纳米孔长读测序鉴定肝癌细胞中低氧特异性转录本

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作者 高力 沈晟齐 高平 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2025年第1期88-97,共10页

【目的】应用纳米孔长读长测序技术,深入分析正常肝实质细胞和肝癌细胞在低氧环境下的特异性转录组变化,以期阐明肿瘤细胞在低氧条件下生存与转移的内在机制,从而为肿瘤的精准靶向治疗开辟新的视角与策略。【方法】实验选取正常肝实质... 【目的】应用纳米孔长读长测序技术,深入分析正常肝实质细胞和肝癌细胞在低氧环境下的特异性转录组变化,以期阐明肿瘤细胞在低氧条件下生存与转移的内在机制,从而为肿瘤的精准靶向治疗开辟新的视角与策略。【方法】实验选取正常肝实质细胞系THLE-3与肝癌细胞系Hep3B作为研究对象,分别置于常氧与低氧条件下培养48 h后,提取其总RNA。随后,采用纳米孔测序技术,对这两种细胞系在不同氧浓度下的转录组进行高通量、高精度的测序分析。【结果】本研究成功构建了基于纳米孔三代测序技术的低氧转录本数据集,展现了前所未有的测序精度。通过GO(gene ontology)富集分析,我们系统地挖掘了参与低氧响应的关键生物通路(P<0.05)。进一步地,结合分子动力学模拟方法,我们深入探究了溶质载体家族1成员5(SLC1A5)在低氧特异性转录本翻译过程中,其蛋白质结构所发生的动态变化,为理解其功能调控提供了直接证据。【结论】纳米孔长读长测序技术的应用,不仅成功捕捉到了低氧条件下mRNA的特征性表达模式及特异性转录本,同时为深入探索低氧微环境下的转录组复杂性提供了强有力的技术支撑。在进一步结合蛋白结构模拟以及分子动力学的基础上,对低氧微环境中的蛋白结构提出新的探索路径。本研究的发现,不仅丰富了低氧特异性转录组学的研究内容,为低氧特异性蛋白结构探索提供了更可靠的数据基础,更为未来肿瘤的靶向治疗策略提供了低氧特异性的潜在靶点。 展开更多

关键词 纳米孔测序 低氧 转录本 可变剪切 肝癌

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5-羟色胺诱导冠状动脉收缩的机制研究 被引量：8

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作者 王昊 邓春玉 +5 位作者 饶芳 邝素娟 杨慧 刘林 吴琪 徐劲松 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期825-831,共7页

目的:探讨5-羟色胺(5-HT)诱导冠状动脉收缩的机制。方法:取雄性Wistar成年大鼠,制备离体冠状动脉环,经血管张力测定仪测定动脉环的张力变化,并探讨给予不同信号通路抑制剂对5-HT诱导的冠状动脉收缩的影响。结果:首先发现给予5-HT_(2A)... 目的:探讨5-羟色胺(5-HT)诱导冠状动脉收缩的机制。方法:取雄性Wistar成年大鼠,制备离体冠状动脉环,经血管张力测定仪测定动脉环的张力变化,并探讨给予不同信号通路抑制剂对5-HT诱导的冠状动脉收缩的影响。结果:首先发现给予5-HT_(2A)受体阻断剂沙格雷酯(sarpogrelate,1μmol/L)可完全消除5-HT引起的冠状动脉浓度依赖性收缩;磷脂酶C_β(PLC_β)抑制剂U73122(10μmol/L和50μmol/L)、Rho相关蛋白激酶抑制剂Y-27632(3μmol/L和10μmol/L)和蛋白激酶Cδ亚基(PKCδ)抑制剂rottlerin(3μmol/L和10μmol/L)孵育后,均可明显抑制5-HT引起的冠状动脉环收缩(P<0.05);此外,L-型钙通道(Cav1.2)阻断剂硝苯地平(1μmol/L)及细胞内钙池操纵性钙内流(SOCE)抑制剂SKF96365(10μmol/L和30μmol/L)和2-氨基乙氧基苯硼酸(2-APB,50μmol/L和100μmol/L)孵育后,5-HT诱导的血管收缩张力较未处理组明显下降(P<0.05);另外,在含硝苯地平(1μmol/L)的无钙Kerbs-Henseleit(K-H)液中,发现5-HT仍可诱导血管收缩。结论:5-HT通过激活5-HT_(2A)受体诱导冠状动脉收缩,其机制可能与PKC和Rho激酶信号通路,以及钙调控有关。 展开更多

