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经典型和新型鹅呼肠孤病毒的双重RT-qPCR检测方法的建立和应用
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作者 尹政浩 魏无缺 +5 位作者 梁昭平 李雨泽 徐杭 陆泳锟 梅堃 黄淑坚 《广东畜牧兽医科技》 2025年第3期96-104,共9页
鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus, GRV)包括经典型(GRV)和新型鹅呼肠孤病毒(Novel Goose reovirus, NGRV),两者在流行病学特征和病毒基因序列上存在差异。目前针对这两种类型病毒的敏感、特异的检测方法尚未完善,使得准确诊断和及时干预变... 鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus, GRV)包括经典型(GRV)和新型鹅呼肠孤病毒(Novel Goose reovirus, NGRV),两者在流行病学特征和病毒基因序列上存在差异。目前针对这两种类型病毒的敏感、特异的检测方法尚未完善,使得准确诊断和及时干预变得十分困难。为了区分GRV和NGRV,建立了一种基于染料法(SYBR Green I)的双重RT-qPCR检测方法。结果显示:该方法通过熔解曲线可区分GRV(79.5℃)和NGRV(86.5℃),对常见的水禽流行疫病均未出现扩增,最低检出为6.466×10^(1)拷贝/μLGRV和4.979×10^(1)拷贝/μLNGRV,组内与组间变异系数均小于0.55%。结果表明,这个研究所建立基于染料法的双重RT-qPCR检测方法可以快速准确地确定感染鹅群中不同型的GRV,为疾病的早期诊断、流行病学监测和有效防控提供支持。 展开更多
关键词 鹅呼肠孤病毒 GRV和NGRV 染料法 RT-qRCR 熔解曲线
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新型鹅星状病毒基因1型和2型双重荧光定量PCR方法的建立及应用
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作者 徐杭 刘梦凡 +8 位作者 尹政浩 陆泳锟 李雨泽 罗浩健 林俊杰 王一侨 刘莹莹 梅堃 黄淑坚 《广东畜牧兽医科技》 2025年第4期83-93,共11页
为建立一种行之有效地检测新型鹅星状病毒(Novel Goose Astrovirus,NGAstV)基因1型(NGAstV⁃1)和基因2型(NGAstV⁃2)双重荧光定量PCR(quantitative polymerase chain reac⁃tion,qPCR),该研究根据NGAstV⁃1和NGAstV⁃2的ORF2蛋白设计鉴定引物... 为建立一种行之有效地检测新型鹅星状病毒(Novel Goose Astrovirus,NGAstV)基因1型(NGAstV⁃1)和基因2型(NGAstV⁃2)双重荧光定量PCR(quantitative polymerase chain reac⁃tion,qPCR),该研究根据NGAstV⁃1和NGAstV⁃2的ORF2蛋白设计鉴定引物,建立SYBR Green I的双重qPCR检测方法并用36份疑似感染NGAstV⁃1和NGAstV⁃2的雏鹅肝及肾组织样品进行评估。试验结果显示qPCR相关系数为0.997,对鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DT⁃MUV)、番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)、新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovi⁃rus,NDRV)、禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)、鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)扩增结果均为阴性;最低检测限度为1.12×10^(1) copies/μL;重复性试验结果显示:组间变异系数小于0.8%,组内变异系数小于0.5%,具有良好重复性。由此可知,该qPCR可高效、特异地检测NGAstV⁃1和NGAstV⁃2,为NGAstV监控提供切实可行的方法。 展开更多
关键词 新型鹅星状病毒 qPCR ORF2
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2021—2022年我国部分地区Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及Hexon基因序列分析 被引量:5
