α-酮戊二酸介导异柠檬酸脱氢酶3A发挥抑制心肌细胞肥大的作用

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作者 伍华燕 温艺红 +5 位作者 赵亨利 高原 周川孟 王娅 朱杰宁 单志新 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2025年第2期275-283,共9页

【目的】探究异柠檬酸脱氢酶3A(IDH3A)对心肌细胞肥大的调控作用和潜在机制。【方法】通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot实验检测健康志愿者(n=10)与心力衰竭患者(n=10)心肌组织标本、假手术组与主动脉弓缩窄术(TAC)小鼠心肌... 【目的】探究异柠檬酸脱氢酶3A(IDH3A)对心肌细胞肥大的调控作用和潜在机制。【方法】通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot实验检测健康志愿者(n=10)与心力衰竭患者(n=10)心肌组织标本、假手术组与主动脉弓缩窄术(TAC)小鼠心肌标本以及去氧肾上腺素(PE)诱导的乳大鼠心肌细胞(NRVCs)中IDH3A的表达水平。利用腺病毒介导在PE诱导的NRVCs中过表达IDH3A,检测其对NRVCs肥厚相关基因表达的影响,并通过鬼笔环肽染色检测IDH3A对NRVCs面积的影响。利用序列突变方式构建消除IDH3A酶活性的突变体(IDH3A_D208A),通过检测其对NRVCs肥大表型、ATP和ROS水平影响来验证IDH3A是否依赖酶活性发挥调节心肌细胞肥大作用。Western blot和鬼笔环肽染色检测外源给予α-酮戊二酸(AKG)对心肌细胞肥大的影响。【结果】IDH3A在心衰患者心肌、TAC手术小鼠心肌、PE诱导的NRVCs中表达均显著下调(分别为P=0.0052、P=0.0266、P=0.0413和P=0.0066)。过表达IDH3A可显著抑制PE诱导的NRVCs中肥厚相关基因表达和细胞表面积增大(分别为P<0.0001、P=0.0001和P=0.0002)。ATP和ROS水平检测结果表明过表达IDH3A能够抑制PE诱导的NRVCs中ATP和ROS水平的增加(分别为P=0.0012和P<0.0001),而无酶活性的IDH3A突变体则不具备该作用。外源给予AKG可以,而无酶活性的IDH3A突变体无法抑制PE诱导的NRVCs肥大。【结论】IDH3A通过生成AKG发挥抑制心肌细胞肥大的作用,为以IDH3A为靶点的心肌肥厚治疗研究提供科学资料。 展开更多

关键词 心肌肥厚 异柠檬酸脱氢酶3A Α-酮戊二酸 心肌细胞 线粒体

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CircSLC8A1_005通过编码蛋白抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用 被引量：2

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作者 胡雅婷 高原 +5 位作者 伍华燕 梁俣 李晖 徐金东 刘宇鹏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期35-44,共10页

【目的】探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。【方法】利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circSLC8A1_005,并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1... 【目的】探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。【方法】利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circSLC8A1_005,并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和平滑肌肌动蛋白α2(Acta2)基因表达,通过EdU和划痕实验检测不同干预对mCFs的增殖和迁移能力的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circSLC8A1_005包含的潜在核糖体进入序列(IRES)的活性。通过Western blot实验检测circSLC8A1_005翻译蛋白SLC8A1-605aa及其在细胞内分布情况。双萤光素酶报告基因实验检测SLC8A1-605aa对超氧化物歧化酶2(Sod2)的转录激活作用。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA的结合作用。放线菌素D实验检测SLC8A1-605aa对Sod2 mRNA稳定性的影响。【结果】利用腺病毒可在mCFs中有效介导过表达circSLC8A1_005,过表达circSLC8A1_005可显著抑制mCFs中纤维化相关基因表达,抑制mCFs的增殖和迁移能力。双萤光素酶报告基因实验结果提示circ⁃SLC8A1_005包含的2个IRES具有活性。Western blot检测结果显示circSLC8A1_005可翻译预期大小为70 ku的SLC8A1-605aa蛋白,并主要分布于细胞核内。过表达SLC8A1-605aa和circSLC8A1_005可一致地抑制mCFs的纤维化表型。SLC8A1-605aa可特异上调超氧化物歧化酶2(Sod2)表达,但并不能转录激活Sod2表达;RIP实验结果显示SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA有特异结合作用,而放线菌素D实验结果显示SLC8A1-605aa能够增强Sod2 mRNA的稳定性。【结论】CircSLC8A1_005通过翻译蛋白SLC8A1-605aa发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用,SLC8A1-605aa可能是潜在的用于心肌纤维化治疗的靶点。 展开更多

