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柔嫩艾美耳球虫广东株GAM56 蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定
1
作者 姜明慧 宋勇乐 +9 位作者 苏观志 陈庆彪 李娟 戚南山 廖申权 吕敏娜 林栩慧 蔡海明 张旭 孙铭飞 《广东畜牧兽医科技》 2025年第3期1-7,共7页
为研究柔嫩艾美耳球虫GAM56蛋白的生物学功能,以柔嫩艾美耳球虫广东株配子体cDNA为模板,克隆该分离虫株的gam56基因编码序列。构建pET⁃B2M⁃GAM56截短表达载体,利用大肠杆菌表达系统通过IPTG诱导表达GAM56蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备G... 为研究柔嫩艾美耳球虫GAM56蛋白的生物学功能,以柔嫩艾美耳球虫广东株配子体cDNA为模板,克隆该分离虫株的gam56基因编码序列。构建pET⁃B2M⁃GAM56截短表达载体,利用大肠杆菌表达系统通过IPTG诱导表达GAM56蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备GAM56多克隆抗体。通过间接ELISA和Western blot分析抗体的效价和特异性;收集E.tenella(GD)配子体阶段样品,利用GAM56多克隆抗体进行免疫荧光检测以评价其应用效果。结果显示:相比E.tenella(Houghton)参考虫株,E.tenella(GD)的gam56基因存在末端部分片段的缺失,CDS序列1077 bp,可编码358个氨基酸;预测蛋白大小41.3 kDa。GAM56保守区域截短原核表达蛋白主要以包涵体形式存在。间接免疫荧光分析显示该抗体能够特异性识别配子体阶段的GAM56蛋白。该研究为进一步解析柔嫩艾美耳球虫广东株GAM56生物学功能提供了材料,为艾美耳球虫有性发育相关蛋白的功能研究与机制解析奠定基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 GAM56 原核表达 多克隆抗体
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禽毛滴虫感染动物模型建立和优化
2
作者 江家豪 蔡海明 +10 位作者 廖申权 戚南山 李娟 吕敏娜 林栩慧 宋勇乐 陈祥杰 朱易斌 张健騑 刘文俊 孙铭飞 《广东畜牧兽医科技》 2025年第2期14-22,共9页
该研究对比不同的禽毛滴虫感染动物的方法以及感染剂量,通过各评价指标筛选得到最优的禽毛滴虫病动物模型的造模方法。首先进行禽毛滴虫不同造模方法的比较,选取30只未感染禽毛滴虫的乳鸽,分为6组,分别为PBS对照组、0.3%Agar+TYM对照组... 该研究对比不同的禽毛滴虫感染动物的方法以及感染剂量,通过各评价指标筛选得到最优的禽毛滴虫病动物模型的造模方法。首先进行禽毛滴虫不同造模方法的比较,选取30只未感染禽毛滴虫的乳鸽,分为6组,分别为PBS对照组、0.3%Agar+TYM对照组、普通法感染组、两次法感染组、喷喉法感染组和0.3%Agar+TYM感染组,每组5只,感染组每只乳鸽灌服禽毛滴虫剂量为1×10^(7)个,连续感染5 d。结果显示,只有0.3%Agar+TYM感染组阳性率达到100%,死亡率为20%;两次法感染组、喷喉法感染组和0.3%Agar+TYM感染组的平均增重和相对增重率均低于PBS对照组,0.3%Agar+TYM感染组肝脏重量和比重显著低于PBS对照组,两次法感染组的肺脏平均重量和比重显著低于PBS对照组,0.3%Agar+TYM感染组在感染后不同天数口腔咽拭子中禽毛滴虫浓度最高,因此选用0.3%Agar+TYM作为溶剂重悬的感染方法最佳。再进一步对此方法进行优化,选取40只未感染禽毛滴虫的乳鸽分为8组,分别为PBS对照组、0.4%Agar+TYM对照组、0.2%Agar+TYM低剂量感染组、0.2%Agar+TYM高剂量感染组、0.3%Agar+TYM低剂量感染组、0.3%Agar+TYM高剂量感染组、0.4%Agar+TYM低剂量感染组和0.4%Agar+TYM高剂量感染组,每组5只。低剂量感染组每天每只乳鸽灌服禽毛滴虫剂量为1×10^(6)个,高剂量感染组则为1×10^(7)个,连续感染5 d。结果显示,感染组除0.4%Agar+TYM高剂量感染组以外,阳性率均达到100%;感染组中除了0.2%Agar+TYM高剂量组外平均增重和相对增重率均低于PBS对照组;0.3%Agar+TYM低剂量感染组,0.3%Agar+TYM高剂量感染组和0.4%Agar+TYM高剂量感染组肝脏的平均重量和比重均显著低于PBS对照组;0.3%Agar+TYM高剂量感染组和0.4%Agar+TYM高剂量感染组从第3天到第7天的口腔咽拭子中禽毛滴虫浓度逐渐升高。综上结果表明,使用0.3%Agar+TYM作为溶剂重悬,每只乳鸽感染剂量为1×10^(6)个,连续感染5 d的感染模式为最佳。该研究建立了一种禽毛滴虫感染动物模型,为抗禽毛滴虫药物筛选、禽毛滴虫入侵机制等研究提供基础。 展开更多
