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题名抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达
被引量：1
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作者
陈舒迟
何永盛
徐小艳
陆田珍
王弘
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机构
广东省食品质量与安全重点实验室/华南农业大学食品质量与安全研究所
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出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期217-219,236,共4页
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基金
国家自然科学基金(30400354)
广东省自然科学基金(04300502)
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文摘
构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析。结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL。经检测,重组抗体表达量为0.095g/L。这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础。
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关键词
克伦特罗
单链抗体
毕赤酵母
蛋白表达
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Keywords
clenbutero
single chain Fv antibody
Pichia pastoris
protein expression
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分类号
TS201.3
[轻工技术与工程—食品科学]
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