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重组质粒pcDNA3/sIL-1R(I)在哺乳动物细胞中的表达 被引量:9
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作者 徐艳 李鹏 +2 位作者 张蕴惠 章锦才 王大章 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期467-470,共4页
目的 检测重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中的表达。方法 采用脂质体介导基因转染技术 ,将已构建的pcDNA3 sIL_1R(I)质粒DNA导入体外培养的哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中。加入G4 18对转染的细胞加压筛选 ... 目的 检测重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中的表达。方法 采用脂质体介导基因转染技术 ,将已构建的pcDNA3 sIL_1R(I)质粒DNA导入体外培养的哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中。加入G4 18对转染的细胞加压筛选 ,获得稳定转染的细胞。酶联免疫吸附实验 (ELISA)对重组质粒在COS_1和CHO细胞表达产物的含量进行检测。结果 G4 18筛选获得稳定转染的COS_1和CHO细胞 ,对照组加压后第10~ 2 0天细胞全部死亡。转染组第 15~ 2 3天汇片达 80 %左右。转染组细胞培养液和冻融液中sIL_1R表达量均显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论 以sIL_1R胞外成熟肽编码区基因作为目的基因构建的重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系中具有表达功能。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 表达 人可溶性白细胞介素-1受体 基因治疗 体外转染
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人可溶性白介素-1受体真核表达载体pcDNA3/sIL-1R的构建 被引量:4
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作者 李鹏 徐艳 +2 位作者 张蕴惠 章锦才 王大章 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-143,共4页
目的 本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法 将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外... 目的 本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法 将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外连接酶切片段 ,使其定向重组 ,再将重组DNA转化E .coliCompetentCellsJM10 9,经复苏后 ,在含Ampr 的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。结果 挑取的LB固体培养基上的 6个单菌落经酶切及测序鉴定 ,证实均为阳性克隆 ,即sIL_1R与pcDNA3 1(+)体外重组成功。结论 采用体外重组技术 ,成功地将人sIL_1RcDNA插入了真核表达载体pcDNA3 1(+) 展开更多
关键词 人可溶性白介素-1受体 真核表达载体 PCDNA3 骨关节病 基因治疗
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牙周炎患者龈下菌斑与口臭相关性的研究 被引量:4
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作者 刘怡 黄海云 +1 位作者 章锦才 王松灵 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期466-470,共5页
目的 了解口臭与牙周炎患者龈下菌斑组成的关系。方法 用H2 S测定仪Halimeter与专业医师鼻测两种方法对 2 10例牙周炎患者进行口气测定 ,选取符合纳入标准的 2 0例口臭患者作为实验组 ,另随机选取 10例无口臭的牙周炎患者作为对照组... 目的 了解口臭与牙周炎患者龈下菌斑组成的关系。方法 用H2 S测定仪Halimeter与专业医师鼻测两种方法对 2 10例牙周炎患者进行口气测定 ,选取符合纳入标准的 2 0例口臭患者作为实验组 ,另随机选取 10例无口臭的牙周炎患者作为对照组。收集两组患者邻面间隙的颈缘菌斑和龈下菌斑行刚果红负性染色及厌氧培养 ,对培养出的主要细菌作分离及鉴定。所有实验结果采用SPSS 10 .0进行统计学分析。结果 ①两组患者的菌斑指数、牙龈出血指数、牙周袋深度无显著性差异。②两组患者邻面间隙的颈缘菌斑和龈下菌斑中螺旋体所占百分比均有显著性差异。③两组患者邻面间隙的颈缘菌斑及龈下菌斑中的细菌检出量均无显著性差异。④两组患者邻面间隙的颈缘菌斑及龈下菌斑中主要细菌的检出率均无显著差异 ;与口臭相关的细菌 (牙龈卟啉单胞菌、韦荣菌和二氧化碳噬纤维菌 )的构成比在邻面间隙的颈缘菌斑中为实验组显著高于对照组 ,而在龈下菌斑中两组无显著差异。结论 并非所有的牙周炎患者均有口臭 ;牙周炎患者邻面间隙的颈缘菌斑中细菌的构成比与口臭的关系更密切。 展开更多
关键词 牙周炎 口臭 菌斑 细菌 厌氧培养
