急性髓系白血病维奈克拉耐药细胞株的构建及耐药机制研究

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作者 刘凯帆 曾令基 +5 位作者 耿素霞 黄欣 李敏明 赖沛龙 翁建宇 杜欣 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第4期986-997,共12页

目的:构建BCL-2抑制剂维奈克拉耐药的急性髓系白血病(AML)细胞株,检测维奈克拉耐药细胞株对BCL-2家族蛋白的敏感性,并探讨其耐药的机制。方法:利用CCK-8法筛选对维奈克拉相对敏感的急性髓系白血病细胞株(MV4-11、MOLM13、OCI-AML2),低... 目的:构建BCL-2抑制剂维奈克拉耐药的急性髓系白血病(AML)细胞株,检测维奈克拉耐药细胞株对BCL-2家族蛋白的敏感性,并探讨其耐药的机制。方法:利用CCK-8法筛选对维奈克拉相对敏感的急性髓系白血病细胞株(MV4-11、MOLM13、OCI-AML2),低浓度维奈克拉持续诱导细胞株产生耐药,CCK-8法、流式细胞术分别检测耐药前后的细胞活力、凋亡率,BH3分析法分析耐药细胞株线粒体凋亡通路中促凋亡蛋白的失衡以及对药物敏感性的变化,并用实时荧光定量PCR检测耐药细胞系以及多药耐药患者BCL-2家族蛋白表达水平的改变。结果:成功构建了MV4-11、MOLM13、OCI-AML2的维奈克拉耐药细胞株,IC50均达到10倍以上,在相同浓度的维奈克拉作用下,耐药细胞凋亡率明显下降(P<0.05);BH3分析显示,耐药细胞株对促凋亡蛋白(如BIM、BID和NOXA)敏感性增加;实时荧光定量PCR检测结果显示,耐药细胞株中MCL1表达上调,NOXA1表达下调。维奈克拉耐药患者MCL1、NOXA1表达变化与本研究所建立的耐药细胞系结果一致。结论:本研究通过低浓度持续诱导法成功构建了维奈克拉耐药的AML细胞株,维奈克拉耐药导致了细胞线粒体凋亡通路的改变以及对促凋亡蛋白BIM、BID和NOXA的敏感性上升,这可能与耐药细胞中MCL1表达上调、NOXA1表达下调有关。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 维奈克拉 BCL-2家族 耐药 抗凋亡蛋白

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冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤ARH-77细胞凋亡及其可能机制 被引量：12

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作者 曲佳 郭坤元 +3 位作者 吴秉毅 宋朝阳 佘妙容 贺艳杰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期134-138,共5页

目的:探讨冬凌草甲素(oridonin,Ori)对人多发性骨髓瘤ARH-77细胞的致凋亡作用及其可能的机制。方法:不同浓度Ori(2.5、5、10μmol/L)作用于ARH-77细胞,MTT法检测ARH-77细胞的增殖,相差显微镜和Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态学改变... 目的:探讨冬凌草甲素(oridonin,Ori)对人多发性骨髓瘤ARH-77细胞的致凋亡作用及其可能的机制。方法:不同浓度Ori(2.5、5、10μmol/L)作用于ARH-77细胞,MTT法检测ARH-77细胞的增殖,相差显微镜和Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测ARH-77细胞的早期凋亡及线粒体膜电位(Δψm)的变化,caspase8凋亡试剂盒检测ARH-77细胞caspase8的活化。结果:Ori对ARH-77细胞的生长有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。10μmol/LOri作用于ARH-77细胞24h后可见细胞变小、胞质中出现空泡,并可见凋亡小体。流式细胞术结果显示,经不同浓度Ori(2.5、5、10μmol/L)处理后,细胞早期凋亡率分别为(15.07±0.78)%、(21.00±1.49)%和(27.45±2.47)%,均高于对照组的(5.27±1.46)%(P<0.01)。不同浓度Ori(2.5、5、10μmol/L)处理后,反映Δψm的绿色荧光细胞百分率分别为(26.80±0.75)%、(36.81±2.27)%和(49.48±1.10)%,均高于对照组的(16.96±0.50)%(P<0.01),提示ARH-77细胞凋亡有显著增加。同时,Ori处理可上调ARH-77细胞caspase8的活性(P<0.01)。结论:冬凌草甲素能明显诱导多发性骨髓瘤ARH-77细胞的凋亡,其机制可能与激活内、外源凋亡通路有关。 展开更多

关键词 冬凌草甲素 多发性骨髓瘤 凋亡 CASPASE 8 线粒体膜电位

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白血病细胞CD56抗原表达与急性髓系白血病患者预后的关系 被引量：12

