基于显色体系和破壁条件的优化,构建了酶解破壁与显色反应相结合的氨基酸脱氢酶突变体高通量筛选方法。以颜色和吸光度表征内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)酶活,以碘硝基四唑紫(INT)-吩嗪硫酸甲酯(PMS)为显色剂,通过其与StDAPD...基于显色体系和破壁条件的优化,构建了酶解破壁与显色反应相结合的氨基酸脱氢酶突变体高通量筛选方法。以颜色和吸光度表征内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)酶活,以碘硝基四唑紫(INT)-吩嗪硫酸甲酯(PMS)为显色剂,通过其与StDAPDH的偶联反应优化了显色体系;以StDAPDH酶活为评价指标,在单因素实验的基础上,采用响应面法探究了菌体量、破壁时间、溶菌酶加量对菌体破壁效果的影响。确定最优显色体系为:INT浓度0.1 mg·mL^(-1)、PMS浓度0.5μg·mL^(-1)、检测波长510 nm;确定最优菌体破壁条件为:30 mL OD 600值为1.5的菌悬液,离心后用10 mL PBS缓冲液重悬菌体沉淀,加入0.2 mg·mL^(-1)的溶菌酶,在37℃下破壁50 min。该方法简单高效,为氨基酸脱氢酶突变体的高通量筛选提供了一定参考。展开更多
酿酒酵母是发酵产业中的关键微生物,处于对数生长期的酵母菌迅速繁殖,积累大量初级代谢产物,对此时期进行调控可以提高发酵效率。为了解对数生长期酿酒酵母发酵情况,采用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrom...酿酒酵母是发酵产业中的关键微生物,处于对数生长期的酵母菌迅速繁殖,积累大量初级代谢产物,对此时期进行调控可以提高发酵效率。为了解对数生长期酿酒酵母发酵情况,采用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对酵母胞内主要代谢物及其代谢途径进行分析。结果表明,在对数生长期酿酒酵母胞内共鉴定927种代谢物,含氮和含硫化合物数量及相对含量均最高。这些代谢物参与的代谢途径中,核苷酸代谢、辅因子和维生素代谢、碳水化合物代谢以及氨基酸代谢为酿酒酵母主要代谢途径,核苷酸代谢中相对含量最高的为嘧啶代谢。代谢物和代谢途径主要涉及酵母细胞膜的构建,遗传信息的复制,信号分子的传递,渗透压的调节等。为酵母提供生长所需的基本小分子物质和能量,同时为合成蛋白质、核酸等生物大分子物质提供原料。此外,碳水化合物和氨基酸代谢的代谢流分布可更好地支持酿酒酵母进行核苷酸代谢,促进酵母菌的增殖、生长和存活。该研究结果为定向改造酿酒酵母、提高其发酵效率提供一定科学依据。展开更多
文摘基于显色体系和破壁条件的优化,构建了酶解破壁与显色反应相结合的氨基酸脱氢酶突变体高通量筛选方法。以颜色和吸光度表征内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)酶活,以碘硝基四唑紫(INT)-吩嗪硫酸甲酯(PMS)为显色剂,通过其与StDAPDH的偶联反应优化了显色体系;以StDAPDH酶活为评价指标,在单因素实验的基础上,采用响应面法探究了菌体量、破壁时间、溶菌酶加量对菌体破壁效果的影响。确定最优显色体系为:INT浓度0.1 mg·mL^(-1)、PMS浓度0.5μg·mL^(-1)、检测波长510 nm;确定最优菌体破壁条件为:30 mL OD 600值为1.5的菌悬液,离心后用10 mL PBS缓冲液重悬菌体沉淀,加入0.2 mg·mL^(-1)的溶菌酶,在37℃下破壁50 min。该方法简单高效,为氨基酸脱氢酶突变体的高通量筛选提供了一定参考。
文摘酿酒酵母是发酵产业中的关键微生物,处于对数生长期的酵母菌迅速繁殖,积累大量初级代谢产物,对此时期进行调控可以提高发酵效率。为了解对数生长期酿酒酵母发酵情况,采用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对酵母胞内主要代谢物及其代谢途径进行分析。结果表明,在对数生长期酿酒酵母胞内共鉴定927种代谢物,含氮和含硫化合物数量及相对含量均最高。这些代谢物参与的代谢途径中,核苷酸代谢、辅因子和维生素代谢、碳水化合物代谢以及氨基酸代谢为酿酒酵母主要代谢途径,核苷酸代谢中相对含量最高的为嘧啶代谢。代谢物和代谢途径主要涉及酵母细胞膜的构建,遗传信息的复制,信号分子的传递,渗透压的调节等。为酵母提供生长所需的基本小分子物质和能量,同时为合成蛋白质、核酸等生物大分子物质提供原料。此外,碳水化合物和氨基酸代谢的代谢流分布可更好地支持酿酒酵母进行核苷酸代谢,促进酵母菌的增殖、生长和存活。该研究结果为定向改造酿酒酵母、提高其发酵效率提供一定科学依据。