关键词 冠状动脉 5-羟色胺 血管收缩 钙通道 PKC/Rho激酶信号通路

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Drp1在高糖诱导的大鼠心肌细胞肥大中的作用研究 被引量：5

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作者 吴清蕊 练飞鸿 +9 位作者 饶芳 邝素娟 杨慧 吴飞龙 张梦珍 麦丽萍 林秋雄 单志新 杨敏 邓春玉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期47-52,共6页

目的:探讨发动蛋白相关蛋白1(Drp1)在高糖诱导的心肌细胞肥大模型中的表达及其作用机制。方法:原代乳大鼠心肌细胞培养,用高糖诱导建立心肌细胞损伤模型,将细胞分为对照组、高渗透压组、DMSO组、高糖组和高糖+线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1... 目的:探讨发动蛋白相关蛋白1(Drp1)在高糖诱导的心肌细胞肥大模型中的表达及其作用机制。方法:原代乳大鼠心肌细胞培养,用高糖诱导建立心肌细胞损伤模型,将细胞分为对照组、高渗透压组、DMSO组、高糖组和高糖+线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)组。用麦胚凝集素荧光染色检测单个心肌细胞表面积;用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测心肌细胞MMP水平;Western blot检测心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽(ANP)及Drp1和Drp1在Ser616/Ser637位点的磷酸化蛋白[p-Drp1(Ser616/Ser637)]的蛋白水平。结果:与对照组相比,高渗透压组各检测结果均无显著差异(P>0.05)。与对照组和高渗透压组相比,高糖组心肌细胞的表面积均显著增大(P<0.01),MMP显著降低(P<0.01),而Drp1总蛋白表达无显著变化(P>0.05);心肌细胞ANP表达显著增加(P<0.01),p-Drp1(Ser616)水平显著升高(P<0.05),而p-Drp1(Ser637)水平显著降低(P<0.05)。与高糖组相比,高糖+Mdivi-1组ANP和p-Drp1(Ser616)蛋白水平显著降低(P<0.05),而p-Drp1(Ser637)的水平显著升高(P<0.05)。结论:高糖诱导心肌细胞肥大的机制,与Drp1在Ser616位点磷酸化水平升高、Ser637位点磷酸化水平降低导致的线粒体分裂增加有关。 展开更多

关键词 糖尿病心肌病 发动蛋白相关蛋白1 线粒体分裂 心房钠尿肽

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机械力敏感离子通道Piezo1参与高血压诱导心房纤维化的机制研究 被引量：4

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作者 刘慧意 饶芳 +7 位作者 叶兴东 金书羽 付路 邓春玉 杨慧 邝素娟 吴书林 薛玉梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期394-402,共9页

目的:利用小鼠心房成纤维细胞探讨机械敏感离子通道Piezo1在调控高血压所致心房纤维化,进而导致房颤中的作用及可能机制。方法:采用酶消化法分离培养6~8周龄雄性C57BL/6小鼠的原代心房成纤维细胞,并采用课题组自制的加压装置(专利号2014... 目的:利用小鼠心房成纤维细胞探讨机械敏感离子通道Piezo1在调控高血压所致心房纤维化,进而导致房颤中的作用及可能机制。方法:采用酶消化法分离培养6~8周龄雄性C57BL/6小鼠的原代心房成纤维细胞,并采用课题组自制的加压装置(专利号201420109263.1)建立高血压模型,Western blot比较不同静水压(0、20和40 mmHg)干预下细胞Piezo1、Src/p-Src及纤维化指标Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白α1链(Col1A1/3A1)和基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)蛋白表达水平。高静水压(40 mmHg)干预下的心房成纤维细胞,分别给予不同浓度(1、3和10μmol/L)的Piezo1抑制剂GsMTx4,或转染Piezo1 siRNA质粒降低Piezo1的表达,以及不同浓度(5和10μmol/L)的Src抑制剂PP1,观察细胞中Src/p-Src和纤维化相关因子蛋白水平的变化。常压下给予不同浓度(1、3和10μmol/L)的Piezo1特异性激动剂Yoda1,观察心房成纤维细胞中Src/p-Src和纤维化相关因子蛋白水平的变化。结果:随着压力升高,小鼠心房成纤维细胞中Piezo1、Src/p-Src及纤维化指标Col1A1/3A1和MMP-2/9蛋白表达水平显著升高(P<0.05);GsMTx4/Piezo1 siRNA或PP1处理后,可使高静水压导致的Src/p-Src及纤维化相关因子水平下降(P<0.05)。而细胞给予Piezo1特异性激动剂Yoda1可模拟出高静水压干预的结果(P<0.05)。结论:在小鼠心房成纤维细胞中,机械敏感通道蛋白Piezo1可能通过调控Src/p-Src参与高血压所致的心房纤维化。 展开更多

