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急性髓系白血病维奈克拉耐药细胞株的构建及耐药机制研究
1
作者 刘凯帆 曾令基 +5 位作者 耿素霞 黄欣 李敏明 赖沛龙 翁建宇 杜欣 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第4期986-997,共12页
目的:构建BCL-2抑制剂维奈克拉耐药的急性髓系白血病(AML)细胞株,检测维奈克拉耐药细胞株对BCL-2家族蛋白的敏感性,并探讨其耐药的机制。方法:利用CCK-8法筛选对维奈克拉相对敏感的急性髓系白血病细胞株(MV4-11、MOLM13、OCI-AML2),低... 目的:构建BCL-2抑制剂维奈克拉耐药的急性髓系白血病(AML)细胞株,检测维奈克拉耐药细胞株对BCL-2家族蛋白的敏感性,并探讨其耐药的机制。方法:利用CCK-8法筛选对维奈克拉相对敏感的急性髓系白血病细胞株(MV4-11、MOLM13、OCI-AML2),低浓度维奈克拉持续诱导细胞株产生耐药,CCK-8法、流式细胞术分别检测耐药前后的细胞活力、凋亡率,BH3分析法分析耐药细胞株线粒体凋亡通路中促凋亡蛋白的失衡以及对药物敏感性的变化,并用实时荧光定量PCR检测耐药细胞系以及多药耐药患者BCL-2家族蛋白表达水平的改变。结果:成功构建了MV4-11、MOLM13、OCI-AML2的维奈克拉耐药细胞株,IC50均达到10倍以上,在相同浓度的维奈克拉作用下,耐药细胞凋亡率明显下降(P<0.05);BH3分析显示,耐药细胞株对促凋亡蛋白(如BIM、BID和NOXA)敏感性增加;实时荧光定量PCR检测结果显示,耐药细胞株中MCL1表达上调,NOXA1表达下调。维奈克拉耐药患者MCL1、NOXA1表达变化与本研究所建立的耐药细胞系结果一致。结论:本研究通过低浓度持续诱导法成功构建了维奈克拉耐药的AML细胞株,维奈克拉耐药导致了细胞线粒体凋亡通路的改变以及对促凋亡蛋白BIM、BID和NOXA的敏感性上升,这可能与耐药细胞中MCL1表达上调、NOXA1表达下调有关。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 维奈克拉 BCL-2家族 耐药 抗凋亡蛋白
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AML1-ETO阳性急性髓系白血病患者c-kit突变及其临床意义 被引量：5
2
作者 耿素霞 杜欣 +6 位作者 翁建宇 黄欣 陆泽生 钟立业 郭荣 吴穗晶 吴萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期839-842,共4页
本研究探讨AML1-ETO融合基因阳性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者c-kit突变的发生情况及其临床意义。采用PCR和直接测序法检测31例AML1-ETO阳性AML患者c-kit基因17外显子突变的发生情况,并分析c-kit基因突变与患者的临... 本研究探讨AML1-ETO融合基因阳性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者c-kit突变的发生情况及其临床意义。采用PCR和直接测序法检测31例AML1-ETO阳性AML患者c-kit基因17外显子突变的发生情况,并分析c-kit基因突变与患者的临床、实验室特征以及疗效的关系。结果表明:31例患者中14例检测到c-kit突变,突变率为45.16%,突变组男性患者的比例为71.43%、初诊时白细胞计数>10×109/L患者的比例为78.57%和伴有髓外浸润患者的比例为21.43%,均明显高于无突变组(29.41%、41.18%、0%,P=0.020,0.036,0.045),两组患者的年龄和骨髓原始细胞比例无明显差异(P=0.437和0.510)。c-kit突变和无突变组化疗完全缓解(CR)率(64.29%∶80%)和复发率(58.33%∶21.43%)的差异无统计学意义(P=0.344和0.054),而死亡率(57.14%)在c-kit突变组明显高于无突变组(20%,P=0.039)。结论:AML1-ETO阳性AML患者c-kit突变常见,突变患者预后差,常规检测c-kit突变对患者的危险度分层、预后评估和选择有效治疗方案有重要意义。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 AML1-ETO融合基因 c-kit突变
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凋亡抑制基因aven在急性髓系白血病的表达及其临床意义 被引量：3
3
作者 耿素霞 杜欣 +4 位作者 翁建宇 钟立业 郭荣 陆泽生 陈志红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期1424-1428,共5页