关键词 心肌纤维化 环形RNA circSLC8A1_005 翻译 心肌成纤维细胞

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丙酮酸激酶同工酶M2介导长非编码RNA RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大作用

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作者 李艺 温艺红 +5 位作者 伍华燕 姜佳雪 欧涛 陈凯茵 刘宇鹏 单志新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期544-553,共10页

越来越多的证据表明,长非编码RNA(lncRNA)在生物学功能调节中发挥着重要的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)检测显示,与健康器官捐献者(n=23)相比,长非编码RNARP11-879F14.2在心力衰竭(heart failure,HF)患者(n=21)心肌中表达水平显著升高,... 越来越多的证据表明,长非编码RNA(lncRNA)在生物学功能调节中发挥着重要的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)检测显示,与健康器官捐献者(n=23)相比,长非编码RNARP11-879F14.2在心力衰竭(heart failure,HF)患者(n=21)心肌中表达水平显著升高,但其在心肌肥厚调节中可能的作用和机制尚不清楚。利用腺病毒介导在乳小鼠心肌细胞(neonatal mouse ventricular cardiomyocytes,NMVCs)和乳大鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular cardiomyocytes,NRVCs)中过表达RP11-879F14.2,检测对NMVCs中心肌肥厚相关基因,包括肌球蛋白重链(MYH7)、骨骼肌肌动蛋白(Acta1)以及心钠素(NPPA)表达的影响,结果显示,过表达RP11-879F14.2可显著抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达。RT-qPCR和Western印迹结果证实,当过表达RP11-879F14.2时可显著促进NMVCs中丙酮酸激酶同工酶M2(PKM 2)表达。并且,过表达PKM 2和RP11-879F14.2可一致地抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达和去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导NRVCs的表面积增加,而敲降PKM 2可逆转RP11-879F14.2对NMVCs中心肌肥厚相关基因表达的抑制作用。利用Seahorse 96XF细胞能量分析仪检测显示,过表达RP11-879F14.2和PKM 2可一致增加NMVCs中葡萄糖代谢水平,而沉默PKM 2对RP11-879F14.2上调NMVCs中糖酵解、三羧酸(TCA)循环和线粒体电子传递链(ETC)相关基因的表达有显著的抑制作用。因此,PKM 2介导RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多

关键词 心肌肥厚 心肌细胞 长非编码RNA 丙酮酸激酶同工酶M2

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环状RNA circ_0120051通过miR-144-3p/IDH2轴抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型研究

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作者 梁俣 胡志琴 +5 位作者 温艺红 伍华燕 王娅 刘宇鹏 单志新 方咸宏 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期196-205,共10页

【目的】研究环形RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。【方法】通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(S... 【目的】研究环形RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。【方法】通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性。RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况。利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circ_0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响。通过RNA免疫共沉淀技术(RIP)验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2)3’-UTR的结合位点。【结果】Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主基因SLC8A1表达无显著差异。Circ_0120051主要定位于人心肌细胞的胞质中。RNase R消化实验证实circ_0120051相对于线性SLC8A1 mRNA具有典型的环状RNA稳定性。过表达circ_0120051可抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的迁移能力。RIP实验证实circ_0120051与miR-144-3p之间具有明显结合作用。在mCFs中转染miR-144-3p可促进纤维化相关基因的表达,并有效逆转circ_0120051对mCFs纤维化表型的抑制作用。双萤光素酶报告基因实验证实miR-144-3p与Idh2的3’-UTR存在结合作用。miR-144-3p可在转录水平抑制mCFs中Idh2表达,而过表达circ_0120051可增加mCFs中IDH2表达。在mCFs中转染miR-144-3p和Idh2的小干扰RNA(siRNA),可一致性地逆转circ_0120051对纤维化相关基因表达和mCFs迁移的抑制作用。【结论】Circ_0120051通过特异结合miR-144-3p并增加其靶基因IDH2表达来发挥抑制mCFs纤维化表型的作用。 展开更多