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作者 李倩 李劲高 +7 位作者 周茂华 廖鹏军 彭琪 陈景 陈少贤 魏姗姗 黄晖婷 佘妙容 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期283-289,共7页

目的：探讨急性髓系白血病（AML）患者白血病细胞CD56抗原表达与预后的关系,阐明CD56抗原表达在预测AML患者预后中的作用。方法：收集171例年龄14~60岁、采用去甲氧柔红霉素＋阿糖胞苷（IA）方案首次诱导化疗的初治AML（AML-M3除外）患... 目的：探讨急性髓系白血病（AML）患者白血病细胞CD56抗原表达与预后的关系,阐明CD56抗原表达在预测AML患者预后中的作用。方法：收集171例年龄14~60岁、采用去甲氧柔红霉素＋阿糖胞苷（IA）方案首次诱导化疗的初治AML（AML-M3除外）患者的临床资料,流式细胞术检测白血病细胞CD56抗原的表达。采用COX回归模型分析患者生存时间的影响因素,采用双变量相关分析研究患者CD56阳性率与总生存时间（OS）间的关系。根据CD56抗原表达将患者分为CD56＋组（n=52）和CD56-组（n=119）,同时根据CD56阳性表达率,以50%为界限,将CD56＋组分为CD56阳性表达率≥50%组（n=39）和CD56阳性表达率〈50%组（n=13）,比较CD56＋组和CD56-组、CD56阳性表达率≥50%组和CD56阳性表达率〈50%组患者完全缓解率（CRR）、复发率、中位OS、中位无病生存时间（DFS）和生存率。结果：CD56＋组患者中位OS（14.2个月）低于CD56-组（39.4个月）、CD56阳性表达率≥50%组患者中位OS（11.7个月）低于CD56阳性表达率〈50%组（20.3个月）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。CD56＋组患者1年和2年生存率（61.5%、46.2%）低于CD56-组（75.6%、63.9%）（P〈0.05）;CD56阳性表达率≥50%组患者1年生存率（53.8%）与CD56阳性表达率〈50%组（84.6%）比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但CD56阳性表达率≥50%组患者2年生存率（41.0%）明显低于CD56阳性表达率〈50%组（61.5%）（P〈0.05）。CD56＋组患者CRR（63.5%）与CD56-组（68.9%）以及CD56阳性表达率≥50%组（58.9%）与CD56阳性表达率〈50%组（76.9%）比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。CD56＋组患者总复发率和1年内复发率（64.3%、37.5%）均高于CD56-组（34.3%、17.9%）（P〈0.05）,而CD56阳性表达率≥50%组总复发率、1年内复发率（75.0%、42.9%）与CD56阳性表达率〈50%组（37.5%、16.7%）比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;CD56＋组患者中位DFS（12.7个月）低于CD56-组（34.1个月）（P〈0.05）;CD56阳性表达率≥50%组与CD56阳性表达率〈50%组中位DFS比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：白血病细胞CD56抗原表达阳性是AML患者预后的不良因素,且阳性率越高,提示其预后越差。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 CD56 预后 总生存时间 无病生存时间

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AML1-ETO阳性急性髓系白血病患者c-kit突变及其临床意义 被引量：5

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作者 耿素霞 杜欣 +6 位作者 翁建宇 黄欣 陆泽生 钟立业 郭荣 吴穗晶 吴萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期839-842,共4页

本研究探讨AML1-ETO融合基因阳性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者c-kit突变的发生情况及其临床意义。采用PCR和直接测序法检测31例AML1-ETO阳性AML患者c-kit基因17外显子突变的发生情况,并分析c-kit基因突变与患者的临... 本研究探讨AML1-ETO融合基因阳性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者c-kit突变的发生情况及其临床意义。采用PCR和直接测序法检测31例AML1-ETO阳性AML患者c-kit基因17外显子突变的发生情况,并分析c-kit基因突变与患者的临床、实验室特征以及疗效的关系。结果表明:31例患者中14例检测到c-kit突变,突变率为45.16%,突变组男性患者的比例为71.43%、初诊时白细胞计数>10×109/L患者的比例为78.57%和伴有髓外浸润患者的比例为21.43%,均明显高于无突变组(29.41%、41.18%、0%,P=0.020,0.036,0.045),两组患者的年龄和骨髓原始细胞比例无明显差异(P=0.437和0.510)。c-kit突变和无突变组化疗完全缓解(CR)率(64.29%∶80%)和复发率(58.33%∶21.43%)的差异无统计学意义(P=0.344和0.054),而死亡率(57.14%)在c-kit突变组明显高于无突变组(20%,P=0.039)。结论:AML1-ETO阳性AML患者c-kit突变常见,突变患者预后差,常规检测c-kit突变对患者的危险度分层、预后评估和选择有效治疗方案有重要意义。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 AML1-ETO融合基因 c-kit突变

