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降落和重叠延伸PCR构建靶向肿瘤干细胞腺病毒载体及感染实验 被引量:1
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作者 张超 刘国炳 +2 位作者 田平阁 周春平 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1513-1517,共5页
目的应用降落和重叠延伸PCR法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体,观察其对CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸PCR技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序列,定向插入真核表达质粒pE... 目的应用降落和重叠延伸PCR法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体,观察其对CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸PCR技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序列,定向插入真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1.KNOB△HI,同时在缺失HI环部位引入EcoRV限制性酶切位点。在此基础上,用降落PCR克隆纤毛基因全长编码区序列,构建出腺病毒穿梭质粒pNEB-F5。利用凝胶图像分析和基因测序验证所构建质粒的正确性。再与pAdEasy-1,pShuttle-GFP在E.coli BJ5183中同源重组,得腺病毒载体Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP。用Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP分别感染CD133+人大肠癌细胞株SW480,通过荧光显微镜观察感染效率。结果降落PCR和重叠延伸PCR都扩增出特异性条带,测序结果与预期相符。与Ad5-GFP相比,Ad5FHI-GFP对CD133+人大肠癌细胞株SW480有显著提高。结论利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体,利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体,其对CD133+人大肠癌细胞株SW480实验显示Ad5FHI-GFP组感染效率明显强于Ad5-GFP组。 展开更多
关键词 降落PCR 重叠延伸PCR 肿瘤干细胞 复制缺陷型腺病毒 穿梭质粒
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靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定 被引量:5
2
作者 田平阁 周春平 +5 位作者 张超 杨慧 吴小金 陆滟霞 刘国炳 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期761-766,共6页
目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞表面标记物CD133细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133的特异性短肽。应用夹心ELISA选择出... 目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞表面标记物CD133细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133的特异性短肽。应用夹心ELISA选择出结合较强的克隆。提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列。通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况。结果 4轮液相筛选后,与CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍。经ELISA鉴定的20个噬菌体单克隆中,有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义。经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强。结论成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子的高亲和力多肽的方法切实可行。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 CD133 噬菌体展示 肽库
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肿瘤干细胞表面标记物CD133高亲和结合肽的筛选 被引量:2
3
作者 孙晋敏 张超 李学农 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期476-479,共4页
