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不同刺激剂诱导的稳定黏附于ICAM-1上的中性粒细胞形成胞外诱捕网的信号通路研究
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作者 洪天添 刘望 +4 位作者 黄嘉祺 赵柏松 方颖 吴建华 林蒋国 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期294-294,共1页
目的探究不同刺激剂诱导稳定黏附于ICAM-1上人中性粒细胞形成胞外诱捕网(NETs)的信号通路。方法分离获得健康志愿者外周血中性粒细胞,分别用β2整合素抑制剂(M1/70或H1111)、细胞骨架抑制剂(CytoD)和Talin-1抑制剂(MNS)对中性粒细胞进... 目的探究不同刺激剂诱导稳定黏附于ICAM-1上人中性粒细胞形成胞外诱捕网(NETs)的信号通路。方法分离获得健康志愿者外周血中性粒细胞,分别用β2整合素抑制剂(M1/70或H1111)、细胞骨架抑制剂(CytoD)和Talin-1抑制剂(MNS)对中性粒细胞进行预处理,使用LPS或PMA诱导中性粒细胞4 h产生NETs。 展开更多
关键词 中性粒细胞 刺激剂 胞外诱捕网 Β2整合素 信号通路 黏附
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肌球蛋白重链7基因来源的miR-208b-3p促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达 被引量:3
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作者 张梦珍 翟琳 +5 位作者 郭林林 朱杰宁 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期642-650,共9页
【目的】探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p(miR-208b-3p)对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。【方法】通过miRNA表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR... 【目的】探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p(miR-208b-3p)对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。【方法】通过miRNA表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-208b-3p在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和高糖/葡萄糖氧化酶(G/Go)处理的C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVCs)和心肌成纤维细胞(mCFs)中的表达;利用CCK8细胞增殖实验、流式细胞术和纤维化相关蛋白(包括COL1A1、COL3A1和α-SMA)表达检测来了解miR-208b-3p对mCFs纤维化表型的影响;双萤光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因Mtf2和Pgrmc1 3′端非翻译区(3′-UTR)的结合作用;利用RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-208b-3p转染的mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达;通过小干扰RNA(siRNA)抑制Mtf2和Pgrmc1表达,并检测对mCFs中纤维化相关蛋白表达的作用。【结果】miRNA表达谱和RTqPCR结果证实miR-208b-3p在糖尿病db/db小鼠心肌中表达显著升高。miR-208b-3p前体与宿主基因Myh7在db/db小鼠心肌中表达显著升高,miR-208b-3p与Myh7 mRNA在乳小鼠来源的mCFs和NMVCs中均有表达,但在NMVCs中水平更高。miR-208b-3p在AngⅡ和G/Go处理后的mCFs和NMVCs中表达均明显升高。miR-208b-3p可显著增加mCFs中纤维化相关蛋白COL1A1、COL3A1和α-SMA表达,但不影响mCFs的增殖能力和细胞周期分布特征。双萤光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与Mtf2和Pgrmc1 3′-UTR有结合作用。miR-208b-3p可在转录后水平抑制mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达。miR-208b-3p、Mtf2 siRNA和Pgrmc1 siRNA均能一致性地促进mCFs中纤维化相关蛋白表达。【结论】miR-208b-3p通过靶向Mtf2和Pgrmc1基因发挥促进mCFs中纤维化相关基因表达的作用。 展开更多
关键词 心肌纤维化 微小RNA miR-208b-3p 心肌成纤维细胞
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手霉素通过上调P53诱导22Rv1前列腺癌细胞凋亡 被引量:2
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作者 李劲高 陈景 佘妙容 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第11期1812-1815,共4页
目的探讨手霉素对前列腺癌(prostate cancer,PC)细胞株22Rv1细胞的作用及其机制。方法使用MTT细胞毒性测定法评价人22Rv1细胞的活性,使用Annexin v和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染料标记细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡。采用免疫... 目的探讨手霉素对前列腺癌(prostate cancer,PC)细胞株22Rv1细胞的作用及其机制。方法使用MTT细胞毒性测定法评价人22Rv1细胞的活性,使用Annexin v和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染料标记细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡。采用免疫印迹技术检测Caspase-3、H2AX和P53蛋白的表达。结果手霉素有效杀伤前列腺癌22Rv1细胞,随着手霉素剂量的增加,细胞活性逐渐下降。手霉素能诱导22Rv1细胞凋亡,早期凋亡率和晚期凋亡率均增加。手霉素通过caspase途径有效诱导22Rv1细胞凋亡。同时手霉素快速增加22Rv1细胞H2AX磷酸化和上调P53的表达。结论手霉素通过上调P53的表达和激活H2AX诱导前列腺癌细胞凋亡,杀伤前列腺癌细胞。 展开更多