关键词 心肌纤维化 环状RNA 微RNA Circ_0120051 心肌成纤维细胞

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Circ_0018478通过编码HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用 被引量：4

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作者 丰嘉欣 郭继深 +5 位作者 梁俣 姜佳雪 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期995-1004,共10页

【目的】探究环状RNA circ_0018478调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用和可能机制。【方法】RTqPCR检测健康器官捐献者(n=18)和心衰(n=28)患者心肌中circ_0018478及其宿主基因含E3泛素蛋白连接酶4的HECT和RLD结构域(HERC4)的表达水平... 【目的】探究环状RNA circ_0018478调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用和可能机制。【方法】RTqPCR检测健康器官捐献者(n=18)和心衰(n=28)患者心肌中circ_0018478及其宿主基因含E3泛素蛋白连接酶4的HECT和RLD结构域(HERC4)的表达水平。荧光原位杂交(FISH)实验和核质RNA定量检测circ_0018478的细胞分布情况,放线菌素D干预实验和核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验检测circ_0018478的RNA稳定性。过表达腺病毒介导的circ_0018478时,分别在RNA和蛋白水平检测乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中如Ⅰ型和Ⅲ型胶原等纤维化相关基因表达的影响。利用EdU染色和Trans-well细胞迁移实验鉴定circ_0018478对mCFs增殖和迁移能力的影响。质谱shot-gun分析circ_0018478可能翻译蛋白的肽段序列。利用小干扰RNA(siRNA)抑制HERC4-193表达,检测对circ_0018478调控mCFs纤维化表型的影响。【结果】在心衰病人心肌中,相较于无显著表达差异的宿主基因HERC4,环形RNA circ_0018478表达显著增加。FISH和核质分离实验结果证实circ_0018478主要定位于心肌细胞胞质中。放线菌素D和RNase R消化实验证实circ_0018478具有典型的RNA稳定性。过表达circ_0018478可抑制mCFs的增殖、迁移和纤维化相关基因的表达。质谱shot-gun和Western blot检测结果提示circ_0018478可翻译预期的HERC4-193蛋白。过表达circ_0018478和HERC4-193可一致地抑制mCFs的纤维化表型,而抑制HERC4-193表达可有效减弱circ_0018478抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用(P<0.05)。【结论】Circ_0018478通过翻译蛋白HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用。 展开更多

关键词 心肌纤维化 circ_0018478 翻译 心肌成纤维细胞

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circRNA_100395通过结合miR-31-5p抑制心肌细胞肥大相关基因的表达 被引量：4

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作者 郭晶 陈丽文 +7 位作者 温艺红 黄智琪 陈泽润 刘彦俊 朱杰宁 方咸宏 徐金东 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期56-64,共9页

目的:探讨环状RNA(circRNA)_100395对心肌细胞肥大表型的影响及其作用机制。方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=8)与心衰患者(n=14)心肌组织中circRNA_100395及其宿主基因Kelch蛋白样家族成员20(KLHL20)的表达水平。原代分离、培养... 目的:探讨环状RNA(circRNA)_100395对心肌细胞肥大表型的影响及其作用机制。方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=8)与心衰患者(n=14)心肌组织中circRNA_100395及其宿主基因Kelch蛋白样家族成员20(KLHL20)的表达水平。原代分离、培养乳小鼠心室肌细胞(NMVCs),分别感染对照病毒(rAd-GFP)和circRNA_100395重组腺病毒(rAd-circRNA_100395)24 h,探究circRNA_100395对心肌肥大相关的β-肌球蛋白重链(β-MHC)、骨骼肌α-肌动蛋白(ACTA1)及心房钠尿肽(ANP)表达的影响。采用鬼笔环肽染色检测circRNA_100395对血管紧张素II(AngII)处理的NMVCs肥大反应的影响。通过双萤光素酶报告基因实验及RNApull-down实验验证微小RNA-31-5p(miR-31-5p)与circRNA_100395的结合作用。通过转染miR-31-5p mimic至NMVCs中,检测miR-31-5p对circRNA_100395抑制心肌肥大相关基因表达的影响。结果:在心衰患者心肌组织中,circRNA_100395表达水平及其宿主基因KLHL20的mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。过表达circRNA_100395可以降低NMVCs中心肌肥大相关基因Myh7(编码β-MHC蛋白)、Acta1及Anp的表达,抑制AngII的促NMVCs肥大反应(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验和RNApull-down实验结果表明miR-31-5p与circRNA_100395存在相互结合作用。过表达miR-31-5p可减弱circRNA_100395对心肌细胞肥大的抑制作用。结论:circRNA_100395通过结合miR-31-5p发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多