本研究旨在探讨AML患者凋亡抑制基因aven mRNA的表达情况,分析其临床意义,为预后评估提供实验依据。应用实时荧光定量PCR方法检测69例初诊AML患者外周血白细胞aven mRNA的表达水平,分析aven mRNA的表达水平与患者的年龄、性别、白细胞数... 本研究旨在探讨AML患者凋亡抑制基因aven mRNA的表达情况,分析其临床意义,为预后评估提供实验依据。应用实时荧光定量PCR方法检测69例初诊AML患者外周血白细胞aven mRNA的表达水平,分析aven mRNA的表达水平与患者的年龄、性别、白细胞数,血小板计数、血红蛋白和LDH水平、外周血和骨髓的原始细胞比例、FAB分型、患者的疗效和复发的关系,21名正常人的外周血作为对照。结果表明:69例初诊AML患者aven mRNA表达水平的中位值为37.2(11.72-178.93)%,正常人外周血白细胞aven mRNA表达水平中位值为28.81(10.81-50.98)%,AML患者aven mRNA表达水平明显高于正常人(p=0.006)。aven mRNA的表达水平与患者的年龄具有明显的相关性(r=0.25,p=0.039),以AML患者中位年龄(44岁)为界分为2组,年龄大于/等于44岁组aven mRNA表达水平[中位值50.08%,(18.88-152.02)%]明显高于年龄小于44岁组[中位值32.41%,(11.72 -178.93)%],(p=0.018)。aven mRNA的表达水平与患者Hb水平和FAB分型具有明显的相关性(r=0.29,p=0.019;r=0.253,p=0.036)。2个化疗疗程后aven mRNA表达水平低于中位值组的完全缓解率(25/30,83.33%)高于aven mRNA表达水平高于中位值组(21/30,70%),但差别无统计学意义(p=0.22)。复发患者aven mRNA的表达水平与无复发者相比无明显升高(p=0.076)。结论:初诊AML患者凋亡抑制基因aven mRNA的表达水平明显升高,可能与AML的发病有关,但尚未发现基因aven mRNA的表达情况与疾病的疗效和复发之间的关系。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 凋亡抑制基因 aven基因 实时定量PCR
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地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞敏感性研究 被引量：3
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作者 李倩 魏姗姗 +6 位作者 李劲高 陈少贤 陈景 黄晖婷 彭琪 夏平方 佘妙容 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期85-89,共5页
目的:探讨地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞(LSC)的作用及其机制。方法:应用免疫磁珠法从KG1a细胞中分选LSC。从健康供者的外周血分离纯化同种异体反应性自然杀伤(allo-reactive natural killer,a1-Io-NK)细胞;LDH法检测allo-N... 目的:探讨地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞(LSC)的作用及其机制。方法:应用免疫磁珠法从KG1a细胞中分选LSC。从健康供者的外周血分离纯化同种异体反应性自然杀伤(allo-reactive natural killer,a1-Io-NK)细胞;LDH法检测allo-NK细胞对LSC的杀伤作用,流式细胞术检测allo-NK细胞诱导LSC凋亡及LSC表面NKG2D配体MICA/B和ULBP1-3的表达。结果:地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,allo-NK细胞对LSC的杀伤率明显增高,在效靶比为5:1、10:1、20:1时分别为(60.52%±3.52%vs 22.08%±2.07%、73.93%±2.33%vs 28.99%±3.13%、83.08%±1.32%vs 36.44%±2.40%),差异有统计学意义(P<0.05);地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,在效靶比为10:1时,allo-NK细胞诱导LSC的凋亡率为7.84%±0.34%,明显高于LSC未处理组(3.33%±0.64%),差异有统计学意义(P<0.05);地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,LSC表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达上调,高于未处理组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:地西他滨可能通过上调NKG2D配体增强allo-NK细胞对LSC的杀伤作用。 展开更多
关键词 地西他滨 白血病干细胞 allo-NK细胞 NKG2D配体
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TLR4炎症通路与慢性移植物抗宿主病合并干眼症的相关性 被引量：2
5