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TRX-2基因表达在急性白血病微小残留病灶监测中的作用 被引量：3

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作者 罗琼 黄志新 +1 位作者 罗柳萍 肖定璋 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期383-387,共5页

目的:探讨硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达在急性白血病(AL)微小残留病灶(MRD)监测中的价值。方法:采用实时荧光定量聚合酶反应(RQ-PCR)检测AL初发组(68例)、血液学完全缓解(CHR)组(57例)和复发组(25例)TRX-2基因表达的变化,25名骨髓捐献... 目的:探讨硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达在急性白血病(AL)微小残留病灶(MRD)监测中的价值。方法:采用实时荧光定量聚合酶反应(RQ-PCR)检测AL初发组(68例)、血液学完全缓解(CHR)组(57例)和复发组(25例)TRX-2基因表达的变化,25名骨髓捐献者作为正常对照组,TRX-2基因表达量的上限(91)为参考值上限,回顾分析复发组在CHR期(骨髓原始细胞计数<5%)TRX-2基因表达的水平,比较其与流式细胞术(FCM)检测的MRD的相关性。结果:TRX-2基因表达在完全缓解组与初治组和复发组之间差异有统计学意义(P<0.01);复发患者CHR期(骨髓原始细胞<5%),21例(21/25)TRX-2基因呈高表达(>91),与流式细胞术检测的MRD具有相关性(r=0.874,P=0.0005)。结论:TRX-2基因为急性白血病新的广谱标志,适用于MRD的监测。 展开更多

关键词 TRX-2基因 急性白血病 微小残留病灶 实时荧光定量聚合酶反应

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凋亡抑制基因aven在急性髓系白血病的表达及其临床意义 被引量：3

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作者 耿素霞 杜欣 +4 位作者 翁建宇 钟立业 郭荣 陆泽生 陈志红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期1424-1428,共5页

本研究旨在探讨AML患者凋亡抑制基因aven mRNA的表达情况,分析其临床意义,为预后评估提供实验依据。应用实时荧光定量PCR方法检测69例初诊AML患者外周血白细胞aven mRNA的表达水平,分析aven mRNA的表达水平与患者的年龄、性别、白细胞数... 本研究旨在探讨AML患者凋亡抑制基因aven mRNA的表达情况,分析其临床意义,为预后评估提供实验依据。应用实时荧光定量PCR方法检测69例初诊AML患者外周血白细胞aven mRNA的表达水平,分析aven mRNA的表达水平与患者的年龄、性别、白细胞数,血小板计数、血红蛋白和LDH水平、外周血和骨髓的原始细胞比例、FAB分型、患者的疗效和复发的关系,21名正常人的外周血作为对照。结果表明:69例初诊AML患者aven mRNA表达水平的中位值为37.2(11.72-178.93)%,正常人外周血白细胞aven mRNA表达水平中位值为28.81(10.81-50.98)%,AML患者aven mRNA表达水平明显高于正常人(p=0.006)。aven mRNA的表达水平与患者的年龄具有明显的相关性(r=0.25,p=0.039),以AML患者中位年龄(44岁)为界分为2组,年龄大于/等于44岁组aven mRNA表达水平[中位值50.08%,(18.88-152.02)%]明显高于年龄小于44岁组[中位值32.41%,(11.72 -178.93)%],(p=0.018)。aven mRNA的表达水平与患者Hb水平和FAB分型具有明显的相关性(r=0.29,p=0.019;r=0.253,p=0.036)。2个化疗疗程后aven mRNA表达水平低于中位值组的完全缓解率(25/30,83.33%)高于aven mRNA表达水平高于中位值组(21/30,70%),但差别无统计学意义(p=0.22)。复发患者aven mRNA的表达水平与无复发者相比无明显升高(p=0.076)。结论:初诊AML患者凋亡抑制基因aven mRNA的表达水平明显升高,可能与AML的发病有关,但尚未发现基因aven mRNA的表达情况与疾病的疗效和复发之间的关系。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 凋亡抑制基因 aven基因 实时定量PCR

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急性髓性白血病患者herg mRNA的表达及临床意义 被引量：1

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作者 耿素霞 杜欣 +4 位作者 翁建宇 郭荣 钟立业 陆泽生 吴穗晶 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第8期1367-1369,共3页