关键词 心肌细胞肥大 环状RNA_100395 微小RNA-31-5p

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circRNA_0000994通过翻译蛋白抑制心肌细胞肥大相关基因表达 被引量：2

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作者 郭继深 丰嘉欣 +7 位作者 温艺红 陈泽润 李艺 朱杰宁 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1756-1764,共9页

目的:研究环状RNA(circRNA)_0000994对心肌细胞肥大表型的调控作用及机制。方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=18)与心力衰竭(HF)病人(n=28)心肌组织中circRNA_0000994及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。通过分... 目的:研究环状RNA(circRNA)_0000994对心肌细胞肥大表型的调控作用及机制。方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=18)与心力衰竭(HF)病人(n=28)心肌组织中circRNA_0000994及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。通过分离和培养新生小鼠心室肌细胞(NMVCs),利用重组腺病毒载体介导circRNA_0000994过表达并检测其对NMVCs肥大表型的影响。采用鬼笔环肽染色检测circRNA_0000994对血管紧张素II(Ang II)诱导的NMVCs肥大反应的影响。人AC16心肌细胞过表达circRNA_0000994后,利用质谱shotgun技术鉴定circRNA_0000994预期翻译蛋白(简称SLC8A1-605aa)的特征性肽段序列。利用NMVCs先后过表达circRNA_0000994及转染siRNA-SLC8A1-605aa,检测SLC8A1-605aa表达对circRNA_0000994抑制NMVCs肥大表型的影响。结果:在HF病人心肌组织中,circRNA_0000994及SLC8A1 mRNA的表达显著增加。过表达circRNA_0000994可降低NMVCs中心脏肥大相关基因肌球蛋白重链7(MYH7)、骨骼肌肌动蛋白α1(ACTA1)和心房钠尿肽(ANP)的表达,抑制Ang II诱导的NMVCs肥大反应(P<0.01)。Western blot及质谱shot-gun分析结果显示,circRNA_0000994可翻译SLC8A1-605aa蛋白。过表达circRNA_0000994和SLC8A1-605aa可一致地抑制NMVCs中心脏肥大相关基因表达,而抑制SLC8A1-605aa表达则可逆转circRNA_0000994对NMVCs肥大表型的抑制作用。结论:circRNA_0000994通过翻译SLC8A1-605aa蛋白发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多

关键词 心脏肥大 环状RNA_0000994 溶质载体家族8成员A1

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CircRNA_100395通过结合miR-144-3p抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达 被引量：10

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作者 温艺红 杨真祯 +5 位作者 张铭 朱杰宁 杨莹 符永恒 方咸宏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期875-883,共9页

