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抗克伦特罗单链抗体基因工程菌株发酵条件的研究被引量：1: 1; 作者王弘梁艳 +4 位作者刘细霞杨金易雷红涛沈玉栋孙远明《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期175-177,共3页; 重组大肠杆菌BL21携带抗克伦特罗单链抗体(scFv)基因,研究了不同培养基、诱导时期、诱导时间、初始pH以及装液量对重组抗体表达量的影响,并对重组质粒稳定性进行研究。结果表明,在初始pH为7.2、装液量为25mL/250mL的LB培养基中,30℃培... 展开更多; 关键词克伦特罗单链抗体工程菌培养条件; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于定点突变的抗克百威单链抗体的亲和力成熟被引量：4: 2; 作者邓龙肖治理 +6 位作者董洁娴王弘杨武英谢曦杨金易沈玉栋孙远明《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2486-2491,共6页; 为获得亲和力更高的抗克百威(CBF)单链抗体(scFv),从抗CBF scFv氨基酸序列出发,通过同源模建获得抗体模型,找出抗体中的活性口袋区域,进而将小分子药物与抗体进行分子对接,发现疏水作用和氢键对于抗体亲和力具有重要作用.进一步对口袋... 展开更多; 关键词克百威单链抗体分子对接定点突变亲和力成熟; 在线阅读下载PDF 职称材料

高效液相色谱-串联质谱法测定动物肌肉组织中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物残留被引量：5: 3; 作者邓龙郭新东 +3 位作者何强杨群华沈玉栋王弘《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第4期209-213,共5页; 建立动物组织中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物(共16种)残留的高效液相色谱-串联质谱分析方法。样品经乙腈提取、浓缩、净化,液相色谱串联质谱测定,内标法定量。16种杀虫剂在1.0～100μg/L范围内线性关系良好(r>0.9959);方法定量限为... 展开更多; 关键词氨基甲酸酯液相色谱串联质谱动物肌肉组织; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗克伦特罗单链抗体可溶性表达及特性鉴定被引量：4: 4; 作者王弘潘科 +5 位作者杨金易张宏斌王捷武婕雷红涛孙远明《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第12期332-335,共4页; 目的:表达抗克伦特罗(CBL)可溶性单链抗体(scFv)并进行抗原结合活性鉴定。方法:利用呈现scFv的重组噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导可溶性scFv表达。渗透休克法提取菌体细胞周质腔中scFv。经SDS-PAGE、Western-Blotting以及间接ELIS... 展开更多; 关键词克伦特罗单链抗体可溶性表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗克伦特罗单链抗体基因构建及蛋白结构模拟被引量：2: 5; 作者王弘刘细霞 +3 位作者潘科雷红涛沈玉栋孙远明《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第13期227-231,共5页; 目的:构建抗克伦特罗单链抗体(scFv)基因cbl,进行蛋白质结构模拟并对其理化特性进行分析。方法:采用重叠延伸PCR方法,以能特异性分泌抗克伦特罗mAb的杂交瘤细胞株5D1为原料,构建抗克伦特罗scFv基因cbl,进行测序,采用生物信息软件对氨基... 展开更多; 关键词克伦特罗单链抗体结构预测; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建: 6; 作者罗翠红王弘 +4 位作者刘细霞沈玉栋孙远明黄佳佳张宏斌《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第19期283-287,共5页; 目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延... 展开更多; 关键词抗呋喃它酮代谢物的衍生物单链抗体噬菌体展示序列分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗克伦特罗单链抗体基因工程菌株发酵条件的研究被引量：1: 1; 作者王弘梁艳刘细霞杨金易雷红涛沈玉栋孙远明; 机构广东省食品质量安全重点实验室; 出处《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期175-177,共3页; 基金 "863"计划(2007AA10Z437) 国家自然科学基金(30871755 +3 种基金 30400354) 广东省自然科学基金(06025825) 粤港关键领域重点突破招标项目(2006A25005002); 文摘重组大肠杆菌BL21携带抗克伦特罗单链抗体(scFv)基因,研究了不同培养基、诱导时期、诱导时间、初始pH以及装液量对重组抗体表达量的影响,并对重组质粒稳定性进行研究。结果表明,在初始pH为7.2、装液量为25mL/250mL的LB培养基中,30℃培养菌体生长至A600nm为0.8时,42℃诱导表达6h,scFv表达量可达33.7%。工程菌在无选择压力条件下连续传代120代,保持稳定,100%的菌株携带重组质粒且经诱导后均有重组抗体的表达。