目的:应用噬菌体肽库技术筛选肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合短肽,为干细胞研究、肿瘤治疗及抗肿瘤转移研究提供新的技术和工具。方法:利用链霉亲和素与生物素的高度亲和力,以生物素标记的鼠CD133细胞外段(bio-CD133)为靶,对噬菌... 目的:应用噬菌体肽库技术筛选肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合短肽,为干细胞研究、肿瘤治疗及抗肿瘤转移研究提供新的技术和工具。方法:利用链霉亲和素与生物素的高度亲和力,以生物素标记的鼠CD133细胞外段(bio-CD133)为靶,对噬菌体七肽库进行液相筛选,应用夹心ELISA选择出结合较强的克隆,提取DNA并测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性。结果:通过三轮体外液相筛选,得到结合能力较强的高亲和结合肽,5条完全一致的重复序列为APSPMIW和3条完全一致的重复序列为LQNAPRS,竞争性阻断实验证实其特异性较强。结论:利用噬菌体肽库技术成功地筛选出具有较高亲和力和特异性的CD133结合肽,表明以生物素标记的小分子多肽为靶筛选结合肽的技术具有可行性。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 细菌噬菌体 肽库 肿瘤转移
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鼻咽癌血清比较蛋白质组学研究 被引量:18
4
作者 廖秋林 陈晓东 +1 位作者 赵亮 丁彦青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期154-158,共5页
目的采用双向电泳-质谱技术优化肿瘤抗原筛选方法,筛选鼻咽癌肿瘤抗原。方法鼻咽癌转移组、鼻咽癌未转移组和正常对照组血清先采用高丰度蛋白去除、脱盐预处理等以优化双向电泳,图像分析3组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸... 目的采用双向电泳-质谱技术优化肿瘤抗原筛选方法,筛选鼻咽癌肿瘤抗原。方法鼻咽癌转移组、鼻咽癌未转移组和正常对照组血清先采用高丰度蛋白去除、脱盐预处理等以优化双向电泳,图像分析3组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定。结果通过调整、优化各个阶段的实验条件,实验结果比较稳定,重复性也比较好,分辨率得到一定的提高。图谱比较所得29个差异蛋白质点,成功鉴定了23种蛋白质。与正常组比较,转铁蛋白、锌指蛋白544、甲状腺激素结合蛋白、NM23-H1蛋白和FAD合成酶在两组鼻咽癌患者中低表达,12-脂氧合酶、血清淀粉样蛋白A1前体、细胞色素P450、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1等在两组鼻咽癌中均高表达,其中12-脂氧合酶、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1在鼻咽癌转移组中比未转移组中表达增高,而热休克蛋白70则只在鼻咽癌转移组表达。结论双向电泳-质谱技术可发现鼻咽癌发生发展过程中血清蛋白表达谱质或量的变化,从而为鼻咽癌的早期诊断和治疗奠定基础。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 血清蛋白质组学 组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1 热休克蛋白70
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CXCR4/SDF-1对鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响 被引量:11
5
作者 邱际华 刘求真 +2 位作者 陈丽 焦锋 姚开泰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期598-600,共3页
目的观察鼻咽癌不同恶性程度的细胞中趋化因子受体CXCR4的表达,检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的增殖作用,SDF-1对CXCR4阳性肿瘤细胞的趋化作用,探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响。方法以鼻咽癌成瘤高转... 目的观察鼻咽癌不同恶性程度的细胞中趋化因子受体CXCR4的表达,检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的增殖作用,SDF-1对CXCR4阳性肿瘤细胞的趋化作用,探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响。方法以鼻咽癌成瘤高转移细胞株5-8F及成瘤不转移细胞株6-10B为研究对象,采用Westernblot免疫印迹法检测鼻咽癌细胞株CXCR4蛋白的表达情况,SDF-1及CXCR4阻断剂AMD3100作用于两种细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力,体外迁徙实验检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的趋化作用。结果5-8F细胞株CXCR4蛋白的表达明显高于6-10B细胞株;SDF-1能明显增强5-8F细胞增殖与迁移能力,CXCR4阻断剂AMD3100作用后,5-8F细胞增殖与迁移能力明显降低;SDF-1对6-10B细胞的迁移及增殖能力无明显影响。结论CXCR4/SDF-1生物学轴与鼻咽癌细胞株的增殖与迁移有一定的关系,AMD3100可明显抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移能力。 展开更多