目的:了解hergmRNA在急性髓性白血病(acutemyeloid leukemia,AML)患者中的表达情况,并初步分析其临床意义。方法:通过实时荧光定量PCR方法检测48例初诊AML患者和15例正常人外周血hergmRNA的表达情况,分析hergmRNA的表达水平与AML患者的... 目的:了解hergmRNA在急性髓性白血病(acutemyeloid leukemia,AML)患者中的表达情况,并初步分析其临床意义。方法:通过实时荧光定量PCR方法检测48例初诊AML患者和15例正常人外周血hergmRNA的表达情况,分析hergmRNA的表达水平与AML患者的临床与实验室特征以及患者的疗效和复发的关系。结果:48例初诊AML患者检测到38例(79.17%)外周血表达hergmRNA,初诊AML患者及正常人外周血hergmRNA表达水平的中位值分别为0.03(0.00～2.49)%和0.35(0.04～1.09)%,AML患者明显低于正常人(P=0.00),AML患者外周血hergmRNA的表达水平与其临床和实验室特征无明显相关性。不表达hergmRNA患者的完全缓解率(9/10,90%)高于表达的患者(31/38,81.58%),复发率前者低于后者,但差异无统计学意义(P=0.53,0.27)。结论:初诊AML患者外周血hergmRNA的表达水平明显低于正常人,尚未发现hergmRNA的表达情况与疾病预后的明确关系。 展开更多

关键词 白血病 髓样 急性 HERG 实时定量PCR 预后

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MIF活性区域相互作用蛋白的筛选 被引量：1

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作者 肖定璋 陈少贤 +3 位作者 陈景 罗琼 黄曙方 丁红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1861-1867,共7页

目的:筛选与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)催化巯基蛋白质氧化还原酶(TPOR)活性域相互结合的蛋白。方法:采用酵母双杂交系统进行筛选。首先构建pBTM116-MIF诱饵质粒,转化酵母菌株L40;将表达MIF催化TPOR活性域的L40酵母菌株制备成感受态菌,... 目的:筛选与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)催化巯基蛋白质氧化还原酶(TPOR)活性域相互结合的蛋白。方法:采用酵母双杂交系统进行筛选。首先构建pBTM116-MIF诱饵质粒,转化酵母菌株L40;将表达MIF催化TPOR活性域的L40酵母菌株制备成感受态菌,在人骨肉瘤cDNA文库中筛选。通过组氨酸(HIS3报告基因活性和β半乳糖苷酶实验,初步确定与催化TPOR活性域片段相互作用的蛋白,最终通过免疫共沉淀和免疫荧光技术来确认。结果:分别构建含野生型MIF的pBTM116-MIF和野生型硫氧还蛋白样蛋白2(TXNL2)的pACT2-TXNL2质粒,将其共转染L40酵母菌。HIS3报告基因活性检测和β半乳糖苷酶阳性实验结果提示TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白。将重组质粒pcDNA3.1-Myc-TXNL2转染MCF7细胞,免疫共沉淀实验结果表明MIF抗体能够共沉淀Myc-TXNL2蛋白;免疫荧光结果显示Myc-TXNL2与MIF在细胞质中位置分布相同。结论:TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白。本研究为MIF氧化还原机制的研究提供了新的实验依据。 展开更多

关键词 巨噬细胞移动抑制因子 巯基蛋白质氧化还原酶 酵母双杂交系统 蛋白质相互作用 硫氧还蛋白样蛋白2

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TLR4炎症通路与慢性移植物抗宿主病合并干眼症的相关性 被引量：2

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作者 赖沛龙 王玉连 +1 位作者 翁建宇 杜欣 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第24期4048-4051,共4页

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路与慢性移植物抗宿主病(cGVHD)合并干眼症的关系,以揭示炎症反应在该疾病发生发展中的作用。方法:纳入18例诊断为cGVHD合并干眼症的患者,并以18例移植后发生cGVHD但没有合并干眼症患者为对照。采集两... 目的:探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路与慢性移植物抗宿主病(cGVHD)合并干眼症的关系,以揭示炎症反应在该疾病发生发展中的作用。方法:纳入18例诊断为cGVHD合并干眼症的患者,并以18例移植后发生cGVHD但没有合并干眼症患者为对照。采集两组患者的干眼评分、OSDI评分和Schirmer′s实验结果。收集患者外周静脉血并应用实时定量PCR或ELISA的方法检测TLR4、NF-κB、TNF-α的表达水平。结果:cGVHD合并干眼症患者外周血中的TLR4、NF-κB、TNF-α的m RNA水平均较对照组明显升高。相关性分析显示TLR4表达水平与cGVHD合并干眼症的OSDI评分呈正相关和Schirmer′s结果呈负相关。结论:TLR4介导的炎症信号通路参与了cGVHD合并干眼症的发生、发展。 展开更多

关键词 TOLL样受体4 慢性移植物抗宿主病 干眼症

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地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞敏感性研究 被引量：3