关键词 Piezo1蛋白 高血压 心房成纤维细胞 心房颤动

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p300在老年小鼠心房颤动易感性中的作用研究 被引量：2

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作者 彭德威 周慧珊 +9 位作者 刘海燕 高小燕 赖颖瑜 李巧巧 邓春玉 杨慧 邝素娟 薛玉梅 吴书林 饶芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期180-186,共7页

目的探讨转录辅激活因子p300在调控老年小鼠心房肌细胞电重塑,进而导致房颤中的作用。方法分别收集5、13和18月龄的C57BL/6小鼠左心耳组织,Western blot检测p300蛋白,钙通道蛋白和衰老信号通路相关蛋白的表达。分别取5月龄和18月龄小鼠... 目的探讨转录辅激活因子p300在调控老年小鼠心房肌细胞电重塑,进而导致房颤中的作用。方法分别收集5、13和18月龄的C57BL/6小鼠左心耳组织,Western blot检测p300蛋白,钙通道蛋白和衰老信号通路相关蛋白的表达。分别取5月龄和18月龄小鼠,分离单个心房肌细胞,全细胞膜片钳技术检测各组细胞的L型钙电流(L-type calcium current,ICa,L)和动作电位时程(action potential duration,APD)。快速起搏心房观察不同月龄小鼠房颤的可诱发性。结果与5月龄小鼠相比,13和18月龄小鼠左心房组织p300、衰老相关信号通路蛋白p53和p21表达明显增加(P<0.05),而L型钙通道蛋白Cav1.2表达减少;老年小鼠心房肌细胞ICa,L电流密度明显减小,APD缩短。不同剂量的p300抑制剂-姜黄素(50、100 mg·kg^-1·d-1)饲养后能明显减少老年小鼠房颤的可诱发率,并使衰老小鼠心房肌细胞的ICa,L密度增加和APD延长(P<0.05)。结论p300可能通过调控ICa,L参与衰老相关心房肌细胞电重塑。 展开更多

关键词 p300蛋白 心房肌细胞 细胞衰老 L型钙电流 动作电位时程 姜黄素

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Orai1通道在高血压大鼠心房纤维化中的作用机制研究 被引量：1

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作者 梁海丹 杨慧 +6 位作者 李倩 秦晓玥 李穗敏 陈淑贞 邝素娟 饶芳 邓春玉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期779-787,共9页

目的:明确Orai1通道对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心房纤维化及房颤(atrial fibrillation,AF)易感性的影响。方法:采用45~46周龄的Wistar大鼠(n=16)及SHR(n=13)分别作为对照组和实验组,快速起搏心房观察两... 目的:明确Orai1通道对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心房纤维化及房颤(atrial fibrillation,AF)易感性的影响。方法:采用45~46周龄的Wistar大鼠(n=16)及SHR(n=13)分别作为对照组和实验组,快速起搏心房观察两组大鼠AF的可诱发性。HE和Masson染色观察两组大鼠心房组织的纤维化程度。Western blot检测两组大鼠心房组织纤维化相关的Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ,Col1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ,Col3)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9,以及钙信号通路相关蛋白Orai1、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)和活化T细胞核因子3(nuclear factor of activated T cells 3,NFAT3)的表达。在原代培养的乳大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)上,利用腺病毒转染使其过表达Orai1后,采用Western blot检测细胞中纤维化相关因子的表达变化,并观察CaN抑制剂环孢素A(cyclosporine A,CsA)对其表达的影响;用Fluo4 AM荧光探针法观察过表达Orai1的CFs中钙浓度的变化。结果:与Wistar大鼠相比,SHR的AF诱发率显著增加(P<0.05),心房组织中纤维化相关因子MMP2、MMP9、Col1和Col3蛋白表达显著上调(P<0.05),Orai1、CaN和NFAT3亦显著上调(P<0.05)。过表达Orai1可促进CFs中纤维化相关因子MMP2、MMP9、Col1和Col3的表达(P<0.05),同时,Orai1通道介导的钙离子内流明显增加(P<0.05);CsA可明显逆转CFs中Orai1过表达的效应(P<0.05)。结论:Orai1通道上调可激活Ca^(2+)/CaN/NFAT3通路,促进CFs纤维化相关因子分泌;高血压大鼠心房纤维化增加可能与Orai1通道上调有关。 展开更多

