单克隆抗体的杂交瘤细胞株。其中细胞株8D4分泌的抗体适用于胶体金免疫层析。结论:成功筛选出能稳定分泌m Ab的细胞株,为MDMA快速检测试剂的研制提供了关键材料。 展开更多

关键词 MDMA 单克隆抗体 免疫学特性 胶体金免疫层析

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重组肌红蛋白的原核表达、纯化及其冻干质控品的制备

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作者 任艳娜 才蕾 +4 位作者 武建伟 钱伟 张荣华 王继华 唐时幸 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期189-195,共7页

旨在为市场提供一种廉价、稳定、特异性强、灵敏度高的肌红蛋白质控品;将密码子优化后的肌红蛋白序列通过两步法进行化学合成,并连接到pET-28a表达载体上,转入大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导表达;目的蛋白经Ni Sepharose... 旨在为市场提供一种廉价、稳定、特异性强、灵敏度高的肌红蛋白质控品;将密码子优化后的肌红蛋白序列通过两步法进行化学合成,并连接到pET-28a表达载体上,转入大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导表达;目的蛋白经Ni Sepharose 6 Fast Flow(FF)亲和层析进行纯化后,对其特异性进行检测,并研究蛋白稀释液的配方和优化冻干工艺,最后对冻干质控品的稳定性进行检测;结果显示目的蛋白分子量大小为20 kD左右,具有较强的特异性。蛋白冻干后具有很好的形态,37℃可以稳定保存10 d;25℃、4℃可以稳定保存4个月以上。该蛋白的冻干制品成本低、稳定性好、特异性强、灵敏度高,可用于定性定量肌红蛋白检测试剂盒的质控品。 展开更多

关键词 重组肌红蛋白 原核表达 纯化 冻干 质控品

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