丹参酮ⅡA定向诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究 被引量：36

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作者 夏文杰 项鹏 +5 位作者 张丽蓉 陈振光 余伟华 张秀明 李艳 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期865-869,T001,共6页

目的 :丹参酮ⅡA体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。方法 :采用Fi coll-Paque液离心和贴壁法分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,FGF - 2对MSC增殖和分化的影响。采用含丹参酮ⅡA的无血清... 目的 :丹参酮ⅡA体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。方法 :采用Fi coll-Paque液离心和贴壁法分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,FGF - 2对MSC增殖和分化的影响。采用含丹参酮ⅡA的无血清达乐伯克改良必需基本培养基 (DMEM)诱导MSC分化为神经元样细胞 ,免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF -M)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、巢蛋白 (nestin)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 0 5× 10 6,15代可获得 ( 2 - 3)× 10 12 个细胞 ,流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD4 4、CD90、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD4 5、CD80、CD86为阴性。FGF - 2促进hMSC生长 ,并且对MSC的分化能力基本没有影响。丹参酮ⅡA诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF -M、nestin表达阳性 ,GFAP阴性。结论 展开更多

关键词 骨髓 间质干细胞 神经元 丹参酮ⅡA 成纤维细胞生长因子 细胞分化

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体外定向诱导人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的研究 被引量：23

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作者 张丽蓉 夏文杰 +4 位作者 项鹏 陈振光 张秀明 李艳 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期745-748,I001,共5页

目的 :建立体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为成骨细胞的模型。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达 ,应用地塞米松、β -甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为... 目的 :建立体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为成骨细胞的模型。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达 ,应用地塞米松、β -甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞 ,检测碱性磷酸酶 (AP)活性、钙沉积、骨桥蛋白的表达鉴定成骨细胞 ,比较P3和P10代MSC成骨分化的能力。结果 :MSC在体外扩增原代可获得 (5 - 6 )× 10 5个细胞 ,10代可获得 2× 10 10个细胞。流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD4 4、CD5 9、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD11a、CD14、CD33、CD34、CD4 5、CD38、CD80、CD86、CD117表达为阴性。加入成骨诱导剂 ,细胞形态发生变化 ,AP活性增强 ,骨桥蛋白表达阳性 ,钙沉积逐渐出现。P3和P10代的MSC均有良好的分化为成骨细胞的能力。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可分化为成骨细胞。 展开更多

关键词 体外定向诱导 骨髓间质干细胞 成骨细胞 骨组织工程

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胞内cAMP浓度的增加可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 被引量：8

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作者 项鹏 夏文杰 +4 位作者 张丽蓉 陈振光 张秀明 李艳 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1324-1327,I001,共5页

目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX... 目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX)的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 5× 1 0 5,1 0代可获得 2× 1 0 1 0 个细胞。加入Forskolin、IBMX以及两者联用诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ,呈典型神经元样形态 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF -M表达阳性 ,GFAP阴性。结论 展开更多

关键词 胞内cAMP浓度 骨髓间质干细胞 神经元样细胞 腺苷环-磷酸 福司柯林 诱导分化

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四逆汤抗氧化应激性损伤保护心肌细胞机制的探讨 被引量：8

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作者 聂咏梅 吴伟康 +3 位作者 刘颖 段新芬 赵明奇 赵丹阳 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期697-702,共6页

目的:观察四逆汤在乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤过程中的保护效应,探讨四逆汤抗氧化应激性损伤保护心肌细胞的机制。方法:采用H2O2诱导损伤制备SD乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含不同浓度的四逆汤含药血清DMEM培养基培养细胞,... 目的:观察四逆汤在乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤过程中的保护效应,探讨四逆汤抗氧化应激性损伤保护心肌细胞的机制。方法:采用H2O2诱导损伤制备SD乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含不同浓度的四逆汤含药血清DMEM培养基培养细胞,应用流式细胞仪检测培养细胞的存活率,用1mmol/LH2O2处理心肌细胞,分别在处理0.5h,1h,2h,4h和8h后检测细胞的凋亡率和坏死率,同时检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)和细胞内丙二醛(MDA);对H2O2处理不同时间的心肌细胞线粒体膜电位进行检测。结果:采用含15四逆汤含药血清的DMEM培养基是心肌细胞生长的合适浓度;四逆汤含药血清能降低细胞培养液中的LDH活性以及细胞内MDA的含量,减少细胞的凋亡率和坏死率;降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度。结论:四逆汤对于H2O2造成的心肌细胞损伤具有保护作用,这种作用与保护线粒体膜电位的稳定有关。 展开更多

