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抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定
1
作者
邓龙
王弘
+2 位作者
周思
冼燕萍
郭新东
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第16期178-182,共5页
为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及...
为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及轻链片段,并通过PCR扩增得到sc Fv基因,再与载体p LIP6/GN连接,转化大肠杆菌BL21,阳性克隆质粒经PCR鉴定并测序。重组菌经0.6μmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)及低温诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用ELISA法检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒p LIP6/GN-sc Fv含有插入片段,sc Fv与碱性磷酸酶(AP)相连得到重组蛋白的分子量接近78 ku,可被游离的CBF竞争性抑制,IC50值为26.80 ng/m L。这说明成功构建了重组质粒p LIP6/GN-sc Fv并实现了其在大肠杆菌中的可溶性表达,为研究其在免疫分析方法中的应用奠定了基础。
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关键词
克百威
重组单链抗体
可溶性表达
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职称材料
抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达
被引量：
1
2
作者
陈舒迟
何永盛
+2 位作者
徐小艳
陆田珍
王弘
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期217-219,236,共4页
构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感...
构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析。结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL。经检测,重组抗体表达量为0.095g/L。这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础。
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关键词
克伦特罗
单链抗体
毕赤酵母
蛋白表达
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职称材料
抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化
3
作者
梁艳
王弘
+6 位作者
杨金易
刘细霞
徐小艳
张宏斌
雷红涛
沈玉栋
孙远明
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期200-202,共3页
为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,scFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响。优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 ...
为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,scFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响。优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 mmol/L Ca2+和20 mmol/L NaHPO4-的培养基中培养,装液量为25 mL,42℃诱导表达后抗CBL-scFv的表达量为33.7%。
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关键词
克伦特罗
重组抗体
发酵
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职称材料
题名
抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定
1
作者
邓龙
王弘
周思
冼燕萍
郭新东
机构
广东
食品
药品职业学院
广东省食品质量与安全重点实验室/华南农业大学食品质量安全研究所
广州
质量
监督检测
研究
院
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第16期178-182,共5页
文摘
为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及轻链片段,并通过PCR扩增得到sc Fv基因,再与载体p LIP6/GN连接,转化大肠杆菌BL21,阳性克隆质粒经PCR鉴定并测序。重组菌经0.6μmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)及低温诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用ELISA法检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒p LIP6/GN-sc Fv含有插入片段,sc Fv与碱性磷酸酶(AP)相连得到重组蛋白的分子量接近78 ku,可被游离的CBF竞争性抑制,IC50值为26.80 ng/m L。这说明成功构建了重组质粒p LIP6/GN-sc Fv并实现了其在大肠杆菌中的可溶性表达,为研究其在免疫分析方法中的应用奠定了基础。
关键词
克百威
重组单链抗体
可溶性表达
Keywords
carbofuran
recombinant single-chain antibody
soluble expression.
分类号
TS201.1 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达
被引量：
1
2
作者
陈舒迟
何永盛
徐小艳
陆田珍
王弘
机构
广东省
食品质量
与安全
重点
实验室
/华南农业大学
食品质量
与安全
研究所
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期217-219,236,共4页
基金
国家自然科学基金(30400354)
广东省自然科学基金(04300502)
文摘
构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析。结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL。经检测,重组抗体表达量为0.095g/L。这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础。
关键词
克伦特罗
单链抗体
毕赤酵母
蛋白表达
Keywords
clenbutero
single chain Fv antibody
Pichia pastoris
protein expression
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化
3
作者
梁艳
王弘
杨金易
刘细霞
徐小艳
张宏斌
雷红涛
沈玉栋
孙远明
机构
广州市
质量
监督检测
研究
院
广东省食品质量与安全重点实验室/华南农业大学食品质量安全研究所
广州军区广州总医院
出处
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期200-202,共3页
基金
国家自然科学基金(30871755&30400354)
国家"863"计划(2007AA10Z437)
广东省自然科学基金(06025825)
文摘
为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,scFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响。优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 mmol/L Ca2+和20 mmol/L NaHPO4-的培养基中培养,装液量为25 mL,42℃诱导表达后抗CBL-scFv的表达量为33.7%。
关键词
克伦特罗
重组抗体
发酵
Keywords
clenbuterol
recombinant
fermentation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定
邓龙
王弘
周思
冼燕萍
郭新东
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
在线阅读
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职称材料
2
抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达
陈舒迟
何永盛
徐小艳
陆田珍
王弘
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化
梁艳
王弘
杨金易
刘细霞
徐小艳
张宏斌
雷红涛
沈玉栋
孙远明
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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