关键词 鼻咽癌 增殖 迁移 CXCR4 SDF-1
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血清蛋白质组学技术及研究进展 被引量:22
6
作者 廖秋林 陈晓东 丁彦青 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期402-407,共6页
In recent years,great progress has been made in the theory and technology of proteomics.As embranchment of proteomics,serum proteomics has been payed more and more attention also.The advanced techniques have been appl... In recent years,great progress has been made in the theory and technology of proteomics.As embranchment of proteomics,serum proteomics has been payed more and more attention also.The advanced techniques have been applied in serum proteomics research,which promote the development of the methodology.A great advance has been made in serum proteomics research for seeking associated tumor markers,pharmacy and some non-cancer diseases. 展开更多
关键词 蛋白质组 双向凝胶电泳 光谱分析 质量 血清
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Hsa-miR-186在结肠癌细胞中的表达及作用 被引量:6
7
作者 陈芳 周畅 +4 位作者 陆艳霞 袁理 彭皤莉 郑林 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期654-660,共7页
目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含miR-186前体序列... 目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含miR-186前体序列在内的基因片段,并将其克隆至PLVYHM载体,将PLVTHM-miR186质粒转染SW620细胞,流式分选慢病毒感染的SW620细胞;CCK-8法、划痕实验和Transwell检测细胞检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western Blot检测靶基因YY1蛋白水平的表达。结果与癌组织相比,12例癌组织中miR-186的平均表达量为0.0024±0.0027-显著低于癌旁组织的0-066±0.068,P=0.008;miR-186在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620和LOVO相对表达量分别为0.118±0.138和0.157±0.001,与在低转移潜能HT-29细胞中表达量1.000±0.00,差异具有统计学意义P<0.05;质粒双酶切及测序鉴定PLVTHM-hsa-miRl86重组质粒构建成功;荧光定量PCR表明稳定过表达miR-186的结肠癌细胞株SW620构建成功,且过表达miR-186后降低了细胞的增殖、迁移及侵袭能力,差异均具有统计学意义P<0.05。稳定过表达miR-186的细胞中,miR-186的表达明显高于对照组和未处理组,YY1蛋白质水平有所下降。结论 hsa-miR-186在结肠癌组织以及在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620、L0VO中低表达,具有类似抑癌基因的作用;成功构建PLVTHM-miR186慢病毒重组质粒,并稳定转染结肠癌细胞SW620,抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力。miR-186调控YY1表达可能是抑制结直肠癌生物特性的重要机制之一。 展开更多
关键词 结肠癌细胞 HSA MIR 186 慢病毒 增殖 迁移 侵袭
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Sox2下游调控蛋白的筛选及其对大肠癌细胞增殖、迁移的影响 被引量:4
8
作者 周敏 陆滟霞 +5 位作者 袁理 郑林 刘燕 洪敏 张超 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1594-1600,共7页
