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抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白表达条件的初步研究
被引量：
2
1
作者
刘细霞
王弘
+4 位作者
杨金易
张宏斌
雷红涛
沈玉栋
孙远明
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期161-165,共5页
初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导...
初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导时间和培养基对CBLscFv-AP融合蛋白表达量的影响以及重组质粒的稳定性。选用E·coliBL21(DE3)pLysS为宿主菌,在初始pH为7·4的LB培养基中培养至A600nm为0·8～0·9时,诱导表达8h,为CBLscFv-AP融合蛋白最佳表达条件。而且重组质粒pBV220-scFv-phoA具有较好的结构稳定性。在该表达条件下,提高了CBLscFv-AP融合蛋白的表达量,为进行大规模发酵生产CBLscFv-AP融合蛋白奠定基础。
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关键词
克伦特罗
单链抗体
碱性磷酸酶
融合蛋白
表达条件
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职称材料
抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定
2
作者
邓龙
王弘
+2 位作者
周思
冼燕萍
郭新东
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第16期178-182,共5页
为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及...
为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及轻链片段,并通过PCR扩增得到sc Fv基因,再与载体p LIP6/GN连接,转化大肠杆菌BL21,阳性克隆质粒经PCR鉴定并测序。重组菌经0.6μmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)及低温诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用ELISA法检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒p LIP6/GN-sc Fv含有插入片段,sc Fv与碱性磷酸酶(AP)相连得到重组蛋白的分子量接近78 ku,可被游离的CBF竞争性抑制,IC50值为26.80 ng/m L。这说明成功构建了重组质粒p LIP6/GN-sc Fv并实现了其在大肠杆菌中的可溶性表达,为研究其在免疫分析方法中的应用奠定了基础。
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关键词
克百威
重组单链抗体
可溶性表达
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职称材料
抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化
3
作者
梁艳
王弘
+6 位作者
杨金易
刘细霞
徐小艳
张宏斌
雷红涛
沈玉栋
孙远明
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期200-202,共3页
为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,scFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响。优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 ...
为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,scFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响。优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 mmol/L Ca2+和20 mmol/L NaHPO4-的培养基中培养,装液量为25 mL,42℃诱导表达后抗CBL-scFv的表达量为33.7%。
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关键词
克伦特罗
重组抗体
发酵
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职称材料
题名
抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白表达条件的初步研究
被引量：
2
1
作者
刘细霞
王弘
杨金易
张宏斌
雷红涛
沈玉栋
孙远明
机构
广东省食品质量安全重点实验室/华南农业大学食品质量安全研究所
广州军区广州总医院医学
实验
中心
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期161-165,共5页
基金
"863"计划(2007AA10Z437)
国家自然科学基金(30400354
+3 种基金
20477012)
高等学校博士点基金(20050564011)
广东省自然科学基金(06025825
04300502)
文摘
初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导时间和培养基对CBLscFv-AP融合蛋白表达量的影响以及重组质粒的稳定性。选用E·coliBL21(DE3)pLysS为宿主菌,在初始pH为7·4的LB培养基中培养至A600nm为0·8～0·9时,诱导表达8h,为CBLscFv-AP融合蛋白最佳表达条件。而且重组质粒pBV220-scFv-phoA具有较好的结构稳定性。在该表达条件下,提高了CBLscFv-AP融合蛋白的表达量,为进行大规模发酵生产CBLscFv-AP融合蛋白奠定基础。
关键词
克伦特罗
单链抗体
碱性磷酸酶
融合蛋白
表达条件
Keywords
clenbuterol
single-chain Fv antibody
alkaline phosphatase
fusion protein
expression conditions
分类号
TS201.1 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定
2
作者
邓龙
王弘
周思
冼燕萍
郭新东
机构
广东
食品
药品职业学院
广东省
食品质量
与
安全
重点
实验室
/华南农业大学
食品质量
安全
研究所
广州
质量
监督检测
研究
院
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第16期178-182,共5页
文摘
为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及轻链片段,并通过PCR扩增得到sc Fv基因,再与载体p LIP6/GN连接,转化大肠杆菌BL21,阳性克隆质粒经PCR鉴定并测序。重组菌经0.6μmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)及低温诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用ELISA法检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒p LIP6/GN-sc Fv含有插入片段,sc Fv与碱性磷酸酶(AP)相连得到重组蛋白的分子量接近78 ku,可被游离的CBF竞争性抑制,IC50值为26.80 ng/m L。这说明成功构建了重组质粒p LIP6/GN-sc Fv并实现了其在大肠杆菌中的可溶性表达,为研究其在免疫分析方法中的应用奠定了基础。
关键词
克百威
重组单链抗体
可溶性表达
Keywords
carbofuran
recombinant single-chain antibody
soluble expression.
分类号
TS201.1 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化
3
作者
梁艳
王弘
杨金易
刘细霞
徐小艳
张宏斌
雷红涛
沈玉栋
孙远明
机构
广州市
质量
监督检测
研究
院
广东省
食品质量
与
安全
重点
实验室
/华南农业大学
食品质量
安全
研究所
广州军区广州总医院
出处
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期200-202,共3页
基金
国家自然科学基金(30871755&30400354)
国家"863"计划(2007AA10Z437)
广东省自然科学基金(06025825)
文摘
为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,scFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响。优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 mmol/L Ca2+和20 mmol/L NaHPO4-的培养基中培养,装液量为25 mL,42℃诱导表达后抗CBL-scFv的表达量为33.7%。
关键词
克伦特罗
重组抗体
发酵
Keywords
clenbuterol
recombinant
fermentation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白表达条件的初步研究
刘细霞
王弘
杨金易
张宏斌
雷红涛
沈玉栋
孙远明
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定
邓龙
王弘
周思
冼燕萍
郭新东
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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下载PDF
职称材料
3
抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化
梁艳
王弘
杨金易
刘细霞
徐小艳
张宏斌
雷红涛
沈玉栋
孙远明
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
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