关键词 四逆汤 心肌细胞 凋亡 线粒体膜电位

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黄芩苷对小鼠巨噬细胞环加氧酶-2和前列腺素E_2表达的影响 被引量：6

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作者 李岩 李明 +2 位作者 邝枣园 张韧 王宏敏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第24期4129-4131,共3页

目的:研究黄芩苷对小鼠巨噬细胞环加氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达及其主要产物前列腺素E_2(prostaglandins E_2,PGE_2)生成的影响。方法:培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,加入不同浓度的黄芩苷(终浓度10、50、100μmol/L)进行预干预,... 目的:研究黄芩苷对小鼠巨噬细胞环加氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达及其主要产物前列腺素E_2(prostaglandins E_2,PGE_2)生成的影响。方法:培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,加入不同浓度的黄芩苷(终浓度10、50、100μmol/L)进行预干预,1 h后再加入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,终浓度1μg/mL)刺激,分正常对照组、LPS组、黄芩苷组、黄芩苷加LPS组。取培养24 h细胞上清,用ELISA法检测PGE_2生成量;取培养8 h和24 h细胞,分别提取细胞总RNA和总蛋白,用RT-PCR法和Western Blot法检测黄芩苷对COX-2 mRNn A水平和蛋白水平表达的影响。结果:LPS可以显著诱导RAW 264.7细胞COX-2表达和PGE_2的生成,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);黄芩苷预干预可以抑制LPS诱导的COX-2基因转录和蛋白表达,下调PGE_2的生成,与LPS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芩苷可通过降低LPS诱导的巨噬细胞COX-2表达和PGE_2生成,发挥抗炎作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。 展开更多

关键词 黄芩甙 巨噬细胞 环加氧酶-2 前列腺素E2 内毒素

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芹菜素对人急性髓性白血病细胞化疗敏感性的增强作用 被引量：8

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作者 胡太平 陈伟强 曹建国 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第3期515-517,共3页

目的观察芹菜素(API)能否增强人急性髓性白血病(HL-60)细胞系细胞对顺铂(DDP)的化疗敏感性。方法取对数生长期的HL-60细胞,分为API组、DDP组、API+DDP组与空白对照组。API组加入API,终浓度为1.0μmol·L-1,DDP组加入DDP,终浓度分别... 目的观察芹菜素(API)能否增强人急性髓性白血病(HL-60)细胞系细胞对顺铂(DDP)的化疗敏感性。方法取对数生长期的HL-60细胞,分为API组、DDP组、API+DDP组与空白对照组。API组加入API,终浓度为1.0μmol·L-1,DDP组加入DDP,终浓度分别为1.0mg·L-1,2.0mg·L-1,4.0mg·L-1,API+DDP组API终浓度为1.0μmol·L-1,DDP分别为1.0mg·L-1,2.0mg·L-1和4.0mg·L-1,空白对照组仅加入等量完全培养基。采用MTT比色法测定细胞生长抑制率。另取对数生长期的HL-60细胞,分组同上,采用流式细胞术测定细胞凋亡率。另取对数生长期的HL-60细胞,分为3组,前2组加入1.0μmol·L-1API,分别培养24h,48h,对照组仅加入等量完全培养基,采用间接免疫荧光标记流式细胞术观察API对HL-60细胞NF-κB和Bcl-2表达的影响。结果1.0μmol·L-1API无细胞毒作用,不能有效诱导HL-60细胞的凋亡,但它与不同浓度的DDP合用,可增强DDP对HL-60细胞增殖的抑制作用,并使细胞凋亡率明显增加。1.0μmol·L-1API可抑制HL-60细胞NF-κB和Bcl-2的表达(P均<0.01)。结论API可增强DDP对HL-60细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用,其机制可能与下调NF-κB和Bcl-2的表达有关。 展开更多