【目的】研究环形RNA circRNA_100395调节心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用机制。【方法】CircRNAs表达谱芯片分析结合实时荧光定量PCR验证circRNA_100395在长期持续性房颤(AF)病人左心耳组织中的表达。检测血管紧张素Ⅱ(Ang-... 【目的】研究环形RNA circRNA_100395调节心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用机制。【方法】CircRNAs表达谱芯片分析结合实时荧光定量PCR验证circRNA_100395在长期持续性房颤(AF)病人左心耳组织中的表达。检测血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导人心房肌成纤维细胞(HAFs)中circRNA_100395的表达及在细胞核质中分布情况。利用放线菌素D实验检测circRNA_100395的RNA稳定性。制备重组circRNA_100395腺病毒(rAd-circRNA_100395)并感染HAFs,检测HAFs中纤维化相关基因Col1a1、Col3a1和Acta2的mRNA和蛋白表达。通过双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验分别鉴定circRNA_100395与微小RNA miR-144-3p的结合作用。【结果】Masson染色结果显示AF病人心耳组织的纤维化明显加重(P<0.01)。CircRNA_100395在AF患者心耳组织中表达降低(P<0.05),但在Ang-Ⅱ诱导的HAFs中表达明显升高(P<0.05),且主要分布于HAFs细胞质内。放线菌素D实验证明circRNA_100395的RNA稳定性明显高于其宿主基因KLHL20 mRNA。过表达circRNA_100395抑制HAFs中纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验和RNA Pull-down实验均证实circRNA_100395与miR-144-3p存在特异性的结合作用。CircRNA_100395可抑制miR-144-3p促HAFs中纤维化相关基因表达的作用。【结论】CircRNA_100395通过特异结合miR-144-3p来发挥抑制纤维化相关基因表达的作用。 展开更多

关键词 心肌纤维化 人心房肌成纤维细胞 环状RNA 微小RNA

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核内miR-199b-5p通过上调CDK9表达促进心肌细胞肥大 被引量：5

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作者 易芷瑶 赵安职 +6 位作者 张铭 曾妮 朱杰宁 杨莹 严钰敏 郭惠明 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期193-201,共9页

目的:研究核内微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制。方法:利用RT-qPCR检测健康人与心衰患者心肌组织中miR-199b-5p的表达水平。通过核质分离及RT-qPCR技术确定miR-199b-5p在人心肌AC16细胞中的核质分布。原... 目的:研究核内微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制。方法:利用RT-qPCR检测健康人与心衰患者心肌组织中miR-199b-5p的表达水平。通过核质分离及RT-qPCR技术确定miR-199b-5p在人心肌AC16细胞中的核质分布。原代分离培养C57BL/6乳小鼠心室肌细胞(NMVCs),转染miR-199b-5p mimic,利用RT-qPCR和Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、MYH7/β-肌球蛋白重链(β-MHC)和细胞周期蛋白依赖性激酶9(CDK9)表达。敲减NMVCs中CDK9基因表达,检测其对miR-199b-5p诱导的心肌细胞肥大相关基因表达的影响。双萤光素酶报告基因实验确定miR-199b-5p对CDK9基因的转录激活作用及与其启动子区的结合作用。通过ChIP-PCR实验验证miR-199b-5p通过募集RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)和p300参与CDK9基因的转录激活。结果:RT-qPCR结果显示心衰患者心肌中miR-199b-5p表达增加。核质分离和RT-qPCR结果显示人心肌AC16细胞中miR-199b-5p在胞核中富集存在。转染miR-199b-5p mimic能显著提高NMVCs中ANP、MYH7/β-MHC和CDK9表达。抑制CDK9表达可逆转miR-199b-5p的促心肌细胞肥大作用。双萤光素酶报告基因实验显示miR-199b-5p可增加CDK9基因的转录激活,miR-199b-5p与CDK9基因启动子区存在特异的结合位点。ChIP-PCR实验显示miR-199b-5p能募集PolⅡ和p300到CDK9基因启动子区,参与CDK9基因的转录激活。结论:核内miR-199b-5p通过转录激活CDK9基因发挥促进心肌细胞肥大作用。 展开更多

关键词 微小RNA-199b-5p 细胞周期蛋白依赖性激酶9 心肌细胞肥大

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PTBP1介导长链非编码RNA RP11-879F14.2发挥抑制心肌纤维化的作用 被引量：2

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作者 杨莹 郭晶 +5 位作者 温艺红 黄宇晴 易芷瑶 朱杰宁 方咸宏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期33-41,共9页

