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三七总皂苷对心梗后心室重构大鼠肿瘤坏死因子-α与基质金属蛋白酶表达的影响及其作用机制 被引量:24
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作者 郭洁文 邓志军 +4 位作者 符永恒 杨敏 任斌 潘竞锵 刘若轩 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期2048-2050,共3页
目的研究三七总皂苷(PNS)对急性心肌梗死(AMI)后左室重构(LVRM)大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响并探讨其作用机制。方法除假手术组外采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立AMI模型,术后24h后随... 目的研究三七总皂苷(PNS)对急性心肌梗死(AMI)后左室重构(LVRM)大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响并探讨其作用机制。方法除假手术组外采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立AMI模型,术后24h后随机分为对照组和实验组,连续4周分别灌胃给予生理盐水、福辛普利和PNS低、中、高剂量,观察PNS对病鼠左室舒张末期内径(宽度)(LVIDd)、左室收缩末期内径(宽度)(LVIDs)、左室射血分数(EF)、左室收缩百分率(FS)、二尖瓣口舒张早期血流速度(MV)、心率等反映心功能变化指标及TNF-α与MMP-2表达的影响。结果PNS中、高剂量组的EF、FS及MV指标均显著提高(P<0.01或0.05);PNS低、中、高剂量组均能明显抑制TNF-α与MMP-2的表达(P<0.05)。结论PNS能够抑制TNF-α与MMP-2的分泌与释放,通过提高左室收缩和舒张功能,降低外周阻力,减轻AMI后LVRM大鼠的心肌缺血再灌注损伤,对病鼠AMI后LVRM心功能有保护和改善作用。 展开更多
关键词 三七总皂苷 急性心肌梗死 心室重构 心功能 肿瘤坏死因子-α 基质金属蛋白酶-2
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腺病毒表达载体对骨髓间充质干细胞分化能力的影响 被引量:8
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作者 单志新 林秋雄 +5 位作者 李晓红 邓春玉 周志凌 黄薇 黄晓忠 余细勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1132-1135,共4页
目的研究腺病毒感染骨髓间充质干细胞(MSC)对MSC分化潜能的影响。方法利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒感染传至3代的人MSC,分别在感染后第2、4、8和16天收集细胞,提取总RNA,利用RT-PCR检测感染前后MSC中内胚层标志基因CYP51、中... 目的研究腺病毒感染骨髓间充质干细胞(MSC)对MSC分化潜能的影响。方法利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒感染传至3代的人MSC,分别在感染后第2、4、8和16天收集细胞,提取总RNA,利用RT-PCR检测感染前后MSC中内胚层标志基因CYP51、中胚层标志基因SM22α、外胚层标志基因槽蛋白(nestin)、多分化潜能标志基因OCT4和可变剪切因子基因nPTB的表达。在腺病毒感染MSC7d后,利用成脂肪诱导剂继续诱导培养14d,用油红O染色观察MSC向脂肪细胞分化情况。结果RT-PCR检测显示,MSC中CYP51、SM22α、nestin、OCT4和nPTB在腺病毒感染后2、4、8和16d时仍有表达。腺病毒感染7d后的MSC仍可向脂肪细胞分化,且分化效率同正常MSC一致。结论腺病毒载体感染MSC后,不会影响MSC的分化能力,可以作为MSC诱导分化机制研究的基因表达载体。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 腺病毒 载体 分化
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利用酵母双杂交系统鉴定MIF与CD74胞外片段间的相互作用 被引量:2
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作者 单志新 林秋雄 +6 位作者 邓春玉 谭虹虹 邝素娟 肖定璋 朱杰宁 符永恒 余细勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2383-2386,2390,共5页