关键词 前列腺癌 凋亡 手霉素 H2AX P53
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机械敏感性离子通道Piezo1介导高静水压诱导大鼠冠脉平滑肌细胞表型改变 被引量:2
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作者 李穗敏 秦晓玥 +5 位作者 曾鹏 陈淑贞 邝素娟 杨慧 饶芳 邓春玉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1202-1208,共7页
目的探究Piezo1在高静水压诱导的冠脉平滑肌细胞(CASMCs)表型改变中的作用机制。方法分别于0、120和180 mmHg压力下干预原代Wistar大鼠CASMCs 24 h,Western blot检测Piezo1、收缩表型相关蛋白Cav1.2、SM-MHC、α-SMA和合成表型相关蛋白... 目的探究Piezo1在高静水压诱导的冠脉平滑肌细胞(CASMCs)表型改变中的作用机制。方法分别于0、120和180 mmHg压力下干预原代Wistar大鼠CASMCs 24 h,Western blot检测Piezo1、收缩表型相关蛋白Cav1.2、SM-MHC、α-SMA和合成表型相关蛋白OPN、MMP-2、Col1a1的表达,激光共聚焦检测压力对Piezo1介导的钙离子内流的影响;分别用Piezo1激动剂Yoda1、抑制剂GsMTx4处理CASMCs以及siRNA敲低Piezo1,Western blot检测收缩表型及合成表型相关蛋白的表达。结果与0 mmHg相比,120和180 mmHg干预CASMCs后,Piezo1、OPN、MMP-2、Col1a1表达增加,Cav1.2、SM-MHC、α-SMA表达减少。180 mmHg高压干预后,Piezo1介导的钙离子内流强于常压对照组,但敲低Piezo1后有所下降。在常压下,用Yoda1处理CASMCs后,收缩表型相关蛋白表达减少,合成表型相关蛋白表达增加。与对照组相比,180 mmHg下分别用GsMTx4抑制和siRNA敲低Piezo1后,收缩表型相关蛋白表达增加,合成表型相关蛋白表达减少。结论Piezo1在高静水压诱导CASMCs由收缩表型向合成表型转变中起促进作用。 展开更多
关键词 Piezo1 高静水压 冠脉平滑肌细胞 收缩表型 合成表型 表型改变
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一种快速检测UGT1A1~*28基因多态性的方法 被引量:1
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作者 黄迎 苏健 +7 位作者 黄小穗 卢丹霞 谢至 杨素清 郭伟浜 吕志异 吴红穗 张绪超 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期817-821,共5页
背景与目的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(uridine diphosphate glucuronosyl transferase 1A1,UGT1A1)是伊立替康代谢最主要的同工酶,UGT1A1基因的多态性影响UGT1A1的活性,本研究建立片段分析法检测UGT1A1*28 TATA盒的多态性。方法调取2... 背景与目的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(uridine diphosphate glucuronosyl transferase 1A1,UGT1A1)是伊立替康代谢最主要的同工酶,UGT1A1基因的多态性影响UGT1A1的活性,本研究建立片段分析法检测UGT1A1*28 TATA盒的多态性。方法调取2014年4月-2015年5月在广东省人民医院的住院肺癌患者库存血液标本286例,建立片段分析法检测UGT1A1*28 TATA多态性,与Sanger测序方法比较其精确度和准确度。结果 286例肿瘤血液中,UGT1A1*28 TATA盒TA6/6型有236例(82.5%),TA6/7型有48例(16.8%),TA7/7型2例(0.7%)。片段分析法与Sanger测序法比较,精确度与准确度达100%。结论片段分析法适用于临床检测UGT1A1*28多态性,成本低且方便快捷。 展开更多
关键词 UGT1A1 片段分析 基因多态性
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Myocardin重组蛋白表达及其在人骨髓间充质干细胞重编程为血管平滑肌细胞中的作用 被引量:1
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作者 麦丽萍 杨翔宇 +3 位作者 吴岳恒 余细勇 何国东 李晓红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1409-1414,共6页
目的:研究心肌素(myocardin)重组蛋白的表达及分离纯化方法,并探讨myocardin重组蛋白对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h BMSCs)向血管平滑肌细胞转分化的作用。方法:构建myocardin原核表达载体,摸索最... 目的:研究心肌素(myocardin)重组蛋白的表达及分离纯化方法,并探讨myocardin重组蛋白对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h BMSCs)向血管平滑肌细胞转分化的作用。方法:构建myocardin原核表达载体,摸索最佳诱导myocardin重组蛋白表达的方法及优化分离纯化方式。使用纳米转导试剂包裹myocardin形成纳米-蛋白复合体,转染h BMSCs,观察蛋白转导效率;蛋白转导成功后,检测血管平滑肌的特异性标志物平滑肌肌球蛋白重链的表达情况,观察h BMSCs向平滑肌细胞转化情况。结果:与传统方法相比较,高浓度法诱导myocardin重组蛋白的表达量更高,新采用的洗脱方式能获取更多的myocardin重组蛋白;纳米-myocardin复合体可成功转染h BMSCs并诱导其向血管平滑肌样细胞转化。结论:Myocardin重组蛋白能被高效转导到细胞内,并促使h BMSCs重编程为血管平滑肌样细胞。 展开更多
关键词 心肌素 重组蛋白 平滑肌肌球蛋白重链 骨髓间充质干细胞 细胞重编程
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