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基于环介导等温扩增微流控芯片技术检测4种鱼类病毒方法的建立
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作者 任向阳 丁宁 +7 位作者 苗子毅 黄献培 潘一峰 柏建山 黎浩权 袁建文 陈进会 张险朋 《广东海洋大学学报》 北大核心 2025年第5期106-112,共7页
【目的】建立适合鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、神经坏死病毒(NNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)联合检测的环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片检测体系,为4种鱼类病毒等温快速联检提供技术支撑。【方法】根据病毒SVCV、... 【目的】建立适合鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、神经坏死病毒(NNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)联合检测的环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片检测体系,为4种鱼类病毒等温快速联检提供技术支撑。【方法】根据病毒SVCV、KHV、NNV和VHSV各自保守基因设计LAMP引物,预包埋LAMP引物至微流控芯片,注入等温扩增反应试剂,通过电浸润法将反应试剂驱动至各反应位点,复溶预包埋的LAMP引物,在各反应位点进行等温扩增反应。分析该检测体系的特异性、灵敏性和重复性验证,并应用于实际样品检测。【结果】本研究建立的LAMP微流控芯片检测体系对SVCV、KHV、NNV和VHSV阳性样品均出现特异性扩增反应,且不同病毒间未出现交叉反应;对鱼类易感的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、大口黑鲈虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、草鱼呼肠孤病毒、本尼登虫(Benedenia girellae)和刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)等8种常见病原体阳性样品均无特异性扩增反应。灵敏度实验结果表明,对SVCV、VHSV的检测限均为10 fg/μL,对KHV、NNV的检测限均为1 fg/μL。重复性实验结果表明,4种病毒的变异系数均<5%。该检测体系与实时荧光PCR方法相比,对20份实际样品的检测结果均保持一致。【结论】本研究建立的LAMP微流控芯片检测体系于63℃等温扩增30 min即可完成对SVCV、KHV、NNV和VHSV的同时检测,且特异性好、灵敏度高、重复性好,可为鱼类SVCV、KHV、NNV和VHSV等温快速联检提供技术支撑。 展开更多
关键词 环介导等温扩增微流控芯片技术 鲤春病毒血症病毒 锦鲤疱疹病毒 神经坏死病毒 病毒性出血性败血症病毒
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我国皮革制鞋行业标准样品发展现状与展望 被引量:2
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作者 梁纪宇 任可帅 +3 位作者 周威 王春华 桑军 林炜 《皮革科学与工程》 北大核心 2025年第4期30-36,共7页
随着我国皮革制鞋行业迈入高质量发展的新阶段,行业对标准化的需求日益增长。在国家支持标准样品发展相关政策的助推下,皮革制鞋标准样品作为实物标准,已逐步成为皮革制鞋标准化工作的重要组成部分,是提升全行业检验检测技术水平的重要... 随着我国皮革制鞋行业迈入高质量发展的新阶段,行业对标准化的需求日益增长。在国家支持标准样品发展相关政策的助推下,皮革制鞋标准样品作为实物标准,已逐步成为皮革制鞋标准化工作的重要组成部分,是提升全行业检验检测技术水平的重要工具。文中概述了国内外标准样品的发展历程,并从标准样品体系建设、标准样品特征和存在的问题等多个方面详细介绍了皮革制鞋行业标准样品的发展现状,最后针对皮革制鞋标准样品的未来发展趋势提出了建议。 展开更多
关键词 皮革 制鞋 标准样品 行业标准
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进境美国豌豆中豌豆细菌性疫病菌类群Ⅰ的首次分离鉴定
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作者 牟桂萍 陈青 +3 位作者 许然 胡加谊 闫晓东 易建平 《生物安全学报(中英文)》 北大核心 2025年第3期205-211,共7页
【目的】进境美国豌豆中豌豆细菌性疫病菌类群Ⅰ的分离和鉴定。【方法】利用选择性培养基MT从美国进境豌豆样品上分离到一株疑似豌豆细菌性疫病菌(Pseudomonas syringae pv.pisi,Ppi)的细菌分离物5337-2,对该分离物进行致病性测定、烟... 【目的】进境美国豌豆中豌豆细菌性疫病菌类群Ⅰ的分离和鉴定。【方法】利用选择性培养基MT从美国进境豌豆样品上分离到一株疑似豌豆细菌性疫病菌(Pseudomonas syringae pv.pisi,Ppi)的细菌分离物5337-2,对该分离物进行致病性测定、烟草过敏性反应、PCR检测、16S序列扩增、多位点序列分析和生化测试。【结果】人工接种分离物到豌豆茎秆能引起顶端幼嫩茎秆枯萎;该分离物接种烟草叶片能产生过敏性反应;Ppi类群Ⅰ特异引物AN3F/AN3R及与探针P-PS1结合能扩增分离物5337-2的DNA,均得到预期131 bp的特异条带和扩增曲线;分离物5337-2的16S RNA、16S-23S和部分23S RNA序列与GenBank中Ppi类群Ⅰ菌株PP1的序列一致,相似性为100.00%;选择gap 1、gltA、gyrB和ropD等4个看家基因进行多位点序列分析,系统发育树显示分离物5337-2与Ppi类群Ⅰ相关菌株处于同一分支,与Ppi类群Ⅱ相关菌株处于不同分支;分离物在七叶苷、赤藓糖醇和荧光色素等生化指标符合Ppi类群Ⅰ特征。【结论】根据试验结果将分离物5337-2鉴定为豌豆细菌性疫病菌Pseudomonas syringae pv.pisi类群Ⅰ。 展开更多