关键词 人急性髓性白血病 芹菜素 顺铂 凋亡

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白细胞介素7基因转染口腔癌细胞株的免疫调节效应的研究 被引量：2

7

作者 潘德顺 陈伟强 陈宏远 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2010年第3期247-250,共4页

目的:探讨IL-7基因转染人舌鳞癌Tca8113细胞株的免疫调节效应。方法:将已构建的原核/真核表达载体pBK-CMV/IL-7转染到癌细胞株中,采用MTT法检测转染前后肿瘤细胞培养上清对鼠脾细胞增殖的影响;ELISA法检测细胞培养上清转移生长因子β1(T... 目的:探讨IL-7基因转染人舌鳞癌Tca8113细胞株的免疫调节效应。方法:将已构建的原核/真核表达载体pBK-CMV/IL-7转染到癌细胞株中,采用MTT法检测转染前后肿瘤细胞培养上清对鼠脾细胞增殖的影响;ELISA法检测细胞培养上清转移生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)和IL-10的浓度。将pPK-CMV/IL-7癌细胞株移植于小鼠腹腔,观察肿瘤细胞的成瘤性;并采用MTT法检测其NK杀伤活性。结果:IL-7基因转染癌细胞株的培养上清对鼠脾细胞的增殖抑制作用与对照组比较显著下降(P<0.05),并且IL-7基因转染的肿瘤细胞产生TGF-β1、VEGF和IL-10三种免疫抑制因子明显降低(P<0.05);IL-7基因转染组鼠腹腔瘤结节明显小于对照组(P<0.05);NK的杀伤活性与对照组比较,具统计学差异(P<0.05)。结论:IL-7基因转染人舌鳞癌细胞株具有抑瘤作用,其机理可能是通过降低肿瘤细胞产生免疫抑制因子,进而促进淋巴细胞增殖,提高NK的杀伤活性。 展开更多

关键词 IL-7 免疫调节 口腔癌细胞株

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CpG ODN通过激活NF-κB诱导人肺腺上皮细胞β防御素-2的表达 被引量：1

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作者 李明 余雪松 +2 位作者 马鸿雁 李岩 简玲敏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第16期2883-2885,共3页

目的:研究含CpG序列的寡核苷酸(unmethylated CpG motif containing oligodeoxynucleotide,CpG ODN)对人肺腺上皮细胞β防御素-2(humanβ-defensin2,hBD-2)表达的影响及其作用途径。方法:培养人肺腺上皮细胞A549,用不同浓度的CpG ODN进... 目的:研究含CpG序列的寡核苷酸(unmethylated CpG motif containing oligodeoxynucleotide,CpG ODN)对人肺腺上皮细胞β防御素-2(humanβ-defensin2,hBD-2)表达的影响及其作用途径。方法:培养人肺腺上皮细胞A549,用不同浓度的CpG ODN进行干预。用RT-PCR法和Western Blot法检测刺激后A549细胞hBD-2mRNA和蛋白表达变化及细胞核内NF-κB p65蛋白含量的变化。结果:CpG ODN刺激可以促进A549细胞核内NF-κB p65含量增加,活化NF-κB途径,从而诱导hBD-2的表达,与对照组比较P<0.05;用特异性阻断剂阻断NF-κB活化可以部分抑制CpG ODN的诱导作用。结论:CpG ODN可诱导hBD-2在呼吸道上皮细胞的表达,增加机体对外界微生物的抵抗能力,激活NF-κB信号途径可能是其作用机制之一。 展开更多

关键词 Β防御素 CPG ODN 肺腺上皮细胞 核因子κB

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苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株p21和survivin基因表达的影响 被引量：2

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作者 潘德顺 陈伟强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期178-181,共4页