关键词 心房纤维化 Orai1通道 自发性高血压大鼠 心肌成纤维细胞 房颤

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沙库巴曲缬沙坦通过逆转高血压大鼠心房结构重塑降低房颤易感性 被引量：13

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作者 李倩 李昕 +8 位作者 李路安 周慧珊 彭德威 张梦珍 王钊煜 邝素娟 邓春玉 饶芳 吴书林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期631-637,共7页

目的观察沙库巴曲缬沙坦(sacubitril/valsartan,Sac/Val,LCZ696)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心房结构重构及房颤(atrial fibrillation,AF)易感性的影响。方法24只7周龄,♂,SHR随机均分为SHR组,SHR+Val组(3... 目的观察沙库巴曲缬沙坦(sacubitril/valsartan,Sac/Val,LCZ696)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心房结构重构及房颤(atrial fibrillation,AF)易感性的影响。方法24只7周龄,♂,SHR随机均分为SHR组,SHR+Val组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))和SHR+Sac/Val组(60 mg·kg^(-1)·d^(-1)),分别给予缬沙坦和沙库巴曲缬沙坦治疗,8只Wistar大鼠作对照组。快速起搏心房观察不同药物处理组SHR电生理指标及AF的可诱发性。Western blot检测肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)和纤维化相关蛋白的表达。结果与Wistar大鼠相比,SHR组AF诱发率明显增加(P<0.05);左房组织中ACE-1、angiotensin蛋白表达明显上调(P<0.05),ACE2下调(P<0.05);Col1A1、Col3A1、TGF-β、MMP-9均明显上调(P<0.05)。缬沙坦和Sac/Val治疗后均可明显逆转上述检测指标,且以SHR+Sac/Val组改善效果更明显(P<0.05)。结论缬沙坦和沙库巴曲缬沙坦均可通过抑制RAS改善SHR左心房纤维化,降低房颤易感性,且沙库巴曲缬沙坦效果优于缬沙坦,有望成为新的房颤治疗药物。 展开更多

关键词 沙库巴曲缬沙坦 房颤 纤维化 肾素-血管紧张素系统 自发性高血压大鼠 缬沙坦

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2型糖尿病大鼠心功能变化及RAGE表达增强和钙调控异常 被引量：14

8

作者 练飞鸿 饶芳 +9 位作者 邝素娟 陈肖燕 杨慧 吴飞龙 张梦珍 麦丽萍 林秋雄 单志新 杨敏 邓春玉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期488-493,共6页

目的:通过自发性2型糖尿病大鼠观察糖尿病状态下大鼠的心脏结构和功能变化,同时探讨糖尿病心肌病的发病机制。方法:用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立糖尿病模型,Zucker lean(ZL)大鼠为对照组。利用超声多普勒法检... 目的:通过自发性2型糖尿病大鼠观察糖尿病状态下大鼠的心脏结构和功能变化,同时探讨糖尿病心肌病的发病机制。方法:用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立糖尿病模型,Zucker lean(ZL)大鼠为对照组。利用超声多普勒法检测ZDF大鼠心脏结构和功能的改变;麦胚凝集素染色计算单个心脏细胞面积;Western blot检测心肌细胞肥大标志物β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP),以及晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)、L型钙通道蛋白α1C亚基(L-type calcium channelα1C subunit,CaV1.2)和钙库操纵性钙通道相关功能蛋白Orai1的表达水平。结果:与ZL大鼠相比,ZDF大鼠的血糖和体重明显增加,左心室壁增厚,心脏舒张功能明显减弱,收缩功能轻度增强;ZDF大鼠左室心肌细胞表面积明显增大,心肌细胞肥大相关蛋白β-MHC和ANP的表达水平也明显增加;ZDF大鼠心肌组织中的RAGE和Orai1蛋白表达增高,CaV1.2蛋白表达下降(P<0.05)。结论:2型糖尿病大鼠心肌细胞肥大,心室肥厚,心功能代偿性增强,其机制可能与RAGE表达增强和钙调控异常有关。 展开更多