关键词 豌豆 豌豆细菌性疫病菌 类群Ⅰ 分离鉴定
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基体标准样品在直接测定橡胶中汞的应用
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作者 洪嫄 黄雪琳 +3 位作者 史哲 李浩杰 朱彬 王斌 《实验室研究与探索》 北大核心 2025年第7期20-25,共6页
为了快速高效地检测橡胶中汞含量,利用自制的橡胶汞(Hg)含量基体标准样品和橡胶样品取样装置,建立了橡胶及其制品中汞含量测定方法。基体标准样品的均匀性达到标准要求。使用直接测汞仪(DMA)分析时,低含量和高含量汞元素标准工作曲线的... 为了快速高效地检测橡胶中汞含量,利用自制的橡胶汞(Hg)含量基体标准样品和橡胶样品取样装置,建立了橡胶及其制品中汞含量测定方法。基体标准样品的均匀性达到标准要求。使用直接测汞仪(DMA)分析时,低含量和高含量汞元素标准工作曲线的线性相关系数分别为0.99984和0.99985,检出限为0.0015 mg/kg。最佳样品取样量为0.5 g,分解温度为650℃,分解时间为3 min。方法的精确度达到定量分析要求,精密被优于1.73%。 展开更多
关键词 橡胶 基体标准样品
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高重频光纤激光诱导击穿光谱对TC4钛合金的免定标分析
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作者 朱方印 林锐涛 +6 位作者 王斌 蒋二龙 赵楠 周稳稳 郑少锋 李嘉铭 张庆茂 《光学精密工程》 2025年第19期3032-3042,共11页
传统激光诱导击穿光谱(Laser-Induced Breakdown Spectroscopy,LIBS)采用的低重频固体激光器存在长时间连续工作稳定性不足的问题。光纤激光诱导击穿光谱(Fiber Laser-Induced Breakdown Spectroscopy,FL-LIBS)虽然可以提供更高的长期... 传统激光诱导击穿光谱(Laser-Induced Breakdown Spectroscopy,LIBS)采用的低重频固体激光器存在长时间连续工作稳定性不足的问题。光纤激光诱导击穿光谱(Fiber Laser-Induced Breakdown Spectroscopy,FL-LIBS)虽然可以提供更高的长期稳定性,但其重复频率过高,因此,目前皆用时间积分光谱结合参考样品定标曲线法定量分析研究。为摆脱参考样品的限制,本文在FL-LIBS平台上构建了高速高重频触发门控系统,实现了等离子体瞬态光谱的采集,开发出免定标定量分析算法,并改进内部参考线法(Internal Reference Self-absorption Correction,IRSAC)进行光谱自吸收校正,进一步提高了免定标定量分析的准确度。实验结果表明,TC4钛合金总体分析误差(Distance Error,DE)为0.883%~3.928%(质量分数),相比未校正自吸收效应减少16.879%~26.597%(质量分数)。这证明了该方法可以在高重频光纤激光烧蚀的条件下实现高准确度的免定标定量分析,为长时间连续工作的LIBS系统提供了解决方案。 展开更多
关键词 激光诱导击穿光谱 光纤激光器 定量分析 自吸收效应 自由定标法
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进境法国大麦中麦类壳多胞斑点病菌的鉴定及致病性测定
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作者 叶露飞 牟桂萍 +3 位作者 闫晓东 杨赛军 左然玲 易建平 《生物安全学报(中英文)》 2025年第4期338-344,共7页
【目的】进境法国大麦中麦类壳多胞斑点病菌的鉴定及致病性测定。【方法】利用平板分离法从进境法国大麦样品中分离到真菌分离物5225-17,对分离物进行菌落形态特征观察、ITS、β-tubulin、β-xylosidase基因序列分析和致病性测试。【结... 【目的】进境法国大麦中麦类壳多胞斑点病菌的鉴定及致病性测定。【方法】利用平板分离法从进境法国大麦样品中分离到真菌分离物5225-17,对分离物进行菌落形态特征观察、ITS、β-tubulin、β-xylosidase基因序列分析和致病性测试。【结果】分离物5225-17在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上菌落正面为白色絮状,背面中央为淡粉色。分离物边缘规则,生长速度较快,约0.5~1.0 cm·d^(-1)。分离物在PDA培养基上产孢困难,在水琼脂(WA)培养基上20℃培养21 d后可见菌丝产孢。分生孢子呈圆柱形、透明,孢子上端稍弯曲或直,末端钝或圆,具3~5个隔膜,含有油球,长×宽为26.8μm×3.6μm(平均值)。子囊棒状、透明、顶部圆,长×宽为(40~80)μm×(8~11)μm;子囊孢子8个,浅黄色至淡黄褐色,梭形,直或稍弯曲,3个隔膜,少数2个或4个,隔膜处明显缢缩,长×宽为20.8μm×4.1μm(平均值)。ITS、β-tubulin和β-xylosidase基因序列均与麦类壳多胞斑点病菌Parastagonospora pseudonodorum完全一致。基于多基因的系统发育树表明,分离物5225-17与P.pseudonodorum分支聚在一起,与其近似种P.nodorum亲缘关系较远。致病性测试显示,分离物5225-17接种离体叶片和活体叶片均产生典型症状。【结论】分离物5225-17为麦类壳多胞斑点病菌P.pseudonodorum。 展开更多
关键词 麦类壳多胞斑点病菌 大麦 分离鉴定 致病性
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