【目的】研究长链非编码RNA(lncRNA)RP11-879F14.2调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及机制。【方法】对心衰患者及健康对照者心肌组织进行Masson染色检测心肌胶原水平。lncRNA表达谱芯片检测心衰患者及健康对照者心肌中lncRNAs的表... 【目的】研究长链非编码RNA(lncRNA)RP11-879F14.2调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及机制。【方法】对心衰患者及健康对照者心肌组织进行Masson染色检测心肌胶原水平。lncRNA表达谱芯片检测心衰患者及健康对照者心肌中lncRNAs的表达变化,实时定量荧光PCR(RT-qPCR)验证RP11-879F14.2在心衰患者心肌中的表达。利用重组RP11-879F14.2腺病毒(rAd-RP11-879F14.2)感染人心房肌成纤维细胞(HAFs),检测纤维化相关基因Col1a1,Col3a1和Acta2表达。RT-qPCR检测HAFs的核/质组分中RP11-879F14.2的水平。基于生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验鉴定RP11-879F14.2与多聚嘧啶区结合蛋白(PTBP1)的结合作用。检测敲低HAFs中PTBP1表达对RP11-879F14.2调控心肌纤维化相关基因表达的影响。【结果】Masson染色结果显示,心衰病人心肌组织发生明显纤维化。RT-qPCR结果证实RP11-879F14.2在心衰患者心肌组织中表达增加(P<0.01)。过表达RP11-879F14.2可在RNA及蛋白水平显著抑制心肌纤维化相关基因表达。核质分离及RT-qPCR检测结果证实RP11-879F14.2主要分布于细胞核中。RP11-879F14.2可与PTBP1结合,并促进HAFs中PTBP1表达,而敲低PTBP1可逆转RP11-879F14.2抑制HAFs中纤维化相关基因表达的作用。【结论】PTBP1可介导RP11-879F14.2发挥抑制心肌纤维化的作用。 展开更多

关键词 长链非编码RNA lncRNA RP11-879F14.2 PTBP1 心肌纤维化 心肌成纤维细胞

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FGF7通过上调SOD2抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达 被引量：2

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作者 黄宇晴 温艺红 +6 位作者 张铭 朱杰宁 杨莹 严钰敏 易芷瑶 曾妮 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期611-618,共8页

目的:研究成纤维细胞生长因子7(FGF7)调控心肌纤维化相关基因表达的作用机制。方法:利用mRNA表达谱芯片检测心衰患者心肌组织与健康对照心肌组织以及重组FGF7腺病毒感染小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)和正常对照mCFs中差异表达的基因。血管... 目的:研究成纤维细胞生长因子7(FGF7)调控心肌纤维化相关基因表达的作用机制。方法:利用mRNA表达谱芯片检测心衰患者心肌组织与健康对照心肌组织以及重组FGF7腺病毒感染小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)和正常对照mCFs中差异表达的基因。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导mCFs建立心肌纤维化的细胞模型。流式细胞术检测过表达FGF7对mCFs细胞周期的影响。利用重组FGF7腺病毒感染mCFs,RT-qPCR及Western blot检测FGF7、Ⅰ型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和肌动蛋白α2(Acta2)等纤维化相关基因的表达,并检测蛋白激酶B(PKB/Akt)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的活化情况。用siRNA沉默mCFs中超氧化物歧化酶2(SOD2)的表达或用AMPK抑制剂compound C抑制mCFs中AMPK的活性后,检测过表达FGF7的mCFs中心肌纤维化相关基因表达的变化。结果:心衰患者心肌组织及AngⅡ诱导的mCFs中FGF7的表达显著降低(P<0.05)。过表达FGF7不影响mCFs的细胞周期,但可降低mCFs中Col1a1、Col3a1和Acta2的表达(P<0.05)。过表达FGF7的mCFs中SOD2表达和磷酸化AMPK水平增加(P<0.05),但磷酸化Akt水平无显著变化(P>0.05)。沉默SOD2可逆转FGF7抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用,而compound C可减弱FGF7上调SOD2表达和抑制纤维化相关基因表达的作用。结论:FGF7通过激活AMPK来增加SOD2表达,从而发挥抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子7 超氧化物歧化酶2 心肌成纤维细胞 心肌纤维化

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