文摘目的:探讨虎杖苷(polydatin,PD)对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导的神经元损伤及急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的保护作用机制。方法:体外实验以小鼠海马神经元细胞系HT22为研究对象。采用CCK-8法检测PD的细胞毒性:设置0、1、3、10、30、100μM共6个PD浓度组,处理24h后检测细胞活力,确定安全浓度范围;在OGD造模(24h)同时,分别加入不同浓度PD(0、3、10、30μM)干预,CCK-8法检测细胞活力,筛选最佳保护浓度。通过免疫荧光、Western blot(WB)检测自噬标志物LC3和P62蛋白表达;透射电镜观察自噬小体形成;TUNEL染色评估细胞凋亡率。体内实验采用C57BL/6小鼠,建立Allen′s打击法制备急性SCI模型。动物分为假手术组、SCI模型组、PD治疗组(20mg/kg),每组n=10。给药7d、14d取材,HE染色观察脊髓组织7d、14d病理变化;免疫荧光检测损伤14d胶质瘢痕(GFAP+)、神经元存活(MAP2+)、细胞增殖(BrdU+)及自噬水平(LC3Ⅱ)。结果:体外实验结果显示,1~100μM浓度的PD对HT22细胞未表现出明显的细胞毒性作用。OGD造模后选定10μM作为最佳给药浓度,与OGD组相比,10μM PD处理可显著提高OGD后的细胞活力[OGD组:(54.63±3.90)%vs OGD+PD(10μM)组:(84.35±1.38)%,P<0.05],并有效减缓自噬活化进程,具体表现为LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降(OGD组:11.0±0.57 vs OGD+PD组:3.50±0.28,P<0.05)、P62蛋白积累增加(OGD组:0.55±0.04 vs OGD+PD组:0.93±0.06,P<0.05)、自噬溶酶体数量减少,同时细胞凋亡率显著降低[OGD组:(35.33±2.6)%vs OGD+PD组:(19.67±1.76)%,P<0.05]。体内实验中,HE染色结果证实,PD治疗组脊髓组织的病理损伤较SCI模型组明显减轻;免疫荧光检测显示,PD治疗可抑制纤维瘢痕形成(SCI组:2.32±0.19mm^(2)vs PD组:1.07±0.24mm^(2),P<0.05),减少神经元损伤(SCI组:1.72±0.28mm vs PD组:0.93±0.12mm,P<0.05),以及促进细胞增殖[SCI组:(16.14±2.24)%vs PD组:(39.09±3.16)%,P<0.05],并下调LC3Ⅱ蛋白的表达水平(SCI组:62.81±5.25 vs PD组:34.09±3.98,P<0.05)。结论:PD通过抑制自噬和减少凋亡,改善神经损伤,其双重调控机制为SCI治疗提供了潜在新策略。