作者 赖沛龙 王玉连 +1 位作者 翁建宇 杜欣 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第24期4048-4051,共4页
目的:探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路与慢性移植物抗宿主病(cGVHD)合并干眼症的关系,以揭示炎症反应在该疾病发生发展中的作用。方法:纳入18例诊断为cGVHD合并干眼症的患者,并以18例移植后发生cGVHD但没有合并干眼症患者为对照。采集两... 目的:探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路与慢性移植物抗宿主病(cGVHD)合并干眼症的关系,以揭示炎症反应在该疾病发生发展中的作用。方法:纳入18例诊断为cGVHD合并干眼症的患者,并以18例移植后发生cGVHD但没有合并干眼症患者为对照。采集两组患者的干眼评分、OSDI评分和Schirmer′s实验结果。收集患者外周静脉血并应用实时定量PCR或ELISA的方法检测TLR4、NF-κB、TNF-α的表达水平。结果:cGVHD合并干眼症患者外周血中的TLR4、NF-κB、TNF-α的m RNA水平均较对照组明显升高。相关性分析显示TLR4表达水平与cGVHD合并干眼症的OSDI评分呈正相关和Schirmer′s结果呈负相关。结论:TLR4介导的炎症信号通路参与了cGVHD合并干眼症的发生、发展。 展开更多
关键词 TOLL样受体4 慢性移植物抗宿主病 干眼症
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异基因造血干细胞移植术后嗜酸细胞增高临床意义 被引量：1
6
作者 罗成伟 翁建宇 +3 位作者 吴穗晶 陆泽生 钟立业 杜欣 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第2期266-269,共4页
目的:本文回顾性分析了2001年7月至2010年3月在广东省人民医院接受异基因造血干细胞移植资料齐全的161例患者外周血嗜酸细胞的变化,旨在探讨移植后嗜酸细胞增高的危险因素及其临床意义。方法:评估异基因造血干细胞移植术后患者外周血嗜... 目的:本文回顾性分析了2001年7月至2010年3月在广东省人民医院接受异基因造血干细胞移植资料齐全的161例患者外周血嗜酸细胞的变化,旨在探讨移植后嗜酸细胞增高的危险因素及其临床意义。方法:评估异基因造血干细胞移植术后患者外周血嗜酸细胞的数量,超过0.5×109/L者定义为嗜酸细胞增高。结果:移植后有57例患者出现外周血嗜酸细胞增高,HLA不全相合是发生嗜酸细胞增高的危险因素(P=0.001)。Ⅱ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病(GVHD)(P=0.012)、慢性GVHD(P=0.001)是引起嗜酸细胞增高的高危因素。发生嗜酸细胞增高的患者移植后2年总生存率为85.9%,明显高于未发生嗜酸细胞增高患者(44.2%,P<0.001)。结论:外周血嗜酸细胞增高是异基因造血干细胞移植术后的常见并发症,其发生与Ⅱ-Ⅳ度急性GVHD及慢性GVHD有关,是评估患者预后的有效指标。 展开更多
关键词 异基因造血干细胞移植 嗜酸细胞增高 移植物抗宿主病
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慢性粒-单核细胞白血病患者BTLA及其配体HVEM的表达及其意义 被引量：6
7
作者 李超 耿素霞 +7 位作者 李敏明 苏芳 陈晓梅 邓程新 黄欣 赖沛龙 翁建宇 杜欣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期56-62,共7页
目的:探讨B和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)在慢性粒单核细胞白血病(CMML)患者中的表达情况及其意义。方法:采用real-time PCR方法检测11例慢性粒单核细胞白血病患者和11例正常供者外周血BTLA及其配体HVEM mRNA的表达情况;流式细胞术检测外周... 目的:探讨B和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)在慢性粒单核细胞白血病(CMML)患者中的表达情况及其意义。方法:采用real-time PCR方法检测11例慢性粒单核细胞白血病患者和11例正常供者外周血BTLA及其配体HVEM mRNA的表达情况;流式细胞术检测外周血T淋巴细胞及γδT细胞表面BTLA及其HVEM的表达。结果:CMML患者外周血BTLA及其配体HVEM mRNA表达水平的中位值分别为0.009%和559.4%,明显低于正常对照组(0.053%和1031%)(P<0.001);外周血T淋巴细胞表面BTLA其配体HVEM的表达水平较正常对照组无明显差异(P=0.3031和0.2576),但CMML患者外周血T淋巴细胞比例(中位值:37.73%)却明显低于正常对照组(中位值:69.23%)(P=0.0005)。CMML患者外周血γδT细胞表面BTLA表达(中位值:23.26%)较对照组(中位值:52.64%)明显降低(P<0.05),HVEM表达无明显异常(P=0.2791)。结论:CMML患者外周血BTLA以及配体HVEM的表达、T淋巴细胞比例以及γδT细胞表面BTLA的表达降低,这些异常对T细胞功能及患者的预后和疗效的影响尚需进一步研究。 展开更多