关键词 禽毛滴虫 动物模型 评价指标 造模方法
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寄生原虫嘌呤磷酸核糖转移酶研究进展
3
作者 余志会 方肆云 +5 位作者 孙铭飞 戚南山 刘文俊 李娟 胡俊菁 廖申权 《广东农业科学》 CAS 2023年第8期163-172,共10页
寄生原虫是一类单细胞寄生性原虫,包括利什曼原虫(Leishmania spp.)、锥虫(Trypanosoma spp.)、疟原虫(Plasmodium spp.)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)和艾美耳球虫(Eimeria spp.)等,可引起严重危... 寄生原虫是一类单细胞寄生性原虫,包括利什曼原虫(Leishmania spp.)、锥虫(Trypanosoma spp.)、疟原虫(Plasmodium spp.)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)和艾美耳球虫(Eimeria spp.)等,可引起严重危害人类与动物健康以及对养殖业造成巨大经济损失的原虫病。寄生虫入侵宿主后的发育和繁殖需要大量的嘌呤核苷酸,相应的嘌呤碱基在嘌呤磷酸核糖转移酶的催化下生成对应的嘌呤核苷酸。嘌呤磷酸核糖转移酶是一类参与嘌呤核苷酸补救合成的重要代谢酶,广泛存在于寄生原虫中。寄生原虫的嘌呤磷酸核糖转移酶主要包括腺嘌呤磷酸核糖转移酶和次黄嘌呤-鸟嘌呤-黄嘌呤磷酸核糖转移酶,两者在寄生原虫中分别催化腺嘌呤核苷酸、次黄嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸和黄嘌呤核苷酸合成,从而参与寄生原虫的多个生化代谢过程,不仅为寄生原虫核酸生物合成等提供前体物质,还为虫体提供通用能量载体。由于寄生原虫的嘌呤补救途径明显区别于宿主的从头合成途径,且嘌呤磷酸核糖转移酶是寄生原虫嘌呤补救途径的关键酶,因而近年来寄生原虫嘌呤磷酸核糖转移酶成为抗原虫药物候选靶标的研究热点,以寄生原虫嘌呤磷酸核糖转移酶为潜在靶标,特异性筛选、设计抑制剂,并开发抗寄生原虫药物取得重要进展。以利什曼原虫、锥虫、疟原虫和弓形虫的嘌呤磷酸核糖转移酶为重点,综述寄生原虫嘌呤磷酸核糖转移酶的基本特征、生物学功能、抑制剂筛选与应用的研究进展,以期为抗寄生原虫药物靶标研究与新型抑制剂筛选提供参考。 展开更多
关键词 寄生原虫 腺嘌呤磷酸核糖转移酶 次黄嘌呤-鸟嘌呤-黄嘌呤磷酸核糖转移酶 嘌呤核苷酸 药物靶标 抑制剂
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荔枝壳中根皮苷的提取工艺优化及其抗氧化活性分析
4
作者 孟弘茹 徐双园 +14 位作者 林之灏 孙铭飞 刘文俊 戚南山 李娟 张晓爱 林栩慧 吕敏娜 蔡海明 宋勇乐 陈祥杰 朱易斌 张健騑 李颖鑫 廖申权 《广东畜牧兽医科技》 2025年第2期1-7,共7页
为优化荔枝壳中根皮苷的提取工艺并分析根皮苷提取物的抗氧化活性,该研究通过优化料液比、溶剂浓度、提取温度、溶剂pH值和提取时间等单因素条件,以提高从荔枝壳中提取根皮苷的效率,并采用DPPH法和ABTS法分析所提取根皮苷的抗氧化活性... 为优化荔枝壳中根皮苷的提取工艺并分析根皮苷提取物的抗氧化活性,该研究通过优化料液比、溶剂浓度、提取温度、溶剂pH值和提取时间等单因素条件,以提高从荔枝壳中提取根皮苷的效率,并采用DPPH法和ABTS法分析所提取根皮苷的抗氧化活性。单因素分析试验结果表明,以1∶40料液比提取根皮苷得率为1.22%,以65%乙醇溶液提取根皮苷得率为1.20%,在提取温度为60℃条件下提取根皮苷得率为1.51%,以溶剂(pH 5)提取根皮苷得率为1.58%,当提取时间为60 min时根皮苷的得率为1.39%。优化所得提取工艺条件为:料液比1∶40,乙醇浓度65%,提取温度60℃,溶剂pH值5,提取时间60 min,在此条件下荔枝壳根皮苷提取率为1.16%-1.39%。检测提取物的抗氧化活性发现,根皮苷提取物的抗氧化能力(TEAC值)为0.34μg TE/μg,总抗氧化能力为(4.02±1.08)mmol/g,表明从荔枝壳中提取的根皮苷具有较好的抗氧化活性,为开发荔枝壳来源的抗氧化制剂提供理论依据。 展开更多
