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白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因cDNA片段的克隆与鉴定 被引量:10
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作者 周国理 黄炯烈 +3 位作者 姚其方 詹希美 葛春喜 王玲 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第1期1-5,共5页
目的】获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因家族中的一个cDNA片段。【方法】根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E同源区氨基酸序列,设计1对简并引物,进行反转录PCR,获得一大小与设计的细胞色素P450基因片段相符合的cDNA片段。将该... 目的】获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因家族中的一个cDNA片段。【方法】根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E同源区氨基酸序列,设计1对简并引物,进行反转录PCR,获得一大小与设计的细胞色素P450基因片段相符合的cDNA片段。将该片断与pUC19质粒重组,并克隆至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用PC/GENE软件绘制系统树。【结果】获得了1条长240bp的核酸序列;所得序列与昆虫CYP6家族的同源性在36.3%~46.8%之间,但CYP6D1除外,其同源性为29.1%;而与CYP4家族同源性较低,与CYP4C1、CYP4D1、CYP4D2同源性分别为333%、329%和299%;与哺乳动物CYP3A亚家族同源性亦较高;所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。 展开更多
关键词 伊蚊属 CYP6 杀虫剂 抗药性 基因扩增
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我国华南间日疟原虫裂殖子表面蛋白1等位基因分型和序列分析 被引量:6
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作者 江钢锋 李娟兰 +1 位作者 吴少廷 王善青 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期57-60,共4页
目的 了解我国间日疟原虫MSP1(PvMSP1)的等位基因类型和序列的多态性。方法 用特异的引物通过套式PCR方法体外扩增包含PvMSP1的ICB5与ICB6之间的基因片段 ,并对部分扩增产物进行序列测定和分析。结果  2 7份间日疟原虫患者血样中 ,有... 目的 了解我国间日疟原虫MSP1(PvMSP1)的等位基因类型和序列的多态性。方法 用特异的引物通过套式PCR方法体外扩增包含PvMSP1的ICB5与ICB6之间的基因片段 ,并对部分扩增产物进行序列测定和分析。结果  2 7份间日疟原虫患者血样中 ,有 16份 (5 9 9% )扩增得到Belem型基因产物 ,2 5 (92 6 % )份扩增出Sal- 1型基因产物 ;两种不同等位基因型虫株的混合感染率为 5 1 9%。序列分析结果发现一个以前未见报告的基因内重组类型。结论 我国间日疟原虫虫株存在两种PvMSP1等位基因型 ,Sal- 1型可能是主导型 ; 展开更多
关键词 间日疟原虫 裂殖子表面蛋白1 基因分型 序列分析 中国
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恶性疟原虫海南分离株pfmdr1基因与氯喹抗性的相关性分析 被引量:3
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作者 于丹 江钢锋 陈沛泉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1143-1146,共4页
目的了解海南省恶性疟原虫pfmdr1基因同氯喹抗性的关系。方法采用套式PCR技术特异性扩增pfmdr1基因含有编码第86位、1042位和1246位氨基酸的基因片段,并对扩增产物进行RFLP分析。结果42个样本中,pfmdr1第86位氨基酸均未发生突变,即86位... 目的了解海南省恶性疟原虫pfmdr1基因同氯喹抗性的关系。方法采用套式PCR技术特异性扩增pfmdr1基因含有编码第86位、1042位和1246位氨基酸的基因片段,并对扩增产物进行RFLP分析。结果42个样本中,pfmdr1第86位氨基酸均未发生突变,即86位氨基酸是野生型的Asn,而不是突变型的Tyr。第1246位氨基酸发生突变的样本共有7个,全部为抗性虫株。第1042位点PCR扩增结果阳性的37个样本中突变的样本共有10个,其中9个为抗性虫株,一个为敏感虫株。结论我国海南省恶性疟原虫氯喹抗性产生与pfmdr186位氨基酸基因多态性无关,但第1042和1246位氨基酸的突变更易在抗性虫株中检出。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 pfmdr1基因 氯喹抗性