目的分析大肠癌细胞转录因子Sox2对大肠癌细胞增殖及迁移的影响。方法应用SDS-PAGE蛋白电泳,结合考马斯亮蓝及镀胺银染色方法,筛选差异蛋白。质谱分析筛选Sox2下游调控蛋白,应用定量PCR(QPCR)及Western blotting验证和鉴定下游调控蛋白... 目的分析大肠癌细胞转录因子Sox2对大肠癌细胞增殖及迁移的影响。方法应用SDS-PAGE蛋白电泳,结合考马斯亮蓝及镀胺银染色方法,筛选差异蛋白。质谱分析筛选Sox2下游调控蛋白,应用定量PCR(QPCR)及Western blotting验证和鉴定下游调控蛋白。Cell Counting Kit-8(CCK8)观察Sox2对大肠癌细胞增殖的影响,Transwell实验观察Sox2对迁移能力的影响。结果应用蛋白组学技术成功筛选出Sox2下调蛋白S3a、上调蛋白ENO1、Gama-actin。QPCR和Western blotting显示,Sox2过表达后,大肠癌细胞S3a表达减少(P<0.005),ENO1表达增加(P<0.05),Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力提高(P<0.05);Sox2干扰后,大肠癌细胞S3a表达增加(P<0.05),ENO1表达减少(P<0.001),Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力下降(P<0.05)。结论 Sox2负向调控S3a的表达,正向调控ENO1的表达,促进大肠癌细胞增殖及迁移。 展开更多
关键词 大肠癌细胞 质谱分析 SOX2 调控 S3a ENO1 增殖 迁移
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稳定过表达mir-101结直肠癌细胞株的建立及其靶基因的鉴定 被引量:5
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作者 刘燕 陆滟霞 +2 位作者 周敏 张超 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期928-933,共6页
目的构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量PCR技术检测结直肠癌细胞株中mir-101的表达水平。利用GV209-mir101慢病毒感染SW620细胞,建立稳定过表达mir-101的细胞株。扩增包含mir-101结合位点的... 目的构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量PCR技术检测结直肠癌细胞株中mir-101的表达水平。利用GV209-mir101慢病毒感染SW620细胞,建立稳定过表达mir-101的细胞株。扩增包含mir-101结合位点的RAC1 3'UTR基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-Rac1-Mut;并用双萤光素酶报告实验检测RAC1 3'UTR相对荧光素酶活性。结果稳定过表达mir-101的细胞株中,mir-101的表达明显高于对照组。双萤光素酶报告实验证实mir-101 inhibitors可以上调3'UTR相对荧光素酶活性。稳定过表达mir-101,RAC1表达下调;而干扰mir-101之后RAC1表达上调。结论成功构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株。RAC1是mir-101的靶基因。 展开更多
关键词 结直肠癌 mir-101 慢病毒 双荧光素酶报告实验 RAC1
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PTEN蛋白在肺癌中表达的定量分析及临床意义 被引量:10
10
作者 郅程 齐文娟 +7 位作者 周军华 李玉梅 梅娟娟 严智敏 徐小艳 林妮 陈清 申洪 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第12期2111-2114,共4页
目的:定量分析PTEN蛋白在肺癌、肺良性病变及正常肺组织中的表达特点及其临床意义。方法:用免疫组化SP法检测肺癌组织、肺良性病变和正常肺组织中PTEN蛋白的表达,用LeicaQ500MC图像分析系统对PTEN蛋白表达的阳性强度进行定量测试。结果:... 目的:定量分析PTEN蛋白在肺癌、肺良性病变及正常肺组织中的表达特点及其临床意义。方法:用免疫组化SP法检测肺癌组织、肺良性病变和正常肺组织中PTEN蛋白的表达,用LeicaQ500MC图像分析系统对PTEN蛋白表达的阳性强度进行定量测试。结果:PTEN在正常肺组织和肺良性病变中表达的阳性单位(PU值)呈正态分布,在肺癌中呈正偏态分布,三者间的表达差异具有统计学意义(P=0.000);肺癌组织中PTEN的表达显著低于肺良性病变和正常肺组织;肺的鳞癌、腺癌、大细胞癌和小细胞癌中PTEN蛋白表达的PU值基本相同,差异无统计学意义(P=0.789);肺癌中PTEN的表达与肿瘤的大体类型有关(P=0.023),周围型肺癌PTEN蛋白表达的PU值明显低于中央型肺癌;有淋巴结转移的肺癌组织PTEN的PU值(M=8.68)大于无淋巴结转移的肺癌组织(M=5.47,Z=-0.894,P=0.058);肺癌中PTEN的表达强度与患者年龄、性别、吸烟史、癌组织分化程度及pTNM分期均无关(P>0.05),不同肺良性病变(肺大泡、支气管扩张和肺结核)PTEN的表达差异无统计学意义(P=0.889)。结论:肺癌组织PTEN蛋白的表达明显低于非肺癌组织,且呈正偏态分布;周围型肺癌中PTEN的表达低于中央型肺癌。PTEN蛋白的表达有助于肺癌与正常肺组织及不同大体类型肺癌的区别。 展开更多