关键词 2型糖尿病 糖尿病心肌病 钙调控 Zucker糖尿病肥胖大鼠 晚期糖基化终产物受体

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毒胡萝卜素诱导大鼠冠状动脉平滑肌细胞内质网应激模型的建立 被引量：2

9

作者 陈肖燕 邓春玉 +5 位作者 邝素娟 杨慧 饶芳 单志新 林秋雄 姜立 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期128-132,共5页

目的:探讨SD大鼠冠状动脉平滑肌细胞(coronary artery smooth muscle cells,CASMCs)原代培养方法,并建立CASMCs内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。方法:用组织块贴壁法培养CASMCs,光学显微镜观察细胞形态。免疫荧光技... 目的:探讨SD大鼠冠状动脉平滑肌细胞(coronary artery smooth muscle cells,CASMCs)原代培养方法,并建立CASMCs内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。方法:用组织块贴壁法培养CASMCs,光学显微镜观察细胞形态。免疫荧光技术检测CASMCs的标志分子α-SMA和SM-MHC的表达。采用Western blot检测ERS发生的标志物BiP和CHOP的蛋白表达水平。结果:冠状动脉组织块贴壁培养6 d后,细胞从组织块边缘爬出,呈长梭型,9~10 d细胞生长汇合后表现出平滑肌细胞典型的"峰-谷"状。免疫荧光技术鉴定结果显示,α-SMA和SM-MHC表达呈阳性。不同浓度(0.5、1和2μmol/L)的毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)处理CASMCs 24 h后,Western blot结果显示,TG(1和2μmol/L)处理组的BiP和CHOP蛋白表达与对照组相比增加,差异具有统计学意义。与对照组相比较,1μmol/L TG处理CASMCs 24和48 h后BiP和CHOP蛋白表达显著性增加。结论:采用组织块贴壁法可以成功培养CASMCs。利用1μmol/L TG诱导24 h可建立CASMCs的ERS模型。 展开更多

关键词 冠状动脉平滑肌细胞 组织块贴壁法 内质网应激

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转录辅助激活因子p300通过调控TGF-β/Smad3信号通路参与高静水压诱导的心房纤维化 被引量：3

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作者 余声欢 曾珑 +5 位作者 饶芳 肖海茵 邓春玉 薛玉梅 吴书林 魏薇 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2021年第9期1237-1245,共9页

目的探讨转录辅助激活因子p300在高静水压诱导心房纤维化中的作用及可能机制。方法收集窦性心律、房颤、高血压合并房颤3组人左心耳组织,Western blot检测p300及TGF-β/Smad3信号通路蛋白及纤维化因子Ⅰ型/Ⅲ型胶原蛋白α1链(Col-1A1/Co... 目的探讨转录辅助激活因子p300在高静水压诱导心房纤维化中的作用及可能机制。方法收集窦性心律、房颤、高血压合并房颤3组人左心耳组织,Western blot检测p300及TGF-β/Smad3信号通路蛋白及纤维化因子Ⅰ型/Ⅲ型胶原蛋白α1链(Col-1A1/Col-3A1)、基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)的表达。以0、20和40 mmHg的静水压培养小鼠心耳成纤维细胞;对40 mmHg压力培养的细胞分别予姜黄素及敲低p300处理,Western blot检测p300及上述纤维化指标表达的变化;CCK-8法检测细胞增殖能力变化。结果房颤组、高血压合并房颤组患者组织和40 mmHg高静水压培养的细胞p300和TGF-β/Smad3信号通路蛋白及纤维化指标表达明显增加(P<0.05),细胞增殖能力增强(P<0.05);而给予姜黄素或敲低p300处理后,可逆转压力诱导的纤维化指标表达增加(P<0.05)同时降低细胞的增殖(P<0.05)。结论转录辅助激活因子p300通过调控TGF-β/Smad3信号通路参与高静水压诱导的心房纤维化。 展开更多

