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彗星分析法研究靶向SMPD1的siRNA对小鼠卵母细胞凋亡的保护作用
1
作者
张仁礼
孟锦绣
+7 位作者
闻安民
黄跃深
周灿权
王凯
贾磊
刘彩霞
邓新燕
陈系古
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第11期2165-2167,2170,共4页
目的建立彗星分析小鼠卵母细胞凋亡的模型,研究靶向酸性鞘磷酯酶1(SMPD1)的siRNA对卵子自发性凋亡的保护作用,为建立新的生殖保护方法奠定基础。方法通过同源性分析并结合siRNA设计软件设计并化学合成靶向SMPD1的3条siRNA,用超排卵技术...
目的建立彗星分析小鼠卵母细胞凋亡的模型,研究靶向酸性鞘磷酯酶1(SMPD1)的siRNA对卵子自发性凋亡的保护作用,为建立新的生殖保护方法奠定基础。方法通过同源性分析并结合siRNA设计软件设计并化学合成靶向SMPD1的3条siRNA,用超排卵技术对雌性BALB/c小鼠进行超排卵并杀鼠取卵,利用显微注射的方法将siRNA分别导入超排获得的小鼠卵子,分别于48h和72h观察卵子形态学变化,通过彗星分析检测卵细胞DNA破坏程度来分析卵子自发性凋亡情况。结果彗星分析法观察到小鼠卵母细胞在体外培养24h可见少量DNA泳出,48h可见大量DNA泳出;通过显微注射导入siRNA48h后的彗星分析结果显示,其中1对siRNA注射组,即siRNA003组的卵母细胞泳出量与其它2个siRNA注射组及对照组相比显著降低(P<0.01),其它2对siRNA注射组与对照组无明显差异。结论靶向SMPD1的siRNA能够有效保护卵子的自发性凋亡,有望成为新的生殖保护方法。
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关键词
酸性鞘磷脂酶1
卵母细胞
细胞凋亡
RNA干扰
彗星分析法
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职称材料
高葡萄糖培养增加H9C2成心肌细胞G蛋白偶联受体激酶2基因表达
被引量：
1
2
作者
陈红梅
林秋雄
+2 位作者
谭虹虹
杨华章
余细勇
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期472-474,共3页
目的前期临床研究发现2型糖尿病患者淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因表达升高,为进一步探讨GRK2表达升高的分子机制,检测高糖对GRK2基因表达的影响。方法H9C2成心肌细胞随机分成5组分别加入以下培养液:空白对照组和不同葡萄糖梯...
目的前期临床研究发现2型糖尿病患者淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因表达升高,为进一步探讨GRK2表达升高的分子机制,检测高糖对GRK2基因表达的影响。方法H9C2成心肌细胞随机分成5组分别加入以下培养液:空白对照组和不同葡萄糖梯度浓度组(0,5.5,12.5,25,33mmol/L),培养72h后采用RT-PCR,WESTERN BLOTTING分别测定GRK2-mRNA和磷酸化Akt(Ser473)蛋白含量比值。结果随着葡萄糖浓度升高,H9C2成心肌细胞的GRK2-mRNA表达水平呈剂量依赖性增加,pearson相关分析提示提示两者间存在直线相关(R=0.683,P<0.001),采用Student Newman-Keuls'q检验,各葡萄糖培养组与无糖培养比较均存在统计学差异(P=0.028,P=0.009,P<0.001)。而磷酸化Akt(Ser473)蛋白表达水平减少,各组间比较存在统计学意义(F=369.1,P<0.001),回归分析和pearson相关分析提示葡萄糖浓度与磷酸化AKt(Ser473)蛋白的表达呈线性负相关(R=-0.913,P<0.001)。结论高糖培养使GRK2表达升高,可能是参与心肌细胞葡萄糖利用受损的重要机制之一。
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关键词
葡萄糖
成心肌细胞
G蛋白偶联受体激酶2
糖尿病
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职称材料
题名
彗星分析法研究靶向SMPD1的siRNA对小鼠卵母细胞凋亡的保护作用
1
作者
张仁礼
孟锦绣
闻安民
黄跃深
周灿权
王凯
贾磊
刘彩霞
邓新燕
陈系古
机构
广东省
医学
科学院
/广东省
人民医院
生殖
医学
中心
广东省医学科学院/广东省人民医院医学研究中心
广东省
医学
科学院
/广东省
人民医院
皮肤科
中山大学附属第一
