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LY294002对人晶状体上皮细胞蛋白激酶B活化的影响
被引量：
1
1
作者
郭瑞
郭海科
孟倩丽
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第11期1026-1030,共5页
背景蛋白激酶B（Akt）与许多细胞信号转导通路密切相关，从而参与多种细胞功能活动的调控，包括细胞的增生、迁移和代谢等，其中磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）可催化Akt活性并启动各种相关的细胞信号通路。P13K抑制剂能够抑制Akt活性，但是...
背景蛋白激酶B（Akt）与许多细胞信号转导通路密切相关，从而参与多种细胞功能活动的调控，包括细胞的增生、迁移和代谢等，其中磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）可催化Akt活性并启动各种相关的细胞信号通路。P13K抑制剂能够抑制Akt活性，但是否影响后发性白内障发生过程中残留的晶状体上皮细胞（LECs）的生物学行为尚不清楚。目的观察P13K抑制剂LY294002对人LECs中Akt活化的影响。方法对人LECs系HLEC-B3细胞进行常规培养和传代，然后接种于96孔板中，培养24h后在培养板中加入LY294002，终浓度分别为0、10、20、30、40、50、60、70、80μmol／L，继续培养24h后采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组细胞的增生抑制率。在同一批接种于6孔板内无菌盖玻片上的传代细胞中加入10μg／L转化生长因子-β2（TGF—β2）为诱导组，用20μmol／LLY294002预培养1h后再加入10Ixg／LTGF—β2进行共培养为TGF—B，与LY294005共培养组，以未加入TGF，p：和LY294002的细胞作为对照组，应用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞中磷酸化Akt（p-Akt）的荧光表达情况，并用Westernblot法检测各组细胞中p-Akt表达量的差异。结果CCK-8法检测结果显示，随着LY294002浓度的增加，HLEC—B3的吸光度（A）值逐渐减小，即LY294002对HLEC—B3细胞增生的抑制作用随浓度的增加而逐渐增强，不同浓度LY294002组间HLEC—B3的A值比较差异有统计学意义（F分组=9．72，P=0．00）；随着检测时间点的延长，HLEC—B3的4值逐渐增大，不同检测时间点A值比较差异有统计学意义（F时间=1737．54，P=0．00）。激光扫描共焦显微镜观察显示，对照组细胞仅有微量的p-Akt红色荧光，诱导组p-Akt表达明显增多，并向细胞膜聚集，细胞轮廓清晰，而TGF—β2与LY294005共培养组细胞中p-Akt表达的红色荧光明显减弱，细胞形态不清。Westernblot法检测结果显示，对照组、诱导组和TGF—β2与LY294005共培养组细胞中p-Akt的表达量分别为0．91±0．08、1．48±0．13和0．95±0．19，3个组间差异有统计学意义（F=15．04，P=0．00）。结论LY294002能够拈抗TGF—β2诱导的Akt磷酸化激活过程，有望成为新的有效防治后发性白内障的药物。
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关键词
磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂
LY294002
细胞蛋白激酶B
转化生长因子Β2
晶状体上皮细胞
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职称材料
正常小鼠虹膜中抗原递呈细胞的表型特征、分布和形态学特点
2
作者
孟倩丽
杨培增
+1 位作者
郭海科
崔颖
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期583-587,共5页
背景 以往对组织中抗原递呈细胞（APCs）的研究多采用体外免疫组织化学的方法,其结果易受到多种因素的影响,曾有研究者采用前房注射荧光素标记抗体的方法对眼前节组织中的APCs进行研究,但易损伤角膜等组织.采用活体标记的方法探讨虹膜...