; 关键词克伦特罗单链抗体工程菌培养条件; Keywords clentuberol single chain Fv engineered strain culture conditions; 分类号 TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于定点突变的抗克百威单链抗体的亲和力成熟被引量：4: 2; 作者邓龙肖治理董洁娴王弘杨武英谢曦杨金易沈玉栋孙远明; 机构广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品质量与安全研究所; 出处《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2486-2491,共6页; 基金国家自然科学基金(批准号:31271866) 广东省教育部产学研结合项目(批准号:2010A090200084 2011A090200029)资助; 文摘为获得亲和力更高的抗克百威(CBF)单链抗体(scFv),从抗CBF scFv氨基酸序列出发,通过同源模建获得抗体模型,找出抗体中的活性口袋区域,进而将小分子药物与抗体进行分子对接,发现疏水作用和氢键对于抗体亲和力具有重要作用.进一步对口袋内亲水氨基酸残基HArg40和LHis38进行模拟替换,再进行分子对接分析,发现当以亮氨酸为突变氨基酸时,对接评分最高.在此基础上,通过构建突变scFv基因及可溶性表达,采用ELISA法对进化后的单链抗体(evoscFv)进行了鉴定.结果表明,evoscFv对CBF的IC50值为18.11μg/L,低于野生型抗体的27.25μg/L,亲和解离常数Kd为4.06×10-8mol/L,相对亲和力比野生型scFv提高了2.23倍,说明通过分子对接分析及对抗体活性口袋中氨基酸残基进行替换,获得了一个亲和力更高的突变体抗体.; 关键词克百威单链抗体分子对接定点突变亲和力成熟; Keywords Carbofuran Single-chain antibody Molecular docking Site-directed mutagenesis Affinity maturation; 分类号 O629 [理学—有机化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名高效液相色谱-串联质谱法测定动物肌肉组织中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物残留被引量：5: 3; 作者邓龙郭新东何强杨群华沈玉栋王弘; 机构广东省食品质量安全重点实验室广州市质量监督检测研究院广东省农药检定所; 出处《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第4期209-213,共5页; 文摘建立动物组织中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物(共16种)残留的高效液相色谱-串联质谱分析方法。样品经乙腈提取、浓缩、净化,液相色谱串联质谱测定,内标法定量。16种杀虫剂在1.0～100μg/L范围内线性关系良好(r>0.9959);方法定量限为0.5～2.5μg/kg;样品添加5.0、10.0、20μg/kg时,加标回收率为71.4%～105.5%;相对标准偏差为3.2%～13.7%。该方法具有简便快捷、灵敏度高的特点,适用于动物肌肉中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物残留量的检测。; 关键词氨基甲酸酯液相色谱串联质谱动物肌肉组织; Keywords carbamate high performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization tandem massspectrometry （HPLC-ESI/MS/MS） animal muscle; 分类号 TS207.3 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗克伦特罗单链抗体可溶性表达及特性鉴定被引量：4: 4; 作者王弘潘科杨金易张宏斌王捷武婕雷红涛孙远明; 机构广东省教育厅食品质量安全重点实验室华南农业大学食品质量与安全研究所广州军区广州总医院医学试验科; 出处《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第12期332-335,共4页; 基金国家自然科学基金项目(30400354 20477012) +1 种基金广东省自然科学基金项目(04300502); 文摘目的:表达抗克伦特罗(CBL)可溶性单链抗体(scFv)并进行抗原结合活性鉴定。方法:利用呈现scFv的重组噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导可溶性scFv表达。渗透休克法提取菌体细胞周质腔中scFv。经SDS-PAGE、Western-Blotting以及间接ELISA法分析检测可溶性scFv的表达,并采用间接竞争ELISA法鉴定scFv的抗原结合活性。结果:细菌培养上清及周质腔中均有抗CBL可溶性scFv表达,其分子量约为29kD;上清液及周质腔中scFv效价分别为1:80,1:1600,能够被CBL竞争性抑制,IC50分别为0.78、0.95ng/ml。结论:可溶性抗CBLscFv在大肠杆菌HB2151中获得成功表达,表达的scFv与CBL具有很好的结合活性,可用于进一步建立CBL相应的免疫学检测方法。