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作者 李倩 魏姗姗 +6 位作者 李劲高 陈少贤 陈景 黄晖婷 彭琪 夏平方 佘妙容 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期85-89,共5页

目的:探讨地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞(LSC)的作用及其机制。方法:应用免疫磁珠法从KG1a细胞中分选LSC。从健康供者的外周血分离纯化同种异体反应性自然杀伤(allo-reactive natural killer,a1-Io-NK)细胞;LDH法检测allo-N... 目的:探讨地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞(LSC)的作用及其机制。方法:应用免疫磁珠法从KG1a细胞中分选LSC。从健康供者的外周血分离纯化同种异体反应性自然杀伤(allo-reactive natural killer,a1-Io-NK)细胞;LDH法检测allo-NK细胞对LSC的杀伤作用,流式细胞术检测allo-NK细胞诱导LSC凋亡及LSC表面NKG2D配体MICA/B和ULBP1-3的表达。结果:地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,allo-NK细胞对LSC的杀伤率明显增高,在效靶比为5:1、10:1、20:1时分别为(60.52%±3.52%vs 22.08%±2.07%、73.93%±2.33%vs 28.99%±3.13%、83.08%±1.32%vs 36.44%±2.40%),差异有统计学意义(P<0.05);地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,在效靶比为10:1时,allo-NK细胞诱导LSC的凋亡率为7.84%±0.34%,明显高于LSC未处理组(3.33%±0.64%),差异有统计学意义(P<0.05);地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,LSC表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达上调,高于未处理组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:地西他滨可能通过上调NKG2D配体增强allo-NK细胞对LSC的杀伤作用。 展开更多

关键词 地西他滨 白血病干细胞 allo-NK细胞 NKG2D配体

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异基因造血干细胞移植术后嗜酸细胞增高临床意义 被引量：1

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作者 罗成伟 翁建宇 +3 位作者 吴穗晶 陆泽生 钟立业 杜欣 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第2期266-269,共4页

目的:本文回顾性分析了2001年7月至2010年3月在广东省人民医院接受异基因造血干细胞移植资料齐全的161例患者外周血嗜酸细胞的变化,旨在探讨移植后嗜酸细胞增高的危险因素及其临床意义。方法:评估异基因造血干细胞移植术后患者外周血嗜... 目的:本文回顾性分析了2001年7月至2010年3月在广东省人民医院接受异基因造血干细胞移植资料齐全的161例患者外周血嗜酸细胞的变化,旨在探讨移植后嗜酸细胞增高的危险因素及其临床意义。方法:评估异基因造血干细胞移植术后患者外周血嗜酸细胞的数量,超过0.5×109/L者定义为嗜酸细胞增高。结果:移植后有57例患者出现外周血嗜酸细胞增高,HLA不全相合是发生嗜酸细胞增高的危险因素(P=0.001)。Ⅱ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病(GVHD)(P=0.012)、慢性GVHD(P=0.001)是引起嗜酸细胞增高的高危因素。发生嗜酸细胞增高的患者移植后2年总生存率为85.9%,明显高于未发生嗜酸细胞增高患者(44.2%,P<0.001)。结论:外周血嗜酸细胞增高是异基因造血干细胞移植术后的常见并发症,其发生与Ⅱ-Ⅳ度急性GVHD及慢性GVHD有关,是评估患者预后的有效指标。 展开更多

关键词 异基因造血干细胞移植 嗜酸细胞增高 移植物抗宿主病

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手霉素通过上调P53诱导22Rv1前列腺癌细胞凋亡 被引量：2

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作者 李劲高 陈景 佘妙容 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第11期1812-1815,共4页

目的探讨手霉素对前列腺癌(prostate cancer,PC)细胞株22Rv1细胞的作用及其机制。方法使用MTT细胞毒性测定法评价人22Rv1细胞的活性,使用Annexin v和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染料标记细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡。采用免疫... 目的探讨手霉素对前列腺癌(prostate cancer,PC)细胞株22Rv1细胞的作用及其机制。方法使用MTT细胞毒性测定法评价人22Rv1细胞的活性,使用Annexin v和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染料标记细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡。采用免疫印迹技术检测Caspase-3、H2AX和P53蛋白的表达。结果手霉素有效杀伤前列腺癌22Rv1细胞,随着手霉素剂量的增加,细胞活性逐渐下降。手霉素能诱导22Rv1细胞凋亡,早期凋亡率和晚期凋亡率均增加。手霉素通过caspase途径有效诱导22Rv1细胞凋亡。同时手霉素快速增加22Rv1细胞H2AX磷酸化和上调P53的表达。结论手霉素通过上调P53的表达和激活H2AX诱导前列腺癌细胞凋亡,杀伤前列腺癌细胞。 展开更多

