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产气荚膜梭菌四环素耐药基因双重荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
欧兰欣
叶碧锦
+13 位作者
孙铭飞
戚南山
李娟
吕敏娜
林栩慧
蔡海明
胡俊菁
宋勇乐
陈祥杰
朱易斌
尹理君
张健騑
廖申权
张浩吉
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期4630-4637,共8页
旨在开发一种快速、灵敏的针对产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法,为快速检测产气荚膜梭菌四环素类抗生素耐药性提供新策略。本研究针对tetA(P)和tetB(P)的保守序列设计引物和探针,构建重组质粒,...
旨在开发一种快速、灵敏的针对产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法,为快速检测产气荚膜梭菌四环素类抗生素耐药性提供新策略。本研究针对tetA(P)和tetB(P)的保守序列设计引物和探针,构建重组质粒,对退火温度和体系进行优化,同时采用药敏纸片琼脂扩散法测定菌株对四环素类药物的敏感性加以验证。结果发现,优化后的反应程序为95℃30 s;95℃5 s,56℃30 s,共39个循环。使用该反应程序仅能扩增重组质粒,对照菌株无扩增曲线;组内变异系数小于1.3%,组间变异系数小于1.8%,重组质粒最低检测限度为102 copies·μL^(-1)。使用本方法对33份产气荚膜梭菌临床分离株样品进行耐药基因检测,同时进行药敏试验,发现本研究建立的检测方法对四环素耐药基因的检出率均为75.8%(25/33),且与药敏试验结果一致。综上,本研究建立了一种特异、敏感、重复性好的产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法。
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关键词
产气荚膜梭菌
四环素
tetA(P)
tetB(P)
双重荧光定量PCR
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职称材料
题名
产气荚膜梭菌四环素耐药基因双重荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
欧兰欣
叶碧锦
孙铭飞
戚南山
李娟
吕敏娜
林栩慧
蔡海明
胡俊菁
宋勇乐
陈祥杰
朱易斌
尹理君
张健騑
廖申权
张浩吉
机构
佛山
科学
技术
学院
生命
科学
与工程
学院
广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期4630-4637,共8页
基金
广东省基础与应用基础研究基金项目(2021B1515120006)
广东省科技计划项目(2021B1212050021)
+4 种基金
猪禽种业全国重点实验室开放课题(2023QZ-NK05,2022GZ07)
广州市科技计划项目(2023B04J0137,2023A04J0789)
科技创新战略专项资金(高水平农科院建设)(202110TD,202122TD,R2020PY-JC001,R2019YJ-YB3010,R2020PY-JG013,R2020QD-048,R2021PY-QY007,R2023PYJG018)
广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项(2022KJ119)
广东省农业科学院协同创新中心项目(XTXM202202)。
文摘
旨在开发一种快速、灵敏的针对产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法,为快速检测产气荚膜梭菌四环素类抗生素耐药性提供新策略。本研究针对tetA(P)和tetB(P)的保守序列设计引物和探针,构建重组质粒,对退火温度和体系进行优化,同时采用药敏纸片琼脂扩散法测定菌株对四环素类药物的敏感性加以验证。结果发现,优化后的反应程序为95℃30 s;95℃5 s,56℃30 s,共39个循环。使用该反应程序仅能扩增重组质粒,对照菌株无扩增曲线;组内变异系数小于1.3%,组间变异系数小于1.8%,重组质粒最低检测限度为102 copies·μL^(-1)。使用本方法对33份产气荚膜梭菌临床分离株样品进行耐药基因检测,同时进行药敏试验,发现本研究建立的检测方法对四环素耐药基因的检出率均为75.8%(25/33),且与药敏试验结果一致。综上,本研究建立了一种特异、敏感、重复性好的产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法。
关键词
产气荚膜梭菌
四环素
tetA(P)
tetB(P)
双重荧光定量PCR
Keywords
Clostridium perfringens
tetracycline
tetA(P)
tetB(P)
duplex real-time PCR
分类号
S852.616.3 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
产气荚膜梭菌四环素耐药基因双重荧光定量PCR检测方法的建立
欧兰欣
叶碧锦
孙铭飞
戚南山
李娟
吕敏娜
林栩慧
蔡海明
胡俊菁
宋勇乐
陈祥杰
朱易斌
尹理君
张健騑
廖申权
张浩吉
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
2
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