关键词 P300 高静水压 心房 纤维化 房颤 TGF-β/Smad3

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p300/p53/Smad3通路参与人心房成纤维细胞衰老相关心房纤维化 被引量：4

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作者 赖颖瑜 高小燕 +5 位作者 周慧珊 李昕 王钊煜 彭德威 饶芳 邓春玉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期18-26,共9页

目的:探究p300在人心房成纤维细胞(HAFs)衰老相关心房纤维化中的作用及其可能机制。方法:采用组织贴块法从人左心耳组织中分离HAFs并进行传代培养建立细胞衰老模型,检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性以比较P3和P7代细胞衰老程... 目的:探究p300在人心房成纤维细胞(HAFs)衰老相关心房纤维化中的作用及其可能机制。方法:采用组织贴块法从人左心耳组织中分离HAFs并进行传代培养建立细胞衰老模型,检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性以比较P3和P7代细胞衰老程度的不同。Western blot实验比较不同代数(P3、P7和P11)细胞的p300、p53和Smad3等衰老和纤维化相关因子的蛋白表达水平。高代数(P7)细胞给予不同浓度(6、9和12μmol/L)的p300抑制剂姜黄素处理或转染p300 shRNA质粒敲减p300的表达,低代数(P3)细胞转染p300过表达质粒,分别观察p53和Smad3等衰老和纤维化相关因子蛋白水平的变化。结果:随着HAFs传代,衰老细胞增加,伴随p300、p53、p21、p16、p-Smad3、基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)和纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)水平的升高(P<0.05)。姜黄素处理或转染p300 shRNA质粒后,高代数(P7)细胞的p53和Smad3等衰老和纤维化相关因子的蛋白水平减少(P<0.05);而过表达p300后,低代数(P3)细胞的p53和Smad3的蛋白水平明显增加(P<0.05)。结论:p300可以促进HAFs衰老相关纤维化,其机制可能是通过激活p53/Smad3通路实现的。 展开更多

关键词 p300蛋白 人心房成纤维细胞 细胞衰老 纤维化 p53/Smad3信号通路

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转录辅激活因子和乙酰基转移酶p300在心脏成纤维细胞衰老相关纤维化中的作用 被引量：2

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作者 高小燕 李昕 +5 位作者 韦鉴钦 Nanette Hahr BISHOPRIC 王钊煜 周慧珊 饶芳 邓春玉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2113-2120,共8页

目的:探讨转录辅激活因子和乙酰基转移酶p300在心脏成纤维细胞(CFs)衰老相关纤维化中的作用。方法:不同月龄的C57BL/6小鼠处死后取左心房组织或原代分离的CFs,Western blot检测p300蛋白,纤维化相关因子I型胶原蛋白α1链(Col1A1)、基质... 目的:探讨转录辅激活因子和乙酰基转移酶p300在心脏成纤维细胞(CFs)衰老相关纤维化中的作用。方法:不同月龄的C57BL/6小鼠处死后取左心房组织或原代分离的CFs,Western blot检测p300蛋白,纤维化相关因子I型胶原蛋白α1链(Col1A1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和转化生长因子β(TGF-β),以及衰老相关蛋白p53和p21的表达。将Cre酶转染来自p300+/+和p300 flox/+小鼠的原代培养CFs,筛选建立稳定敲除p300的CFs,PCR检测细胞基因型,Western blot检测沉默效率;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察敲除p300对CFs衰老率的影响,细胞计数观察细胞增殖能力。结果:随着月龄增加,小鼠左心房组织p300、Col1A1、MMP-2、TGF-β、p53和p21表达增加(P<0.05)。随着小鼠CFs传代代数增加,SA-β-G染色显示细胞衰老率增加,同时p300、Col1A1、MMP-2、TGF-β、p53和p21蛋白表达明显增加(P<0.05)。与野生型组相比,敲除p300的CFs随着代数的增加,未见衰老细胞,且细胞增殖能力明显强于对照组(P<0.05)。结论:心房组织中,p300可能参与CFs衰老相关纤维化。 展开更多

关键词 p300蛋白 心脏成纤维细胞 细胞衰老 纤维化

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