关键词 前列腺癌 凋亡 手霉素 H2AX P53

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手霉素对甲状腺癌KAT-18细胞的作用及其机制

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作者 李劲高 黄晖婷 +2 位作者 李倩 宛霞 佘妙容 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第15期2426-2429,共4页

目的:探讨手霉素对甲状腺未分化癌KAT-18细胞株的作用及其机制。方法:使用SRB细胞毒性测定法评价KAT-18细胞的活性,使用Annexin v和一氧化氮(NO)染料标记细胞,应用流式细胞术检测细胞内NO生成和细胞凋亡,二氢乙啶(DHE)方法测定细胞内超... 目的:探讨手霉素对甲状腺未分化癌KAT-18细胞株的作用及其机制。方法:使用SRB细胞毒性测定法评价KAT-18细胞的活性,使用Annexin v和一氧化氮(NO)染料标记细胞,应用流式细胞术检测细胞内NO生成和细胞凋亡,二氢乙啶(DHE)方法测定细胞内超氧阴离子。应用化学发光法测定超氧歧化酶(SOD)活性,Mn-SOD的表达采用免疫印迹技术检测。谷胱甘肽(GSH)含量采用荧光法测定。结果:手霉素有效杀伤KAT-18细胞,随着手霉素剂量的增加,细胞活性逐渐下降。手霉素诱导产生NO和超氧阴离子,降低GSH,但不影响Mn-SOD的蛋白表达和6 h的SOD活性,但24 h的SOD活性代偿性增加。手霉素诱导的凋亡与NO和超氧阴离子增加及GSH下降有关。用N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)抑制NO和超氧阴离子产生,提高GSH可减少手霉素诱导KAT-18细胞凋亡,从而逃避细胞被手霉素杀伤。结论:手霉素通过细胞内NO和超氧阴离子的产生诱导甲状腺癌细胞凋亡,杀伤甲状腺癌细胞。 展开更多

关键词 甲状腺未分化癌 手霉素 凋亡 反应性氧基 谷胱甘肽 超氧歧化酶

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手霉素通过阻断PI3K／Akt信号通路诱导U937白血病细胞凋亡 被引量：7

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作者 黄晖婷 李劲高 +2 位作者 肖定璋 陈景 佘妙容 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第7期1066-1069,共4页

目的:探讨手霉素对U937白血病细胞的作用及其机制。方法:2μmol/L的手霉素处理U937白血病细胞不同时间,分别使用Annexin V/PI试剂及ROS检测试剂标记细胞后,应用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内ROS生成,免疫印迹术检测PI3K、P-Akt、Akt... 目的:探讨手霉素对U937白血病细胞的作用及其机制。方法:2μmol/L的手霉素处理U937白血病细胞不同时间,分别使用Annexin V/PI试剂及ROS检测试剂标记细胞后,应用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内ROS生成,免疫印迹术检测PI3K、P-Akt、Akt等蛋白的表达。结果:与0 h对照组相比,随着处理时间的延长,手霉素诱导的U937细胞凋亡(P<0.05)及ROS生成逐渐增加(P<0.05),对PI3K/Akt信号通路活化的抑制逐渐增强。N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)(能有效抑制ROS产生的物质)可以阻断手霉素对U937细胞内PI3K/Akt信号通路的抑制及手霉素诱导的U937细胞凋亡。结论:手霉素通过诱导ROS产生进而抑制PI3K/Akt信号通路活化来诱导U937细胞凋亡。 展开更多

关键词 手霉素 U937细胞 ROS 凋亡 P13K/AKT信号通路

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慢性粒-单核细胞白血病患者BTLA及其配体HVEM的表达及其意义 被引量：6

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作者 李超 耿素霞 +7 位作者 李敏明 苏芳 陈晓梅 邓程新 黄欣 赖沛龙 翁建宇 杜欣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期56-62,共7页

目的:探讨B和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)在慢性粒单核细胞白血病(CMML)患者中的表达情况及其意义。方法:采用real-time PCR方法检测11例慢性粒单核细胞白血病患者和11例正常供者外周血BTLA及其配体HVEM mRNA的表达情况;流式细胞术检测外周... 目的:探讨B和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)在慢性粒单核细胞白血病(CMML)患者中的表达情况及其意义。方法:采用real-time PCR方法检测11例慢性粒单核细胞白血病患者和11例正常供者外周血BTLA及其配体HVEM mRNA的表达情况;流式细胞术检测外周血T淋巴细胞及γδT细胞表面BTLA及其HVEM的表达。结果:CMML患者外周血BTLA及其配体HVEM mRNA表达水平的中位值分别为0.009%和559.4%,明显低于正常对照组(0.053%和1031%)(P<0.001);外周血T淋巴细胞表面BTLA其配体HVEM的表达水平较正常对照组无明显差异(P=0.3031和0.2576),但CMML患者外周血T淋巴细胞比例(中位值:37.73%)却明显低于正常对照组(中位值:69.23%)(P=0.0005)。CMML患者外周血γδT细胞表面BTLA表达(中位值:23.26%)较对照组(中位值:52.64%)明显降低(P<0.05),HVEM表达无明显异常(P=0.2791)。结论:CMML患者外周血BTLA以及配体HVEM的表达、T淋巴细胞比例以及γδT细胞表面BTLA的表达降低,这些异常对T细胞功能及患者的预后和疗效的影响尚需进一步研究。 展开更多