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作者 刘兆洁 许芬芬 +5 位作者 李雨泽 刘梦凡 苏镜文 李德钊 黄淑坚 梅堃 《中国家禽》 北大核心 2024年第5期38-45,共8页
为了解2021—2022年我国禽类养殖场中Ⅰ群禽腺病毒(GroupⅠfowladenovirus,FAdVⅠ)分子流行情况,试验通过病毒分离、PCR鉴定、鸡胚致病性试验、Hexon基因测序等方法对采集自2021—2022年我国15个地区共计250份疑似感染禽腺病毒的组织病... 为了解2021—2022年我国禽类养殖场中Ⅰ群禽腺病毒(GroupⅠfowladenovirus,FAdVⅠ)分子流行情况,试验通过病毒分离、PCR鉴定、鸡胚致病性试验、Hexon基因测序等方法对采集自2021—2022年我国15个地区共计250份疑似感染禽腺病毒的组织病料进行病原分析。结果显示:共分离出43株FAdVⅠ;Hexon基因扩增测序分析表明,其中36株与FAdV-C4型参考株核苷酸序列相似性在99.8%~100%,2株与FAdV-E8b型参考株核苷酸序列相似性达到93.8%~94.2%,1株与FAdV-A1型参考株核苷酸序列相似性达到99.5%,4株与FAdV-D11型参考株核苷酸序列相似性达到95.4%;FAdVⅠ感染在夏秋季节为高发期,阳性检出率较高的时间主要集中于4—10月。研究表明,我国15个主要养禽地区禽群中FAdVⅠ流行情况较为复杂,存在交叉感染和病毒基因重组风险,需要进一步调查其流行病学特征及研究其致病性。 展开更多
关键词 禽腺病毒 Hexon基因 血清型 流行病学
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F81细胞无血清悬浮驯化后培养猫泛白细胞减少症病毒的研究 被引量:4
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作者 张久鑫 邵宝顺 +6 位作者 朱辉 贾浩苒 梁琳 汤新明 崔尚金 梁瑞英 王龙涛 《动物医学进展》 北大核心 2023年第1期48-53,共6页
为解决国内猫泛白细胞减少症生物制品短缺的问题,筛选出适用于猫泛白细胞减少症病毒增殖的猫肾细胞系(F81),通过对贴壁F81进行降血清悬浮驯化培养,得到了无血清全悬浮培养F81细胞系。研究建立的F81细胞系在初始传代细胞密度为1×10^... 为解决国内猫泛白细胞减少症生物制品短缺的问题,筛选出适用于猫泛白细胞减少症病毒增殖的猫肾细胞系(F81),通过对贴壁F81进行降血清悬浮驯化培养,得到了无血清全悬浮培养F81细胞系。研究建立的F81细胞系在初始传代细胞密度为1×10^(6)cells/mL时,培养48 h后细胞密度可达到7.02×10^(6)cells/mL。对培养猫泛白细胞减少症病毒工艺进行摸索,确定最佳接毒工艺为同步接毒法,初始接毒细胞密度为1×10^(6)cells/mL、MOI为3.5×10^(-2),培养72 h后收毒,病毒滴度可达到10^(7.25)TCID_(50)/0.1 mL。该方法使用同源细胞系且未添加动物血清,为猫泛白细胞减少症生物制品生产降低了下游生产纯化难度,同时降低了生产成本,可显著提高产品核心竞争力。研究结果可为其他猫用生物制品相关研究提供参考。 展开更多
关键词 F81细胞 细胞驯化 无血清悬浮培养 猫泛白细胞减少症病毒
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2022年山东地区商品肉鸡15株H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析 被引量:2
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作者 邵明辰 董伟峰 刘兆洁 《家禽科学》 2023年第12期38-42,共5页
为了解2022年商品肉鸡H9N2亚型禽流感病毒在山东地区的流行情况,选取了15株分离鉴定的H9N2亚型禽流感毒株,对其HA基因进行序列测定和分子特征分析,并应用软件Mega6.0绘制HA基因进化树,进行遗传进化分析。结果表明,15株H9N2分离毒的HA裂... 为了解2022年商品肉鸡H9N2亚型禽流感病毒在山东地区的流行情况,选取了15株分离鉴定的H9N2亚型禽流感毒株,对其HA基因进行序列测定和分子特征分析,并应用软件Mega6.0绘制HA基因进化树,进行遗传进化分析。结果表明,15株H9N2分离毒的HA裂解位点氨基酸均为RSSR/GLF,具有典型低致病性AIV HA基因的特征;其第234位氨基酸均为亮氨酸(L),因此就具有了结合人流感受体的分子特性。进化树分析表明,2022年山东地区15株H9N2流行毒株HA基因属于4.2.5分支,细分为近几年在中国鸡群中流行的4.2.5a和4.2.5.c亚分支。 展开更多
关键词 H9N2亚型 禽流感病毒 HA基因 遗传演化分析
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