关键词 肺肿瘤 PTEN 免疫组化 定量分析
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具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定 被引量:13
11
作者 张艳飞 刘莉 丁彦青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期126-130,共5页
目的筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料。方法采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克... 目的筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料。方法采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异。结果体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快;体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱。结论从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型。 展开更多
关键词 结肠癌 肝转移 细胞亚系 SW480
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Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学的作用 被引量:5
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作者 孙丽丽 李学农 刘国炳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期812-818,共7页
目的探讨DNA分化抑制因子(inhibitor of DNA differentiation,Id)Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附等生物学行为的作用。方法 Western blot方法检测4例子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的Id1/Id3... 目的探讨DNA分化抑制因子(inhibitor of DNA differentiation,Id)Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附等生物学行为的作用。方法 Western blot方法检测4例子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的Id1/Id3的表达;将子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B两株细胞各分为未处理细胞组、空白病毒组、启动子病毒组和Id1/Id3双敲低组。通过qRT-PCR检测不同腺病毒载体感染细胞后MMP2、CXCR4和P21 mRNA表达量,Western blot检测MMP2、CXCR4、P21蛋白表达情况;通过MTT增殖试验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和细胞粘附实验检测Id1/Id3表达改变后,对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、移行和粘附能力的影响。结果 Id1/Id3在子宫内膜癌组织中较癌旁组织表达增高(P<0.05);双敲低Id1/Id3,子宫内膜癌细胞中MMP2、CXCR4的mRNA水平和蛋白水平明显降低(P<0.05),P21的mRNA水平和蛋白水平则明显升高(P<0.05),RNAi组与其他3组细胞相比均有显著性差异;Id1/Id3双敲低组子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B株细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力和粘附能力均抑制(P<0.05)。结论 Id1/Id3在子宫内膜癌患者组织中高表达,并可通过升调MMP2、CXCR4和降调P21的表达促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附作用,靶向Id1/Id3治疗可能成为预防和治疗子宫内膜癌的新方案。 展开更多
关键词 ID1 ID3 子宫内膜癌 RNA干扰 腺病毒 DNA分化
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具有相同遗传背景的人结肠癌细胞系生物学特性的鉴定 被引量:7
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作者 张艳飞 刘莉 丁彦青 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期86-90,共5页