; 关键词克伦特罗单链抗体可溶性表达; Keywords clenbuteroh single chain Fv soluble expression; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗克伦特罗单链抗体基因构建及蛋白结构模拟被引量：2: 5; 作者王弘刘细霞潘科雷红涛沈玉栋孙远明; 机构广东省食品质量安全重点实验室、华南农业大学食品质量与安全研究所; 出处《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第13期227-231,共5页; 基金国家自然科学基金项目(30871755 30400354) +1 种基金广东省自然科学基金项目(06025825); 文摘目的:构建抗克伦特罗单链抗体(scFv)基因cbl,进行蛋白质结构模拟并对其理化特性进行分析。方法:采用重叠延伸PCR方法,以能特异性分泌抗克伦特罗mAb的杂交瘤细胞株5D1为原料,构建抗克伦特罗scFv基因cbl,进行测序,采用生物信息软件对氨基酸序列推导并进行结构预测,同时对理化性质进行分析。结果:抗克伦特罗scFv基因cbl全长720bp,对应225个氨基酸,单链抗体分子量约为25826.6,等电点预测值8.78,为碱性蛋白质;二级结构显示抗克伦特罗单链抗体含α螺旋20处,β折叠99处,β转角28处,随机卷曲93处。cbl三级结构建模显示重链(VH)和轻链(VL)形成一个疏水的"口袋",Linker游离于此结构之外,符合scFv的结构特点,明显具有抗原结合位点的空间构象,理论上应该具有良好的抗原结合活性。结论:构建一个抗克伦特罗scFv基因cbl,应用信息学技术所获得的预测和分析结果为抗克伦特罗单链抗体的进一步表达、纯化和活性研究提供信息。; 关键词克伦特罗单链抗体结构预测; Keywords clenbuterol single chain Fv （scFv） structure prediction; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建: 6; 作者罗翠红王弘刘细霞沈玉栋孙远明黄佳佳张宏斌; 机构广东省食品质量安全重点实验室广州年区广州总医院; 出处《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第19期283-287,共5页; 基金国家“863”计划项目(2007AA10Z437) 国家自然科学基金项目(30871755) +1 种基金广东省-教育部产学研结合项目(2009B090300409); 文摘目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR(SOE-PCR),将VH和VL基因用编码(G1y4Ser)3的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07超感染,建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10个阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定,并测序。登陆DNAMAN软件对序列进行分析、比对。结果:成功扩增VH、VL及scFv基因,并得到库容为1.2×106的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0×1010PFU,PCR鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv基因全长序列之间差异为8.38%,VH序列差异为3.68%,VL序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR抗原结合区域对应的核酸序列上。结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ的衍生物的单链抗体提供参考。; 关键词抗呋喃它酮代谢物的衍生物单链抗体噬菌体展示序列分析; Keywords derivatives of furaltadone metabolites single chain Fv （scFv） phage display sequencing; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	抗克伦特罗单链抗体基因工程菌株发酵条件的研究	王弘梁艳刘细霞杨金易雷红涛沈玉栋孙远明	《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心	2009	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	基于定点突变的抗克百威单链抗体的亲和力成熟	邓龙肖治理董洁娴王弘杨武英谢曦杨金易沈玉栋孙远明	《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心	2012	4	在线阅读下载PDF 职称材料
3	高效液相色谱-串联质谱法测定动物肌肉组织中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物残留	邓龙郭新东何强杨群华沈玉栋王弘	《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心	2012	5	在线阅读下载PDF 职称材料
4	抗克伦特罗单链抗体可溶性表达及特性鉴定	王弘潘科杨金易张宏斌王捷武婕雷红涛孙远明	《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心	2007	4	在线阅读下载PDF 职称材料
5	抗克伦特罗单链抗体基因构建及蛋白结构模拟	王弘刘细霞潘科雷红涛沈玉栋孙远明	《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
6	抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建	罗翠红王弘刘细霞沈玉栋孙远明黄佳佳张宏斌	《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心	2010	0	在线阅读下载PDF 职称材料