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恶性疟原虫免疫抑制多次部分换血猕猴模型的建立及其在抗疟药物试验中的初步应用
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作者 吴军 洪佳冬 +2 位作者 黄建成 何建国 江静波 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期36-38,共3页
目的 建立恶性疟原虫免疫抑制多次部分换血猕猴模型。方法 应用免疫抑制剂抑制动物体内的溶血反应 ,采用多次部分换血的方法。结果 在此模型中 ,恶性疟原虫分别在猕猴体内存活 2 1天以上 ;最高感染率分别为 8 6 %、10 6 %和 6 4%... 目的 建立恶性疟原虫免疫抑制多次部分换血猕猴模型。方法 应用免疫抑制剂抑制动物体内的溶血反应 ,采用多次部分换血的方法。结果 在此模型中 ,恶性疟原虫分别在猕猴体内存活 2 1天以上 ;最高感染率分别为 8 6 %、10 6 %和 6 4%。在应用此模型进行的抗疟药杀虫试验中 ,猴服用蒿甲醚 4h后 ,原虫感染率由 4 6 %迅速下降到 0 5 % ;2 4h后 ,原虫消失。结论 恶性疟原虫可以在免疫抑制的多次部分换血猕猴模型中较好地生长发育。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 动物模型 换血 抗疟药
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几种不同方法制备恶性疟原虫基因组DNA的比较
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作者 江钢锋 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第5期52-53,共2页
目的 比较3 种不同的基因组 D N A 提取方法制备恶性疟原虫基因组 D N A 的效果。方法 分别采用酚- 氯仿- 异戊醇抽提法、 Wizard 基因组 D N A 纯化试剂盒和磷酸钠盐溶液, 分离提取恶性疟原虫基因组 D N A,... 目的 比较3 种不同的基因组 D N A 提取方法制备恶性疟原虫基因组 D N A 的效果。方法 分别采用酚- 氯仿- 异戊醇抽提法、 Wizard 基因组 D N A 纯化试剂盒和磷酸钠盐溶液, 分离提取恶性疟原虫基因组 D N A, 通过 D N A 含量测定和 P C R 鉴定, 比较它们的提取效果。结果 前两种方法制备恶性疟原虫基因组 D N A 的效果相仿, 纯度较高; 第三种方法最为简便, 所得的 D N A 含量明显高于前两种方法, 但其纯度较低, 蛋白质含量最高。结论 3 种方法各有优缺点, 第3 种方法简便、快捷、经济, 更有实用价值。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 基因组 DNA 分离 提纯
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白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株基因组中CYP6基因片段的分离与鉴定 被引量:4
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作者 周国理 黄炯烈 +3 位作者 姚其方 詹希美 葛春喜 王玲中 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第1期22-25,共4页
目的 获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6 基因家族中某个成员的一个基因片段。方法 根据家蝇CYP6A1、CYP6D1 以及致倦库蚊CYP6E1 同源区氨基酸序列,设计1 对简并引物,进行PCR,获得一与设计的细胞色素P4... 目的 获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6 基因家族中某个成员的一个基因片段。方法 根据家蝇CYP6A1、CYP6D1 以及致倦库蚊CYP6E1 同源区氨基酸序列,设计1 对简并引物,进行PCR,获得一与设计的细胞色素P450 基因片段大小相符合的基因片段。将该片段与pUC19 质粒重组,并克隆至JM109 大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用PC/GENE软件绘制系统树。结果 获得了1 条长248bp 的核酸序列;所得序列与昆虫CYP6 家族的同源性在34-2 % ~44-3% 之间,而与CYP4 家族同源性较低,与CYP4C1 、CYP4D1、CYP4D2 同源性分别为22-1% 、29-5 % 和27-6 % ;所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。结论 该序列为CYP6 家族中某一成员的基因片段。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 CYP6 抗药性 同源性 系统树
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