关键词 慢性粒单核细胞白血病 BTLA HVEM T淋巴细胞

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骨髓增生异常综合征患者骨髓γδT细胞及其亚群的水平及意义 被引量：3

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作者 奚睿汀 耿素霞 +6 位作者 黄欣 李敏明 邓程新 王玉连 黄励思 翁建宇 杜欣 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第24期3195-3199,共5页

目的了解骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓γδT细胞及其亚群的水平,探索MDS患者骨髓微环境的免疫缺陷状况。方法收集MDS患者治疗前后及正常供者骨髓样本,多色流式检测骨髓γδT细胞及亚群水平,并分析MDS患者... 目的了解骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓γδT细胞及其亚群的水平,探索MDS患者骨髓微环境的免疫缺陷状况。方法收集MDS患者治疗前后及正常供者骨髓样本,多色流式检测骨髓γδT细胞及亚群水平,并分析MDS患者治疗后各细胞亚群的变化。结果MDS患者骨髓γδT细胞和滤泡辅助性γδT细胞明显降低(P<0.05)。不同分化程度的γδT细胞,仅初始γδT细胞水平明显降低(P=0.037),中枢记忆、效应记忆和终末分化γδT细胞MDS患者与正常供者差异无统计学意义(P>0.05)。免疫检查点PD1和TIM3阳性的γδT细胞分别存在一定程度的降低和升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后获得疗效患者的γδT细胞和初始γδT细胞水平较治疗前明显升高,效应记忆γδT细胞较治疗前明显降低(P<0.05),85.71%(6/7)的MDS患者γδ+TIM3+T细胞水平治疗后不同程度的降低。结论MDS患者骨髓微环境γδT细胞及其亚群的水平存在不同程度的异常,治疗有效的患者,异常的γδT细胞恢复,通过γδT细胞及亚群水平检测可了解MDS的免疫缺陷状态,有可能作为判断疗效的指标,并为抗肿瘤免疫疗法提供新的资料。 展开更多

关键词 骨髓增生异常综合征 ΓΔT细胞 滤泡辅助性γδT细胞 调节性γδT细胞 程序性死亡受体1 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3

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荧光素酶标记的KG1a细胞构建急性髓系白血病小鼠模型及其鉴定 被引量：1

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作者 张维娅 曾高淳 +7 位作者 陈晓梅 耿素霞 王玉连 罗琼 罗柳萍 赖沛龙 翁建宇 杜欣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1429-1435,共7页

目的:利用荧光素酶标记的KG1a急性髓系细胞株构建能够在活体水平观察肿瘤负荷的急性髓系白血病小鼠模型。方法:经慢病毒及嘌呤霉素筛选构建能稳定表达荧光素酶的KG1a细胞(KG1a-Luc细胞);将18只8-12周龄的雄性NOD-SCID-IL2rg^(-/-)小鼠... 目的:利用荧光素酶标记的KG1a急性髓系细胞株构建能够在活体水平观察肿瘤负荷的急性髓系白血病小鼠模型。方法:经慢病毒及嘌呤霉素筛选构建能稳定表达荧光素酶的KG1a细胞(KG1a-Luc细胞);将18只8-12周龄的雄性NOD-SCID-IL2rg^(-/-)小鼠随机均分为2组,模型组小鼠每只尾静脉注射200μl含有5×10^(6)KG1a-Luc细胞的PBS,对照组小鼠每只尾静脉注射200μl PBS;通过生物发光成像技术于活体水平监测小鼠肿瘤负荷;尾静脉采血后,经流式细胞术检测小鼠外周血中肿瘤细胞占比;颈椎脱臼法处死小鼠后,取小鼠骨髓及脾脏制备涂片,取肝脏制备石蜡切片,染色后镜下观察肿瘤浸润情况;记录并比较2组小鼠生存时间。结果:经过慢病毒转染、嘌呤霉素筛选后能够得到稳定表达荧光素酶的KG1a细胞;d 17使用生物发光成像技术显示模型组小鼠出现明显荧光;各模型组小鼠的外周血中均能检出KG1a-Luc肿瘤细胞群,平均比率为(16.27±6.66)%;形态学及病理学检查显示,骨髓、脾脏及肝脏均有KG1a-Luc细胞浸润;与对照组相比,模型组小鼠的生存时间显著缩短,其中位生存时间为30.5 d(95%CI:0.008-0.260)。结论:NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠经尾静脉注射5×10^(6)KG1a-Luc细胞后能够成功稳定建立在活体水平观察肿瘤负荷急性髓系白血病小鼠模型。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 KG1a细胞 荧光素酶 动物模型 活体荧光成像