关键词 荔枝壳 根皮苷 提取工艺 抗氧化活性
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粤东地区鸡球虫病流行病学调查 被引量：3
5
作者 余志会 方肆云 +14 位作者 刘文俊 戚南山 李娟 吴彩艳 林栩慧 吕敏娜 蔡海明 胡俊菁 宋勇乐 陈祥杰 朱易斌 尹理君 张健騑 廖申权 孙铭飞 《广东畜牧兽医科技》 2024年第1期82-86,共5页
鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞造成的原虫病。为明确粤东地区鸡群中的球虫病流行情况,该研究于2018-2019年在粤东地区18个规模化养鸡场采集700份粪便样品,利用PCR方法检测样品中鸡球虫感染情况。结果显示,粤东地... 鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞造成的原虫病。为明确粤东地区鸡群中的球虫病流行情况,该研究于2018-2019年在粤东地区18个规模化养鸡场采集700份粪便样品,利用PCR方法检测样品中鸡球虫感染情况。结果显示,粤东地区的鸡球虫病总检出率高达95.71%(67/70),主要流行虫种为柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫,检出率分别为55.71%(39/70)和48.57%(34/70)。1-25日龄肉鸡堆型艾美耳球虫的检出率最高,为69.23%;大于25日龄肉鸡柔嫩艾美耳球虫的检出率最高,可高达60%。分析发现粤东地区鸡球虫混合感染情况普遍存在,但单一虫种感染占比最高(42.86%)。本研究对粤东地区规模化养鸡场的鸡球虫病流行情况进行系统研究,为粤东地区鸡球虫病的综合防控提供理论依据。 展开更多
关键词 粤东地区 鸡球虫病 PCR 流行病学
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毒害艾美耳球虫疫苗ENYS株TaqMan qPCR检测方法的建立
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作者 靳浩展 肖文婉 +13 位作者 廖申权 戚南山 李娟 吕敏娜 蔡海明 胡俊菁 林栩慧 宋勇乐 陈祥杰 朱易斌 尹理君 张健騑 张旭 孙铭飞 《广东畜牧兽医科技》 2024年第4期1-8,共8页
为了对E.necatrix ENYS株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测,该研究对ENYS株和ENGD株进行全基因组重测序,结合生物信息学分析建立了一种TaqMan qPCR检测技术。结果显示,En-marker5测序结果与预期相符,最优的引物浓度和探针浓度分... 为了对E.necatrix ENYS株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测,该研究对ENYS株和ENGD株进行全基因组重测序,结合生物信息学分析建立了一种TaqMan qPCR检测技术。结果显示,En-marker5测序结果与预期相符,最优的引物浓度和探针浓度分别为500nM和250 nM,标准曲线的斜率为-3.249,相关系数为0.999,可以通过Ct值对模板浓度定量,该方法检测下线为290个拷贝/反应和50个卵囊/反应,灵敏度是传统PCR的10倍;该方法可以特异性检测EnYS株,不能扩增其他种的疫苗株和野毒株以及肠道病原菌;重复性检测的变异系数小于0.6%,重复性良好。本研究针对E.necatrix EnYS株开发了一种灵敏度高、特异性强、稳定性好的TaqMan qPCR检测方法,为E.necatrix EnYS株的安全性评估及临床应用提供技术支持。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 减毒活疫苗 全基因组重测序 分子标记 TaqMan qPCR
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