目的对三种取自不同转移部位的结肠癌细胞系进行生物学特性的鉴定。方法从体内成瘤性、原位移植后的自发性转移能力,以及体外生长、克隆形成率、粘附、运动、侵袭能力等方面,探讨具有相同遗传背景的SW480、SW620以及SW480/M5三种细胞系... 目的对三种取自不同转移部位的结肠癌细胞系进行生物学特性的鉴定。方法从体内成瘤性、原位移植后的自发性转移能力,以及体外生长、克隆形成率、粘附、运动、侵袭能力等方面,探讨具有相同遗传背景的SW480、SW620以及SW480/M5三种细胞系生物学特性的差异。结果体内实验证明SW480具有多器官转移的潜能,SW620只具有淋巴结转移的能力,SW480/M5只具有肝脏转移的能力,SW480/M5的皮下瘤生长速度最快,其次是SW620细胞;体外实验证明W480/M5和SW620的体外生长、克隆形成能力均强于SW480细胞,而两者对纤维黏连蛋白的粘附能力较SW480细胞弱,SW480/M5的运动及侵袭能力强于SW480及SW620细胞。结论与SW480细胞相比,SW480/M5和SW620细胞具有一定的器官亲和力,三者的遗传背景一致,是研究结肠癌晚期演进的遗传改变的重要资源。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 原位接种 SW480 SW620
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CD99基因转染对霍奇金淋巴瘤L428细胞株表型、细胞周期与凋亡的影响 被引量:3
14
作者 黄作平 何滢 +4 位作者 周新华 韩西群 张艳 温宗华 赵彤 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第1期30-32,共3页
目的:观察CD99基因转染对霍奇金淋巴瘤L428细胞株表型、细胞周期与凋亡的影响。方法:L428细胞分为3组:转染CD99基因组、转染空质粒组及空白对照组。采用免疫细胞化学方法检测3组细胞CD15、CD30与CD99的表达,并用流式细胞术分别检测细胞... 目的:观察CD99基因转染对霍奇金淋巴瘤L428细胞株表型、细胞周期与凋亡的影响。方法:L428细胞分为3组:转染CD99基因组、转染空质粒组及空白对照组。采用免疫细胞化学方法检测3组细胞CD15、CD30与CD99的表达,并用流式细胞术分别检测细胞周期和细胞凋亡。结果:与其他2组相比,转染CD99基因组L428细胞CD15、CD30表达消失,但可检测到CD99的表达。3组细胞周期分布存在差异,转染CD99基因组细胞阻滞于G2/M期(F=24.85,P<0.001)。3组细胞凋亡率相比,差异有统计学意义(F=45.30,P<0.001),其中转染CD99基因组细胞凋亡率为(12.7±4.6)%,高于转染空质粒组的(4.0±0.9)%和空白对照组的(3.6±1.6)%(P<0.05)。结论:CD99基因可能在霍奇金淋巴瘤的发生中起重要作用。 展开更多
关键词 CD99 增殖 凋亡 L428细胞株 霍奇金淋巴瘤
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miR-101对结直肠癌细胞SW620生物学特性的影响 被引量:2
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作者 刘燕 陆滟霞 +2 位作者 周敏 郑林 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期990-996,共7页
目的探讨miR-101对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用CCK8法、平板克隆形成实验、细胞周期、细胞凋亡方法分别检测SW620、GV209-SW620、mir101-SW620 3组细胞的生物学特性。结果 CCK8比色法结果显示SW620各组细胞... 目的探讨miR-101对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用CCK8法、平板克隆形成实验、细胞周期、细胞凋亡方法分别检测SW620、GV209-SW620、mir101-SW620 3组细胞的生物学特性。结果 CCK8比色法结果显示SW620各组细胞生长时间水平差异具有显著性(F=4152,P<0.001),细胞增殖能力组间有显著性差异(F=10220,P<0.001)。平板克隆实验的结果为SW620空白对照组、GV209-SW620对照组和mir101-SW620组的克隆形成率分别为:44.33%、48.17%、35.17%。SW620 3组细胞间的克隆形成能力差异具有统计学意义(F=73.015,P<0.001)。细胞周期分析发现SW620各组细胞间其G1、S、G2/M期存在着统计学差异(F=45.974,P=0.019;F=122.139,P=0.000;F=115.171,P=0.000)。除了SW620和GV209-SW620的G2期分布无统计学差异外(P=0.441),其余各组G1、G2/M期均有统计学差异(P<0.01);与SW620和GV209-SW620相比,mir101-SW620组出现了明显的G1和G2/M期周期阻滞。细胞凋亡实验发现SW620细胞各组细胞凋亡率差异有统计学意义(F=6115,P<0.001),各组进行两两比较,均有统计学差异(P<0.01)。与SW620空白细胞组、GV209-SW620对照组相比,mi R-101过表达组细胞凋亡率增加(P<0.05)。结论 mi R-101能够抑制结直肠癌细胞SW620的增殖,细胞G1和G2/M期周期阻滞及促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 结直肠癌 miR-101 SW620 增殖 凋亡 细胞周期 生物学特性