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白细胞介素1基因多态性与四川地区慢性牙周炎相关关系的研究 被引量:12
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作者 黄海云 章锦才 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期415-419,共5页
目的 检测IL-1基因型在不同牙周健康状态汉族人群中的分布,分析IL-1等位基因与慢性牙周炎的相关关系。方法 选取汉族慢性牙周炎患者182例,检查全口临床牙周附着丧失量,牙周袋深度;同时选取牙周健康对照者89例。棉拭子刮取颊黏膜脱落细胞... 目的 检测IL-1基因型在不同牙周健康状态汉族人群中的分布,分析IL-1等位基因与慢性牙周炎的相关关系。方法 选取汉族慢性牙周炎患者182例,检查全口临床牙周附着丧失量,牙周袋深度;同时选取牙周健康对照者89例。棉拭子刮取颊黏膜脱落细胞,用PCR-RFLP法和PCR法检测IL-1+3953、IL-1A-889、IL-1B-511和IL-1RN(intron2)VNTR基因型分布。结果 重度慢性牙周炎患者组IL-1A.889、IL-1B+3953和IL-1B-511等位基因Ⅱ以及IL-1A-889和IL-1B-511复合等位基因Ⅱ、Ⅱ,1B+3953和IL-1B-511复合等位基因Ⅱ基因频率均显著高于健康对照组(P<0.05),IL-1RN(intron2)VNTR等位基因的基因型和等位基因频率在各组间的分布无显著性差异(P>0.05)。结论 IL-1基因多态性与慢性牙周炎有相关关系,IL-1B+3953、IL-1A-889和IL-1B-511等位基因Ⅱ以及IL-1A-889和IL-1B-511复合等位基因Ⅱ、IL-1B+3953和IL-1B-511复合等位基因Ⅱ可能是部分慢性牙周炎患者易感性的遗传标志。同时提示IL-1基因型在不同地域、不同人种中的分布是不相同的。 展开更多
关键词 白细胞介素1 重度慢性牙周炎 易感性 基因多态性
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人釉原蛋白编码区基因真核表达载体PsecTaq2A-AMG的构建 被引量:2
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作者 杨爱玲 徐琛蓉 +3 位作者 章锦才 钟良军 殷春一 赵川江 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期133-135,共3页
目的 构建人釉原蛋白 (AMG)编码区基因真核表达载体PsecTaq2A_AMG。方法 采用PCR技术体外扩增AMG完整分泌肽编码区。将扩增产物与PsecTaq2A分别用BamHI和XholI行双酶切 ,将获取的AMG目的基因片段连接到双酶切后的PsecTaq2A ,构建重组... 目的 构建人釉原蛋白 (AMG)编码区基因真核表达载体PsecTaq2A_AMG。方法 采用PCR技术体外扩增AMG完整分泌肽编码区。将扩增产物与PsecTaq2A分别用BamHI和XholI行双酶切 ,将获取的AMG目的基因片段连接到双酶切后的PsecTaq2A ,构建重组质粒PsecTaq2A_AMG ,并对重组质粒进行鉴定。结果 ①PCR扩增产物经 1 5 %琼脂糖凝胶电泳 ,可见大小约 5 19bp的特异性条带 ,与预期结果一致。②重组克隆PsecTaq2A_AMG酶谱分析与预期结果一致 ,序列测定结果与GenBank中的人釉原蛋白序列完全一致。结论 用此方法可成功构建AMG编码区基因真核表达载体PsecTaq2A_AMG。 展开更多
关键词 人釉原蛋白 重组质粒 编码区基因真核表达载体 基因治疗
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人可溶性肿瘤坏死因子α受体真核表达载体pcDNA3.1(+)/sTNFR的构建 被引量:3
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作者 徐艳 章锦才 张蕴惠 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期335-337,共3页
目的构建人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFR)真核表达载体pcDNA3·1(+)/sTNFR,为研究人sTNFR在哺乳动物细胞中的合成与表达提供条件。方法采用体外重组技术,将sTNFR的RT-PCR纯化产物及质粒pcDNA3·1(+)DNA经kpnⅠ和xhoⅠ双酶切... 目的构建人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFR)真核表达载体pcDNA3·1(+)/sTNFR,为研究人sTNFR在哺乳动物细胞中的合成与表达提供条件。方法采用体外重组技术,将sTNFR的RT-PCR纯化产物及质粒pcDNA3·1(+)DNA经kpnⅠ和xhoⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接这两个酶切片段进行定向重组,再将重组DNA转化感受态细胞E.ColiCompetent Cells JM109。复苏后,在含氨苄青霉素的LB固体培养基上筛选阳性克隆,进行酶切及测序鉴定。结果挑取的LB固体培养基上的6个单菌落经证实均为阳性克隆,即sTNFR与pcDNA3·1(+)体外重组成功。结论将sTNFR cDNA成功地插入了真核表达载体pcDNA3·1(+)中,构建了质粒pcDNA3·1(+)/sTNFR。 展开更多
关键词 人可溶性肿瘤坏死因子α受体 真核载体 质粒
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