关键词 慢性粒单核细胞白血病 BTLA HVEM T淋巴细胞
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骨髓增生异常综合征患者骨髓γδT细胞及其亚群的水平及意义 被引量：3
8
作者 奚睿汀 耿素霞 +6 位作者 黄欣 李敏明 邓程新 王玉连 黄励思 翁建宇 杜欣 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第24期3195-3199,共5页
目的了解骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓γδT细胞及其亚群的水平,探索MDS患者骨髓微环境的免疫缺陷状况。方法收集MDS患者治疗前后及正常供者骨髓样本,多色流式检测骨髓γδT细胞及亚群水平,并分析MDS患者... 目的了解骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓γδT细胞及其亚群的水平,探索MDS患者骨髓微环境的免疫缺陷状况。方法收集MDS患者治疗前后及正常供者骨髓样本,多色流式检测骨髓γδT细胞及亚群水平,并分析MDS患者治疗后各细胞亚群的变化。结果MDS患者骨髓γδT细胞和滤泡辅助性γδT细胞明显降低(P<0.05)。不同分化程度的γδT细胞,仅初始γδT细胞水平明显降低(P=0.037),中枢记忆、效应记忆和终末分化γδT细胞MDS患者与正常供者差异无统计学意义(P>0.05)。免疫检查点PD1和TIM3阳性的γδT细胞分别存在一定程度的降低和升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后获得疗效患者的γδT细胞和初始γδT细胞水平较治疗前明显升高,效应记忆γδT细胞较治疗前明显降低(P<0.05),85.71%(6/7)的MDS患者γδ+TIM3+T细胞水平治疗后不同程度的降低。结论MDS患者骨髓微环境γδT细胞及其亚群的水平存在不同程度的异常,治疗有效的患者,异常的γδT细胞恢复,通过γδT细胞及亚群水平检测可了解MDS的免疫缺陷状态,有可能作为判断疗效的指标,并为抗肿瘤免疫疗法提供新的资料。 展开更多
关键词 骨髓增生异常综合征 ΓΔT细胞 滤泡辅助性γδT细胞 调节性γδT细胞 程序性死亡受体1 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3
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荧光素酶标记的KG1a细胞构建急性髓系白血病小鼠模型及其鉴定 被引量：1
9
作者 张维娅 曾高淳 +7 位作者 陈晓梅 耿素霞 王玉连 罗琼 罗柳萍 赖沛龙 翁建宇 杜欣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1429-1435,共7页
目的:利用荧光素酶标记的KG1a急性髓系细胞株构建能够在活体水平观察肿瘤负荷的急性髓系白血病小鼠模型。方法:经慢病毒及嘌呤霉素筛选构建能稳定表达荧光素酶的KG1a细胞(KG1a-Luc细胞);将18只8-12周龄的雄性NOD-SCID-IL2rg^(-/-)小鼠... 目的:利用荧光素酶标记的KG1a急性髓系细胞株构建能够在活体水平观察肿瘤负荷的急性髓系白血病小鼠模型。方法:经慢病毒及嘌呤霉素筛选构建能稳定表达荧光素酶的KG1a细胞(KG1a-Luc细胞);将18只8-12周龄的雄性NOD-SCID-IL2rg^(-/-)小鼠随机均分为2组,模型组小鼠每只尾静脉注射200μl含有5×10^(6)KG1a-Luc细胞的PBS,对照组小鼠每只尾静脉注射200μl PBS;通过生物发光成像技术于活体水平监测小鼠肿瘤负荷;尾静脉采血后,经流式细胞术检测小鼠外周血中肿瘤细胞占比;颈椎脱臼法处死小鼠后,取小鼠骨髓及脾脏制备涂片,取肝脏制备石蜡切片,染色后镜下观察肿瘤浸润情况;记录并比较2组小鼠生存时间。结果:经过慢病毒转染、嘌呤霉素筛选后能够得到稳定表达荧光素酶的KG1a细胞;d 17使用生物发光成像技术显示模型组小鼠出现明显荧光;各模型组小鼠的外周血中均能检出KG1a-Luc肿瘤细胞群,平均比率为(16.27±6.66)%;形态学及病理学检查显示,骨髓、脾脏及肝脏均有KG1a-Luc细胞浸润;与对照组相比,模型组小鼠的生存时间显著缩短,其中位生存时间为30.5 d(95%CI:0.008-0.260)。结论:NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠经尾静脉注射5×10^(6)KG1a-Luc细胞后能够成功稳定建立在活体水平观察肿瘤负荷急性髓系白血病小鼠模型。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 KG1a细胞 荧光素酶 动物模型 活体荧光成像
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