背景 以往对组织中抗原递呈细胞（APCs）的研究多采用体外免疫组织化学的方法,其结果易受到多种因素的影响,曾有研究者采用前房注射荧光素标记抗体的方法对眼前节组织中的APCs进行研究,但易损伤角膜等组织.采用活体标记的方法探讨虹膜和睫状体中APCs的表型特征,对进一步阐明APCs在维持眼部免疫平衡状态中的作用及机制具有重要意义. 目的 探讨正常小鼠虹膜中APCs的表型特征、分布和形态学特点.方法 6～8周龄的SPF级雌性BALB/c小鼠51只按照随机数字表法分为17个组,在生物解剖显微镜下用玻璃微量注射针于角巩膜缘后0.5 mm处刺入玻璃体腔内注射2.0 μl AlexaFluor594或Alexa Fluor 488标记的卵清蛋白（OVA）、抗CD11c、主要组织相容性复合体分子Ⅱ（MHC-Ⅱ）、F4/80、B7-1和B7-2单克隆抗体或其两两抗体的混合液,注射24 h后取小鼠虹膜组织,结合平片技术和激光扫描共焦显微镜观察虹膜中APCs的表型特征、分布及形态学特点,并用体外染色实验验证体内染色结果. 结果 正常小鼠虹膜中存在大量呈规则网络状分布的OVA^＋、F4/80^＋、CD11c^＋、MHC-Ⅱ^＋、B7-1^＋和B7-2^＋细胞,Alexa Fluor 594标记的阳性细胞呈红色荧光,Alexa Fluor 488标记的阳性细胞呈绿色荧光.双重染色实验结果可见,虹膜中约有90％的F4/80^＋细胞为OVA^＋,约有60％的F4/80^＋细胞和CD11c^＋细胞表达MHC-Ⅱ,约有35％的F4/80^＋细胞和CD11c^＋细胞同时表达B7-1和B7-2,70％以上的OVA^＋细胞为MHC-Ⅱ^＋.根据标记细胞的形态不同可分为树突状细胞（DC）和多形性细胞两大类.结论 活体玻璃体腔内注射荧光素标记抗体的方法可以准确观察正常小鼠虹膜中的APCs.虹膜中APCs的表型特征、分布和形态学特点与眼免疫偏离和炎症密切相关.
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关键词
树突状细胞
巨噬细胞
抗原递呈
表型特征
葡萄膜
组织分布
荧光抗体技术
激光扫描共焦显微镜
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职称材料
题名
LY294002对人晶状体上皮细胞蛋白激酶B活化的影响
被引量：
1
1
作者
郭瑞
郭海科
孟倩丽
机构
广东省眼病防治研究所广东省人民医院眼科广东省医学科学院
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第11期1026-1030,共5页
基金
基金项目：广东省自然科学基金项目（$2011010000462）
广州市珠江科技新星专项项目（2011J2200050）
文摘
背景蛋白激酶B（Akt）与许多细胞信号转导通路密切相关，从而参与多种细胞功能活动的调控，包括细胞的增生、迁移和代谢等，其中磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）可催化Akt活性并启动各种相关的细胞信号通路。P13K抑制剂能够抑制Akt活性，但是否影响后发性白内障发生过程中残留的晶状体上皮细胞（LECs）的生物学行为尚不清楚。目的观察P13K抑制剂LY294002对人LECs中Akt活化的影响。方法对人LECs系HLEC-B3细胞进行常规培养和传代，然后接种于96孔板中，培养24h后在培养板中加入LY294002，终浓度分别为0、10、20、30、40、50、60、70、80μmol／L，继续培养24h后采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组细胞的增生抑制率。在同一批接种于6孔板内无菌盖玻片上的传代细胞中加入10μg／L转化生长因子-β2（TGF—β2）为诱导组，用20μmol／LLY294002预培养1h后再加入10Ixg／LTGF—β2进行共培养为TGF—B，与LY294005共培养组，以未加入TGF，p：和LY294002的细胞作为对照组，应用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞中磷酸化Akt（p-Akt）的荧光表达情况，并用Westernblot法检测各组细胞中p-Akt表达量的差异。结果CCK-8法检测结果显示，随着LY294002浓度的增加，HLEC—B3的吸光度（A）值逐渐减小，即LY294002对HLEC—B3细胞增生的抑制作用随浓度的增加而逐渐增强，不同浓度LY294002组间HLEC—B3的A值比较差异有统计学意义（F分组=9．72，P=0．00）；随着检测时间点的延长，HLEC—B3的4值逐渐增大，不同检测时间点A值比较差异有统计学意义（F时间=1737．54，P=0．00）。激光扫描共焦显微镜观察显示，对照组细胞仅有微量的p-Akt红色荧光，诱导组p-Akt表达明显增多，并向细胞膜聚集，细胞轮廓清晰，而TGF—β2与LY294005共培养组细胞中p-Akt表达的红色荧光明显减弱，细胞形态不清。Westernblot法检测结果显示，对照组、诱导组和TGF—β2与LY294005共培养组细胞中p-Akt的表达量分别为0．91±0．08、1．48±0．13和0．95±0．19，3个组间差异有统计学意义（F=15．04，P=0．00）。结论LY294002能够拈抗TGF—β2诱导的Akt磷酸化激活过程，有望成为新的有效防治后发性白内障的药物。
