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人八聚体结合蛋白4(Oct4)cDNA的克隆及其在大肠杆菌和HEK293T细胞的表达
被引量：
1
1
作者
阮碧波
符吴萸
+6 位作者
芮雯
陈海璇
周朋君
廖双叶
吴小清
王一飞
陈宏远
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期308-312,共5页
目的克隆人八聚体结合蛋白4(Oct4)c DNA,研究其在原核及真核系统中的表达。方法提取人宫颈癌He La细胞中的总RNA,经反转录PCR获得c DNA,PCR扩增Oct4 c DNA并将其分别克隆入表达载体p ET-22b(+)原核质粒和pc DNATM3.1(+)真核质粒,构建含...
目的克隆人八聚体结合蛋白4(Oct4)c DNA,研究其在原核及真核系统中的表达。方法提取人宫颈癌He La细胞中的总RNA,经反转录PCR获得c DNA,PCR扩增Oct4 c DNA并将其分别克隆入表达载体p ET-22b(+)原核质粒和pc DNATM3.1(+)真核质粒,构建含该序列的重组原核表达载体p ET-22b(+)-Oct4和真核表达载体pc DNA3.1(+)-his-Oct4。然后分别进行双酶切和测序鉴定。前者在E.coli BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白,后者以脂质体介导法转染至HEK293T细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测细菌和细胞中OCT4蛋白的表达水平。结果 PCR扩增得到约1100 bp目的 DNA片段;重组表达质粒p ET-22b(+)-Oct4和pc DNA3.1(+)-his-Oct4经双酶切鉴定和测序分析证明载体构建成功;p ET-22b(+)-Oct4经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后SDS-PAGE分析表明,目的蛋白在宿主E.coli BL21(DE3)中高效表达OCT4融合蛋白,相对分子质量(Mr)约38 000,与其理论Mr基本相符;pc DNA3.1(+)-his-Oct4转染HEK293T细胞经Western blot法检测,证实导入的Oct4成功表达。结论在大肠杆菌和HEK293T细胞成功表达OCT4蛋白。
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关键词
Oct4基因
分子克隆
原核表达
真核表达
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职称材料
二苯基庚烷A干预RAW264.7细胞炎症模型甘油磷脂的UPLC-Q/TOF MS分析
被引量：
4
2
作者
肖雪蓉
佘玉奇
+2 位作者
张国改
吴霞
冯毅凡
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第10期1225-1232,共8页
对RAW264.7细胞在不同状态(正常、炎症、给药)下的甘油磷脂成分进行分析,寻找相关的潜在病理药理标志物,阐明二苯基庚烷A在抗炎过程中对甘油磷脂代谢的影响。实验分为空白组(C)、炎症模型组(L)、二苯基庚烷A给药组(D)和布洛芬给药组(B,...
对RAW264.7细胞在不同状态(正常、炎症、给药)下的甘油磷脂成分进行分析,寻找相关的潜在病理药理标志物,阐明二苯基庚烷A在抗炎过程中对甘油磷脂代谢的影响。实验分为空白组(C)、炎症模型组(L)、二苯基庚烷A给药组(D)和布洛芬给药组(B,阳性对照药组)4组。空白组和炎症组给予新鲜培养基,给药组分别给予新配含20μg/m L二苯基庚烷A和100μg/m L布洛芬的培养基,1 h后,炎症模型组和给药组按终浓度为0.5μg/m L加入脂多糖(LPS)培养,24 h后,运用修饰后的Bligh-Dyer方法提取不同状态下RAW264.7细胞的甘油磷脂成分,并通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q/TOF MS)在正负离子模式下对甘油磷脂进行一级(MS)和二级(MS/MS)质谱分析。结合二级质谱裂解数据、元素组成、数据库比对等方法鉴定磷脂成分,再通过主成分分析法(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)以及t检验筛选潜在的甘油磷脂生物标志物。结果显示,炎症组与空白组比较得到27个潜在病理标志物,二苯基庚烷A给药组与炎症组比较得到23个潜在药理标志物,布洛芬给药组与炎症组比较得到17个潜在药理标志物,主要包括磷脂酰胆碱(PC)、溶血磷脂酰胆碱(lyso PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、溶血磷脂酰乙醇胺(lyso PE)。研究表明二苯基庚烷A在抗炎过程中引起了甘油磷脂代谢的明显变化,而这些代谢变化与炎症的发生发展密切相关。
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关键词
炎症
甘油磷脂
二苯基庚烷A
布洛芬
生物潜在标志物
超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF
MS)
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职称材料
基于核磁共振氢谱及偏最小二乘判别分析法的红木快速识别模型的建立与应用
被引量：
3
3
作者
陈碧莹
廖世莉
+1 位作者
吴霞
冯毅凡
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期134-140,共7页
以核磁共振技术为基础,采用核磁共振氢谱(1H NMR)对奥氏黄檀、巴里黄檀、交趾黄檀、刺猬紫檀、大果紫檀和檀香紫檀6类国标红木及胶漆树、染料紫檀2类混淆品的甲醇超声提取液进行检测分析,并结合聚类分析法、主成分分析法(PCA)和偏最小...