目的利用酵母双杂交系统鉴定巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与Ⅱ型穿膜蛋白CD74胞外片段间可能的相互作用区域。方法利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的人全长MIF、MIF50-65、MIF1-50/65-115的重组诱饵质粒,以pGADT7为载体的人CD747... 目的利用酵母双杂交系统鉴定巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与Ⅱ型穿膜蛋白CD74胞外片段间可能的相互作用区域。方法利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的人全长MIF、MIF50-65、MIF1-50/65-115的重组诱饵质粒,以pGADT7为载体的人CD7473-232、CD7473-109、CD74109-149、CD74149-232的重组激活域(AD)质粒。用PEG/LiAC法将上述重组诱饵质粒分别与重组AD质粒两两共转化感受态酵母菌AH109,分别观察在SD/-Trp-Leu、含X-α-gal的SD/-Trp-Leu-Ade-His培养基上生长情况。结果限制性内切酶酶切和DNA测序证实所构建的重组质粒全部正确。3种重组诱饵质粒转化的酵母菌AH109均可在SD/-trp上生长,4种重组AD质粒转化的酵母菌AH109均可在SD/-leu上生长,而且上述转化的酵母菌AH109均无自身转录激活活性。只有MIF、MIF50-65、MIF1-50/65-115与CD7473-232表达质粒共转化的酵母菌AH109可在SD/-Trp-Leu-Ade-His培养基上生长,能激活MEL1报告基因,使X-α-gal变蓝。结论MIF能以功能域MIF50-65非依赖性方式与完整的CD74胞外片段相互结合,进行细胞信号转导。 展开更多
关键词 酵母双杂交 巨噬细胞移动抑制因子 CD74 蛋白质相互作用 克隆 分子
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利用双萤光素酶报告基因系统筛选有效的siRNA 被引量:1
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作者 单志新 林秋雄 +4 位作者 谭虹虹 邓春玉 刘晓颖 肖定璋 余细勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1577-1581,1584,共6页
目的建立一种利用双萤光素酶报告基因系统筛选能有效抑制目的基因表达的小干扰RNA(siRNA)的方法。方法以绿色荧光蛋白(GFP)基因为研究对象,构建3个候选的靶向GFP的siRNA表达质粒pSi-GFPsiRNA1、pSi-GFPsiRNA2、pSi-GFPsiRNA3和阴性对照p... 目的建立一种利用双萤光素酶报告基因系统筛选能有效抑制目的基因表达的小干扰RNA(siRNA)的方法。方法以绿色荧光蛋白(GFP)基因为研究对象,构建3个候选的靶向GFP的siRNA表达质粒pSi-GFPsiRNA1、pSi-GFPsiRNA2、pSi-GFPsiRNA3和阴性对照pSi-Negative。构建拥有同一Kozak共有翻译启始序列、翻译启始密码子ATG的GFP与萤光素酶基因(LUC)的融合表达载体pGL3-GFPf。将包含3个GFPsiRNA靶序列的GFP片段插入到改建过的pGL3-promoter载体上LUC的3'非翻译区(UTR),构建pGL3-GFPp。将GFPsiRNA表达质粒联同内参照质粒pRL-TK分别与pGL3-GFPf、pGL3-GFPp共转化HEK293细胞。利用双萤光素酶检测试剂盒测定各组细胞中萤光素酶的活力水平,用荧光定量PCR检测各组细胞中GFPmRNA的表达水平。结果同对照组相比,与pGL3-GFPf共转化GFPsiRNA表达质粒的各组细胞中萤火虫萤光素酶/海肾萤光素酶比值明显降低,其中GFPsiRNA1表达组中降低最显著(P<0.01);定量PCR检测也显示,GFPsiRNA1表达组中GFPmRNA的表达水平降低最明显(P<0.01)。双萤光素酶活性检测和定量PCR结果还显示,与pGL3-GFPp共转化GFPsiRNA表达质粒的各组细胞中,GFPsiRNA1抑制GFP的表达最显著(P<0.01)。结论本文建立了通过双萤光素酶活性检测来筛选有效的siRNA的方法,并为进行多个基因的有效siRNA的筛选提供解决方案。 展开更多
关键词 双萤光素酶报告基因系统 RNA干扰 荧光定量PCR 绿色荧光蛋白
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