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异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒及多瘤病毒感染相关临床特征 被引量：4

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作者 吴际 郑有为 +3 位作者 黄革 刘胜男 罗柳萍 侯铁英 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期132-137,共6页

目的探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后人巨细胞病毒(HCMV)和多瘤病毒(BKV和JCV)感染相关临床特征。方法收集2016年6月—2017年12月共53例行allo-HSCT的恶性血液病患者临床资料。移植当天开始监测患者外周血与尿的HCMV、BKV和JC... 目的探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后人巨细胞病毒(HCMV)和多瘤病毒(BKV和JCV)感染相关临床特征。方法收集2016年6月—2017年12月共53例行allo-HSCT的恶性血液病患者临床资料。移植当天开始监测患者外周血与尿的HCMV、BKV和JCV核酸载量,每周一次至100 d。分析病毒感染的发生率、发生时间、相关临床表现及危险因素。结果 51例患者发生病毒感染,感染率为96.23%。其中,HCMV感染率为54.72%(29/53)、BKV感染率为77.36%(41/53)、JCV感染率为28.30%(15/53)。肺部感染、急性移植物抗宿主病(aGVHD)和出血性膀胱炎(HC)的发生率分别为54.72%、58.49%和20.75%。危险因素分析显示:发生aGVHD(OR=24.61,95%CI:2.30～46.24)、预处理采用全身照射(OR=33.39,95%CI:1.57～79.13)及使用ATG(OR=24.77,95%CI:1.16～52.58)是影响HCMV血症的独立危险因素,HLA全相合(OR=0.003,95%CI:0.00～0.10)可降低发生HCMV血症的风险;预处理采用全身照射(OR=15.10,95%CI:1.14～39.27)是影响BKV尿症的独立危险因素,供受者血型相合(OR=0.07,95%CI:0.01～0.64)可降低发生BKV尿症的风险。结论移植术后应尽早监测受者血及尿中HCMV及多瘤病毒感染情况,以期及时预防及减少并发症的发生。 展开更多

关键词 异基因造血干细胞移植术 人巨细胞病毒 多瘤病毒 危险因素

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C5aR在慢性移植物抗宿主病中的表达及其作用机制

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作者 王玉连 翁建宇 +8 位作者 赖沛龙 曾令基 陈晓梅 黄欣 耿素霞 凌伟 罗成伟 吴穗晶 杜欣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期925-929,934,共6页

目的:探讨补体5a(C5a)及其受体(C5aR)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)中的表达及其作用机制。方法:用流式细胞术检测20例cGVHD患者及9例健康供者外周血淋巴细胞中C5aR的表达及CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞(Tregs)在CD4^+T细胞中的比例,... 目的:探讨补体5a(C5a)及其受体(C5aR)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)中的表达及其作用机制。方法:用流式细胞术检测20例cGVHD患者及9例健康供者外周血淋巴细胞中C5aR的表达及CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞(Tregs)在CD4^+T细胞中的比例,并分析两者的相关性;将体外分离培养小鼠脾细胞分为对照组及重组小鼠C5a蛋白(rmC 5a)刺激组,用流式细胞术检测2组Tregs在CD4^+T细胞中的表达比例;另外,提取患者外周血单个核细胞进行体外培养,分为空白对照组及C5aR拮抗剂(C5aRA)组,用流式细胞术检测2组Tregs在CD4^+T细胞中的表达比例。结果:cGVHD患者外周血淋巴细胞表面C5aR的表达明显增多,而Tregs在CD4^+T细胞中的比例明显减少,两者呈显著负性相关(P<0.05);体外培养小鼠脾细胞结果显示C5a下调Tregs在CD4^+T细胞中的比例;而体外培养患者外周血单个核细胞显示阻断C5aR可上调Tregs在CD4^+T细胞中的比例。结论:C5a/C5aR可能通过抑制Tregs的分化来介导cGVHD的发生发展。 展开更多

关键词 补体5a 补体5a受体 慢性移植物抗宿主病 调节性T细胞

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