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提高陈旧性石蜡标本抗原检出率的抗原修复方法 被引量:18
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作者 齐文娟 申洪 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期1761-1763,共3页
目的:提高陈旧性石蜡标本抗原的检出效果。方法:取时间>5年的肺癌石蜡包埋组织,对同一蜡块连续切片,使用4种不同的缓冲液进行高压修复,分别为:枸橼酸缓冲液(CA,pH6.0)、PBS(pH7.0)、EDTA(pH8.0)和EDTA(pH9.0),每一种抗原修复液又分... 目的:提高陈旧性石蜡标本抗原的检出效果。方法:取时间>5年的肺癌石蜡包埋组织,对同一蜡块连续切片,使用4种不同的缓冲液进行高压修复,分别为:枸橼酸缓冲液(CA,pH6.0)、PBS(pH7.0)、EDTA(pH8.0)和EDTA(pH9.0),每一种抗原修复液又分别采用2、5、10、15、20、25、30min7个不同的时间修复,比较不同条件下陈旧性肺癌石蜡组织中Ki-67的表达结果。结果:采用EDTA(pH9.0)、高压修复维持喷气时间15min时,Ki-67阳性检出效果明显提高,阳性率可达75%以上;维持喷气时间分别为20、25、30min时,阳性检出效果更好,阳性率达到90%以上。结论:用EDTA(pH9.0)高压修复肺癌石蜡切片20min或20min以上可显著提高存放时间>5年的陈旧性肺癌石蜡切片Ki-67抗原的检出率。 展开更多
关键词 免疫组织化学 抗原修复 陈旧性石蜡肺癌标本 KI-67
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mic2/CD99基因克隆及在霍奇金淋巴瘤L428细胞株中表达 被引量:3
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作者 黄作平 何滢 +5 位作者 周新华 韩西群 吴自勍 张艳 温宗华 赵彤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2407-2409,共3页
目的克隆mic2/CD99基因并表达于L428细胞株。方法通过PCR及双酶切方法,从Jurkat细胞基因组RNA中获得mic2/CD99全长基因编码序列,克隆到pcDNA3.1(+)质粒载体上,构建包含mic2/CD99全长基因载体;用脂质体转染法将mic2/CD99全长基因载体转染... 目的克隆mic2/CD99基因并表达于L428细胞株。方法通过PCR及双酶切方法,从Jurkat细胞基因组RNA中获得mic2/CD99全长基因编码序列,克隆到pcDNA3.1(+)质粒载体上,构建包含mic2/CD99全长基因载体;用脂质体转染法将mic2/CD99全长基因载体转染至L428细胞系;并从分子水平验证其存在。结果RT-PCR方法扩增出大小为558bp片段,序列测定其编码序列正确,酶切鉴定亚克隆序列正确。结论成功构建了mic2/CD99全长基因载体,并稳定转染于L428细胞株中。 展开更多
关键词 mic2/CD99 载体构建 L428细胞株
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霍奇金淋巴瘤背景淋巴细胞免疫表型与组织学类型关系及其意义 被引量:3
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作者 张艳 黎相照 +5 位作者 温宗华 陈小艳 张弓 王辛 吴自勍 赵彤 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期888-893,共6页
本研究探讨霍奇金淋巴瘤(Hodgkin′s Lymphoma,HL)组织中的淋巴细胞表型与组织学类型的关系及其意义。应用即用型快速免疫组织化学MaxVisionTM法和计算机图像分析软件IPP6.0对经甲醛固定石蜡包埋的37例HL病理标本进行背景细胞蛋白表达... 本研究探讨霍奇金淋巴瘤(Hodgkin′s Lymphoma,HL)组织中的淋巴细胞表型与组织学类型的关系及其意义。应用即用型快速免疫组织化学MaxVisionTM法和计算机图像分析软件IPP6.0对经甲醛固定石蜡包埋的37例HL病理标本进行背景细胞蛋白表达的检测。选用的抗体有抗CD3/CD45RO、抗CD20/CD79a、抗CD4、抗CD8、抗GrB和抗TIA-1。结果表明:37例HL中结节性淋巴细胞为主型(NLPHL)4例,经典型(CHL)33例,其中淋巴细胞丰富型(LRHL)13例,结节硬化型(NSHL)14例,混合细胞型(MCHL)6例,在T/B细胞比值分析时另增加的10例会诊切片中1例NLPHL,4例NSHL,5例LRHL。