以核磁共振技术为基础,采用核磁共振氢谱(1H NMR)对奥氏黄檀、巴里黄檀、交趾黄檀、刺猬紫檀、大果紫檀和檀香紫檀6类国标红木及胶漆树、染料紫檀2类混淆品的甲醇超声提取液进行检测分析,并结合聚类分析法、主成分分析法(PCA)和偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)等模式识别方法对其进行快速鉴别。结果显示,利用PLS-DA法建立的模型前3个主成分累积贡献率达79%,能将国标红木与混淆品进行有效区分,且能大致区分不同种类的国标红木。该方法快速、高效,在红木快速鉴别分析中具有较大的潜力。
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关键词
红木
核磁共振
模式识别
偏最小二乘判别分析
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职称材料
题名
人八聚体结合蛋白4(Oct4)cDNA的克隆及其在大肠杆菌和HEK293T细胞的表达
被引量：
1
1
作者
阮碧波
符吴萸
芮雯
陈海璇
周朋君
廖双叶
吴小清
王一飞
陈宏远
机构
广东
药科
大学
基础学院病原生物学与免疫学系
广东药科大学中心实验室
暨南
大学
生物医药研究开发基地
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期308-312,共5页
基金
广东省海洋渔业局项目(GD2012-D01-002,A1201301C06)
广东省科技计划项目(2015A020211036)
广州市科技计划(2014J4100058)
文摘
目的克隆人八聚体结合蛋白4(Oct4)c DNA,研究其在原核及真核系统中的表达。方法提取人宫颈癌He La细胞中的总RNA,经反转录PCR获得c DNA,PCR扩增Oct4 c DNA并将其分别克隆入表达载体p ET-22b(+)原核质粒和pc DNATM3.1(+)真核质粒,构建含该序列的重组原核表达载体p ET-22b(+)-Oct4和真核表达载体pc DNA3.1(+)-his-Oct4。然后分别进行双酶切和测序鉴定。前者在E.coli BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白,后者以脂质体介导法转染至HEK293T细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测细菌和细胞中OCT4蛋白的表达水平。结果 PCR扩增得到约1100 bp目的 DNA片段;重组表达质粒p ET-22b(+)-Oct4和pc DNA3.1(+)-his-Oct4经双酶切鉴定和测序分析证明载体构建成功;p ET-22b(+)-Oct4经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后SDS-PAGE分析表明,目的蛋白在宿主E.coli BL21(DE3)中高效表达OCT4融合蛋白,相对分子质量(Mr)约38 000,与其理论Mr基本相符;pc DNA3.1(+)-his-Oct4转染HEK293T细胞经Western blot法检测,证实导入的Oct4成功表达。结论在大肠杆菌和HEK293T细胞成功表达OCT4蛋白。
关键词
Oct4基因
分子克隆
原核表达
真核表达
Keywords
Oct4 gene
molecular cloning
prokaryotic expression
eukaryotic expression
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
二苯基庚烷A干预RAW264.7细胞炎症模型甘油磷脂的UPLC-Q/TOF MS分析
被引量：
4
2
作者
肖雪蓉
佘玉奇
张国改
吴霞
冯毅凡
机构
广东药科大学中心实验室
出处
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第10期1225-1232,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(21275036
81202429)
文摘
