本研究采用响应面方法优化重组人对氧磷酶1(Recombinant Human Paraoxonase 1,rhPON1)在毕赤酵母中的表达。首先通过研究甲醇浓度、p H、培养基装液量3个单因素对rhPON1表达的影响,然后以rhPON1单位体积酶活力为响应值进行响应面分析。...本研究采用响应面方法优化重组人对氧磷酶1(Recombinant Human Paraoxonase 1,rhPON1)在毕赤酵母中的表达。首先通过研究甲醇浓度、p H、培养基装液量3个单因素对rhPON1表达的影响,然后以rhPON1单位体积酶活力为响应值进行响应面分析。结果显示:甲醇浓度1.42%,p H值5.91,培养基装液量9.39%是最优发酵条件。在此优化条件下,rhPON1的单位体积酶活力预测值为0.737U/mL,与验证值(0.735U/mL)基本一致。人对氧磷酶1可以水解多种有机磷化合物,被认为是一种有机磷农药中毒的解毒剂。展开更多
规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)主要元件Cas9蛋白一般采用大肠杆菌表达,但在表达纯化过程中易出现形成包涵体形...规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)主要元件Cas9蛋白一般采用大肠杆菌表达,但在表达纯化过程中易出现形成包涵体形式的不溶解性蛋白,内毒素含量高、蛋白过大导致蛋白折叠不正确、产量低等问题。为实现化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9蛋白(SpCas9)在大肠杆菌中的高效可溶表达,进一步促进其应用及编辑技术的推广,本研究应用GB1促溶标签提高Cas9蛋白表达量及溶解度,同时通过使用多重启动子策略进一步提高了Cas9蛋白表达量。两种策略的组合使Cas9蛋白表达量提升了2.52倍。体外酶切分析显示融合GB1标签的Cas9蛋白功能活性不受影响。进一步组装RNP复合物转化黑曲霉宿主成功破坏了pyrG基因。展开更多
对通过微生物转化蔗糖制备的含新科思糖的糖浆进行分离纯化以制备新科思糖进行了研究。首先以巴斯德毕赤酵母去除糖浆中的果糖和葡萄糖,研究了酵母添加量和发酵时间对新科思糖纯度的影响;然后利用Bio-Gel P-2对初步纯化的糖浆进行进一...对通过微生物转化蔗糖制备的含新科思糖的糖浆进行分离纯化以制备新科思糖进行了研究。首先以巴斯德毕赤酵母去除糖浆中的果糖和葡萄糖,研究了酵母添加量和发酵时间对新科思糖纯度的影响;然后利用Bio-Gel P-2对初步纯化的糖浆进行进一步分离纯化,研究了上样量和洗脱液流速对新科思糖纯度和回收率的影响。结果表明:当巴斯德毕赤酵母的细胞添加量为60 g/L,处理时间为10 h时,新科思糖的纯度由10.92%提高到19.39%;当进样量为0.5 m L,流速为0.1 m L/min时,新科思糖的纯度由19.39%提高到76.68%。结论:此方法可用于制备新科思糖。展开更多
文摘规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)主要元件Cas9蛋白一般采用大肠杆菌表达,但在表达纯化过程中易出现形成包涵体形式的不溶解性蛋白,内毒素含量高、蛋白过大导致蛋白折叠不正确、产量低等问题。为实现化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9蛋白(SpCas9)在大肠杆菌中的高效可溶表达,进一步促进其应用及编辑技术的推广,本研究应用GB1促溶标签提高Cas9蛋白表达量及溶解度,同时通过使用多重启动子策略进一步提高了Cas9蛋白表达量。两种策略的组合使Cas9蛋白表达量提升了2.52倍。体外酶切分析显示融合GB1标签的Cas9蛋白功能活性不受影响。进一步组装RNP复合物转化黑曲霉宿主成功破坏了pyrG基因。
文摘对通过微生物转化蔗糖制备的含新科思糖的糖浆进行分离纯化以制备新科思糖进行了研究。首先以巴斯德毕赤酵母去除糖浆中的果糖和葡萄糖,研究了酵母添加量和发酵时间对新科思糖纯度的影响;然后利用Bio-Gel P-2对初步纯化的糖浆进行进一步分离纯化,研究了上样量和洗脱液流速对新科思糖纯度和回收率的影响。结果表明:当巴斯德毕赤酵母的细胞添加量为60 g/L,处理时间为10 h时,新科思糖的纯度由10.92%提高到19.39%;当进样量为0.5 m L,流速为0.1 m L/min时,新科思糖的纯度由19.39%提高到76.68%。结论:此方法可用于制备新科思糖。