医院
生殖
医学
中心
中山大学实验动物
中心
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第11期2165-2167,2170,共4页
基金
国家自然科学基金(30400474
30700327)
+5 种基金
广东省自然科学基金(4009374
9151009101000011
7300047)
广东省医学科研基金(B2004038
B2006003)
广东省人口计生委科研项目(2009227)
文摘
目的建立彗星分析小鼠卵母细胞凋亡的模型,研究靶向酸性鞘磷酯酶1(SMPD1)的siRNA对卵子自发性凋亡的保护作用,为建立新的生殖保护方法奠定基础。方法通过同源性分析并结合siRNA设计软件设计并化学合成靶向SMPD1的3条siRNA,用超排卵技术对雌性BALB/c小鼠进行超排卵并杀鼠取卵,利用显微注射的方法将siRNA分别导入超排获得的小鼠卵子,分别于48h和72h观察卵子形态学变化,通过彗星分析检测卵细胞DNA破坏程度来分析卵子自发性凋亡情况。结果彗星分析法观察到小鼠卵母细胞在体外培养24h可见少量DNA泳出,48h可见大量DNA泳出;通过显微注射导入siRNA48h后的彗星分析结果显示,其中1对siRNA注射组,即siRNA003组的卵母细胞泳出量与其它2个siRNA注射组及对照组相比显著降低(P<0.01),其它2对siRNA注射组与对照组无明显差异。结论靶向SMPD1的siRNA能够有效保护卵子的自发性凋亡,有望成为新的生殖保护方法。
关键词
酸性鞘磷脂酶1
卵母细胞
细胞凋亡
RNA干扰
彗星分析法
Keywords
sphingomyelin phosphodiesterase
oocytes
apoptosis
RNA
Comet assay
分类号
R-332 [医药卫生]
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职称材料
题名
高葡萄糖培养增加H9C2成心肌细胞G蛋白偶联受体激酶2基因表达
被引量：
1
2
作者
陈红梅
林秋雄
谭虹虹
杨华章
余细勇
机构
广东省
医学
科学院
广东省
人民医院
内分泌科
广东省医学科学院/广东省人民医院医学研究中心
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期472-474,共3页
基金
国家自然科学基金(30772142,30772620)
广东省医学科研基金(A2007005)
文摘
目的前期临床研究发现2型糖尿病患者淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因表达升高,为进一步探讨GRK2表达升高的分子机制,检测高糖对GRK2基因表达的影响。方法H9C2成心肌细胞随机分成5组分别加入以下培养液:空白对照组和不同葡萄糖梯度浓度组(0,5.5,12.5,25,33mmol/L),培养72h后采用RT-PCR,WESTERN BLOTTING分别测定GRK2-mRNA和磷酸化Akt(Ser473)蛋白含量比值。结果随着葡萄糖浓度升高,H9C2成心肌细胞的GRK2-mRNA表达水平呈剂量依赖性增加,pearson相关分析提示提示两者间存在直线相关(R=0.683,P<0.001),采用Student Newman-Keuls'q检验,各葡萄糖培养组与无糖培养比较均存在统计学差异(P=0.028,P=0.009,P<0.001)。而磷酸化Akt(Ser473)蛋白表达水平减少,各组间比较存在统计学意义(F=369.1,P<0.001),回归分析和pearson相关分析提示葡萄糖浓度与磷酸化AKt(Ser473)蛋白的表达呈线性负相关(R=-0.913,P<0.001)。结论高糖培养使GRK2表达升高,可能是参与心肌细胞葡萄糖利用受损的重要机制之一。
关键词
葡萄糖
成心肌细胞
G蛋白偶联受体激酶2
糖尿病
Keywords
glucose
cardiomyoblasts
GRK2
diabetes
分类号
R587.1 [医药卫生—内分泌]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
彗星分析法研究靶向SMPD1的siRNA对小鼠卵母细胞凋亡的保护作用
张仁礼
孟锦绣
闻安民
黄跃深
周灿权
王凯
贾磊
刘彩霞
邓新燕
陈系古
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
高葡萄糖培养增加H9C2成心肌细胞G蛋白偶联受体激酶2基因表达
陈红梅
林秋雄
谭虹虹
杨华章
余细勇
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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