目的研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的生长、凋亡及其对p21和survivin分子表达的影响。方法应用MTT法检测苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的抑制作用,采用流式细胞仪研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋... 目的研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的生长、凋亡及其对p21和survivin分子表达的影响。方法应用MTT法检测苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的抑制作用,采用流式细胞仪研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用Western blot和RT-PCR检测p21和survivin基因的转录和表达。结果实验表明苯丁酸钠对Tca8113细胞株增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示苯丁酸钠诱导Tca8113细胞株G1期阻滞和细胞凋亡;苯丁酸钠能使p21的mRNA及蛋白质表达升高,同时survivin的mRNA及蛋白质表达下降。结论苯丁酸钠通过刺激p21表达增加和抑制survivin的表达,从而抑制Tca8113细胞株增殖,诱导细胞G1期阻滞和细胞凋亡;并且p21mRNA水平的上升和survivin mRNA水平的下降变化呈负相关(rs=-0.548,P<0.01),二者蛋白表达的变化亦如此(rs=-0.514,P<0.01)。 展开更多

关键词 苯丁酸钠 P21 SURVIVIN TCA8113细胞株 凋亡 基因表达

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急性心肌缺血大鼠中性粒细胞L-选择素及内皮细胞P-选择素的变化 被引量：2

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作者 刘颖 陈伟强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期5-5,13,共2页

目的 :为进一步探讨急性心肌缺血心肌损伤的发生机制 ,观察在急性心肌缺血时 ,分别表达在血中性粒细胞表面的L -选择素及心肌微血管内皮细胞表面的P -选择素的变化。方法 :采用大鼠腹腔注射垂体后叶素诱导急性心肌缺血模型 ,利用免疫组... 目的 :为进一步探讨急性心肌缺血心肌损伤的发生机制 ,观察在急性心肌缺血时 ,分别表达在血中性粒细胞表面的L -选择素及心肌微血管内皮细胞表面的P -选择素的变化。方法 :采用大鼠腹腔注射垂体后叶素诱导急性心肌缺血模型 ,利用免疫组织化学染色法检测L -选择素及P -选择素的表达。结果 :急性心肌缺血大鼠L-选择素及P -选择素表达显著高于正常对照组 (P <0 0 1 ) ,并伴随心肌内中性粒细胞浸润数的明显增多 (P <0 0 1 )。结论 :L -选择素及P 展开更多

关键词 急性心肌缺血 大鼠 中性粒细胞 L-选择素 内皮细胞 P-选择素

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CD80分子共刺激T细胞联合苯乙酸钠抗肿瘤的实验研究

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作者 潘德顺 陈伟强 王迪浔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期563-564,共2页

目的 :研究分化诱导剂苯乙酸钠处理肝癌细胞后 ,其对CD80 (B7- 1)分子活化的T细胞杀伤敏感性的变化。方法 :将CD80共刺激的人T淋巴细胞与苯乙酸钠处理的肝癌细胞共同培养 ,用噻唑蓝法 (MTT)检测T细胞粘附肿瘤细胞和杀伤肿瘤细胞活性 ,... 目的 :研究分化诱导剂苯乙酸钠处理肝癌细胞后 ,其对CD80 (B7- 1)分子活化的T细胞杀伤敏感性的变化。方法 :将CD80共刺激的人T淋巴细胞与苯乙酸钠处理的肝癌细胞共同培养 ,用噻唑蓝法 (MTT)检测T细胞粘附肿瘤细胞和杀伤肿瘤细胞活性 ,取上清测定肿瘤坏死因子α(TNF -α)。结果 :苯乙酸钠处理肝癌细胞BEL - 740 2和SMMC - 772 1后 ,T细胞对其杀伤敏感性明显增加 (P <0 0 1) ,明显增加T细胞与肿瘤细胞之间的粘附性 (P <0 0 5 )和T细胞产生TNF -α的能力 (P <0 0 5 )。结论 :苯乙酸钠处理肝癌细胞能增加T细胞对其杀伤活性。 展开更多

关键词 肝细胞瘤 T细胞 肿瘤坏死因子 CD80分子

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