对RAW264.7细胞在不同状态(正常、炎症、给药)下的甘油磷脂成分进行分析,寻找相关的潜在病理药理标志物,阐明二苯基庚烷A在抗炎过程中对甘油磷脂代谢的影响。实验分为空白组(C)、炎症模型组(L)、二苯基庚烷A给药组(D)和布洛芬给药组(B,阳性对照药组)4组。空白组和炎症组给予新鲜培养基,给药组分别给予新配含20μg/m L二苯基庚烷A和100μg/m L布洛芬的培养基,1 h后,炎症模型组和给药组按终浓度为0.5μg/m L加入脂多糖(LPS)培养,24 h后,运用修饰后的Bligh-Dyer方法提取不同状态下RAW264.7细胞的甘油磷脂成分,并通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q/TOF MS)在正负离子模式下对甘油磷脂进行一级(MS)和二级(MS/MS)质谱分析。结合二级质谱裂解数据、元素组成、数据库比对等方法鉴定磷脂成分,再通过主成分分析法(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)以及t检验筛选潜在的甘油磷脂生物标志物。结果显示,炎症组与空白组比较得到27个潜在病理标志物,二苯基庚烷A给药组与炎症组比较得到23个潜在药理标志物,布洛芬给药组与炎症组比较得到17个潜在药理标志物,主要包括磷脂酰胆碱(PC)、溶血磷脂酰胆碱(lyso PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、溶血磷脂酰乙醇胺(lyso PE)。研究表明二苯基庚烷A在抗炎过程中引起了甘油磷脂代谢的明显变化,而这些代谢变化与炎症的发生发展密切相关。
关键词
炎症
甘油磷脂
二苯基庚烷A
布洛芬
生物潜在标志物
超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF
MS)
Keywords
inflammation
glycerophospholipids
diphenylheptane A
ibuprofen
biomakers
ultraperformance liquid chromatography tandem quadrupole time -of- flight mass spectrometry（ UPLC -Q/TOF MS）
分类号
O657.63 [理学—分析化学]
Q54 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
基于核磁共振氢谱及偏最小二乘判别分析法的红木快速识别模型的建立与应用
被引量：
3
3
作者
陈碧莹
廖世莉
吴霞
冯毅凡
机构
广东药科大学中心实验室
出处
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期134-140,共7页
基金
广东省林业厅2016年资助项目(2130299)
文摘
以核磁共振技术为基础,采用核磁共振氢谱(1H NMR)对奥氏黄檀、巴里黄檀、交趾黄檀、刺猬紫檀、大果紫檀和檀香紫檀6类国标红木及胶漆树、染料紫檀2类混淆品的甲醇超声提取液进行检测分析,并结合聚类分析法、主成分分析法(PCA)和偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)等模式识别方法对其进行快速鉴别。结果显示,利用PLS-DA法建立的模型前3个主成分累积贡献率达79%,能将国标红木与混淆品进行有效区分,且能大致区分不同种类的国标红木。该方法快速、高效,在红木快速鉴别分析中具有较大的潜力。
关键词
红木
核磁共振
模式识别
偏最小二乘判别分析
Keywords
sandalwood
nuclear magnetic resonance(NMR)
pattern recognition
partial least squares-discriminant analysis(PLS-DA)
分类号
O657.2 [理学—分析化学]
TS612.7 [轻工技术与工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人八聚体结合蛋白4(Oct4)cDNA的克隆及其在大肠杆菌和HEK293T细胞的表达
阮碧波
符吴萸
芮雯
陈海璇
周朋君
廖双叶
吴小清
王一飞
陈宏远
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
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职称材料
2
二苯基庚烷A干预RAW264.7细胞炎症模型甘油磷脂的UPLC-Q/TOF MS分析
肖雪蓉
佘玉奇
张国改
吴霞
冯毅凡
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
4
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下载PDF
职称材料
3
基于核磁共振氢谱及偏最小二乘判别分析法的红木快速识别模型的建立与应用
陈碧莹
廖世莉
吴霞
冯毅凡
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
3
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职称材料
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