图像定量分析结果显示:NLPHL中T/B细胞比值为0.28±0.07,CHL中T/B细胞比值为4.34±2.45,差异有统计学意义(p=0.001),T/B比值在CHL中表现为LRHL、NSHL、MCHL之间无显著性差异(p值均大于0.05);CD4+/CD8+细胞比值在NLPHL中为4.55±1.28,CHL中为4.10±1.50,(p=0.574),CHL中CD4+/CD8+细胞比值表现为MCHL>NSHL>LRHL(p=0.037);多重比较结果显示,LRHL与MCHL和NSHL之间有统计学差异(p=0.010和0.028);GrB+/TIA-1+比值在NLPHL中为0.71±0.57,CHL中比值为0.74±0.39,两型之间没有统计学差异(p=0.868),CHL中GrB+/TIA-1+细胞比值表现为MCHL、NSHL、LRHL之间无显著性差异(p值均大于0.05)。结论:HL背景细胞的免疫表型可以反映宿主肿瘤微环境,从T、B细胞的分布可以得出NLPHL与CHL的微环境是不同的。NLPHL表现出来其独特的生物学特点,CHL各亚型具有独特特点:T/B细胞比值在CHL中为LRHL>NSHL>MCHL;CD4+/CD8+与GrB+/TIA-1+细胞比值表现一致,均为MCHL>NSHL>LRHL。结合CHL亚型预后关系LRHL>NSHL>MCHL推理得出:T/B,CD4+/CD8+,GrB+/TIA-1+的细胞比值与CHL组织学类型预后分别呈现正相关和负相关关系。 展开更多
关键词 霍奇金淋巴瘤 淋巴细胞 免疫表型 组织学类型
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体内连续筛选法建立可视化乳腺癌肝转移裸鼠模型 被引量:2
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作者 杨敏 杨朝晖 +1 位作者 侯致典 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期944-947,共4页
目的建立整体可视化原位乳腺癌肝转移模型,实时观察乳腺癌发展、转移的规律,为研究乳腺癌肝转移的机制以及治疗提供一种更好的动物模型。方法利用pEGFP-N1表达质粒转染乳腺癌高转移亚系MDA-MB-231细胞,经稳定筛选后建立稳定表达绿色荧... 目的建立整体可视化原位乳腺癌肝转移模型,实时观察乳腺癌发展、转移的规律,为研究乳腺癌肝转移的机制以及治疗提供一种更好的动物模型。方法利用pEGFP-N1表达质粒转染乳腺癌高转移亚系MDA-MB-231细胞,经稳定筛选后建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)的乳腺癌细胞株pEGFP-MDA-MB-231细胞。利用pEGFP-MDA-MB-231癌细胞株通过体内连续传代,建立乳腺癌高肝转移模型,并借助整体荧光成像系统采集、分析乳腺癌细胞发出的荧光信号,实时观察乳腺癌细胞在裸鼠原位生长及肝转移情况。结果乳腺癌细胞pEGFP-MDA-MB-231稳定、高效表达EGFP,通过体内连续筛选法建立乳腺癌原位接种模型后,第1代、第2代、第3代原位接种模型的肝转移率分别为20%、80%、100%。并通过常规病理学方法验证了可视化模型的可靠性。结论利用稳定转染的乳腺癌pEGFP-MDA-MB-231细胞通过裸鼠体内连续筛选可以建立高效、相对特异性的整体可视化原位乳腺癌肝转移模型,为研究乳腺癌肝转移的机制及治疗提供一种更可靠有效的实验模型。 展开更多
关键词 乳腺癌 裸鼠 肝转移 整体可视化
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地高辛标记斑马鱼cd99l2基因RNA探针的制备 被引量:2
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作者 温宗华 张艳 +4 位作者 吴自勍 周新华 韩西群 张文清 赵彤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期969-972,共4页
目的制备用于斑马鱼胚胎早期cd99l2基因时空表达检测的地高辛标记RNA探针。方法设计引物,构建cd99l2/pGM-T重组质粒,用SacII和SalI分别进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6RNA聚合酶和T7RNA聚合酶转录合成地反义和正义地高辛标记的RNA探针... 目的制备用于斑马鱼胚胎早期cd99l2基因时空表达检测的地高辛标记RNA探针。方法设计引物,构建cd99l2/pGM-T重组质粒,用SacII和SalI分别进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6RNA聚合酶和T7RNA聚合酶转录合成地反义和正义地高辛标记的RNA探针,用整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的表达。结果成功构建了cd99l2/pGM-T重组质粒,体外转录获得反义和正义RNA探针,反义探针杂交检测证实cd99l2基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中中枢神经系统呈现高表达,正义探针未检测到表达信号。结论本研究制备的反义cd99l2RNA探针,兼顾了特异性和敏感性,能有效检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的定位表达,而正义探针可以作为阴性对照,为进一步探究cd99l2基因在斑马鱼发育过程中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 斑马鱼 原位杂交 探针 cd99l2
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