关键词
磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂
LY294002
细胞蛋白激酶B
转化生长因子Β2
晶状体上皮细胞
分类号
R971 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
正常小鼠虹膜中抗原递呈细胞的表型特征、分布和形态学特点
2
作者
孟倩丽
杨培增
郭海科
崔颖
机构
广东省
眼病
防治
研究所
广东省
人民医院
眼科
广东省
医学
科学院
重庆医科大学附属第一
医院
眼科
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期583-587,共5页
基金
国家自然科学基金项目（81371031）
广东省医学科研基金项目（B2011013）
广州市珠江科技新星专项项目（2011J2200050）
文摘
背景 以往对组织中抗原递呈细胞（APCs）的研究多采用体外免疫组织化学的方法,其结果易受到多种因素的影响,曾有研究者采用前房注射荧光素标记抗体的方法对眼前节组织中的APCs进行研究,但易损伤角膜等组织.采用活体标记的方法探讨虹膜和睫状体中APCs的表型特征,对进一步阐明APCs在维持眼部免疫平衡状态中的作用及机制具有重要意义. 目的 探讨正常小鼠虹膜中APCs的表型特征、分布和形态学特点.方法 6～8周龄的SPF级雌性BALB/c小鼠51只按照随机数字表法分为17个组,在生物解剖显微镜下用玻璃微量注射针于角巩膜缘后0.5 mm处刺入玻璃体腔内注射2.0 μl AlexaFluor594或Alexa Fluor 488标记的卵清蛋白（OVA）、抗CD11c、主要组织相容性复合体分子Ⅱ（MHC-Ⅱ）、F4/80、B7-1和B7-2单克隆抗体或其两两抗体的混合液,注射24 h后取小鼠虹膜组织,结合平片技术和激光扫描共焦显微镜观察虹膜中APCs的表型特征、分布及形态学特点,并用体外染色实验验证体内染色结果. 结果 正常小鼠虹膜中存在大量呈规则网络状分布的OVA^＋、F4/80^＋、CD11c^＋、MHC-Ⅱ^＋、B7-1^＋和B7-2^＋细胞,Alexa Fluor 594标记的阳性细胞呈红色荧光,Alexa Fluor 488标记的阳性细胞呈绿色荧光.双重染色实验结果可见,虹膜中约有90％的F4/80^＋细胞为OVA^＋,约有60％的F4/80^＋细胞和CD11c^＋细胞表达MHC-Ⅱ,约有35％的F4/80^＋细胞和CD11c^＋细胞同时表达B7-1和B7-2,70％以上的OVA^＋细胞为MHC-Ⅱ^＋.根据标记细胞的形态不同可分为树突状细胞（DC）和多形性细胞两大类.结论 活体玻璃体腔内注射荧光素标记抗体的方法可以准确观察正常小鼠虹膜中的APCs.虹膜中APCs的表型特征、分布和形态学特点与眼免疫偏离和炎症密切相关.
关键词
树突状细胞
巨噬细胞
抗原递呈
表型特征
葡萄膜
组织分布
荧光抗体技术
激光扫描共焦显微镜
Keywords
Dendritic cell
Macrophage
Antigen presentation
Phenotype character
Uvea
Tissue distribution
Fluorescent antibody technique
Laser confocal microscope
分类号
R77 [医药卫生—眼科]
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1
LY294002对人晶状体上皮细胞蛋白激酶B活化的影响
郭瑞
郭海科
孟倩丽
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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职称材料
2
正常小鼠虹膜中抗原递呈细胞的表型特征、分布和形态学特点
孟倩丽
杨培增
郭海科
崔颖
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
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